馬 東 李可然 王秀麗

（天津坤禾生物科技集團(tuán)股份有限公司 天津 300001）

能力驗(yàn)證是指利用實(shí)驗(yàn)室間比對(duì)，按照預(yù)先制定的準(zhǔn)則來評(píng)價(jià)參加者的能力［1］。能力驗(yàn)證作為一種重要的質(zhì)量控制手段，在檢測(cè)領(lǐng)域已廣被接受。

近年來，隨著發(fā)酵行業(yè)的快速發(fā)展，發(fā)酵水平的不斷提高，實(shí)驗(yàn)室亟需對(duì)高含量有效活菌數(shù)的檢測(cè)能力進(jìn)行驗(yàn)證。然而，中國(guó)合格評(píng)定國(guó)家認(rèn)可委員會(huì)（CNAS）暫未開展高含量有效活菌數(shù)檢測(cè)能力驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)，也未見相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道。通過對(duì)高含量枯草芽孢桿菌（50億/mL）中有效活菌數(shù)檢測(cè)能力驗(yàn)證進(jìn)行研究，以期推動(dòng)完善能力驗(yàn)證在該領(lǐng)域的應(yīng)用。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

實(shí)驗(yàn)儀器和試劑請(qǐng)見表1、表2。

1.2 樣品制備

從公司現(xiàn)有庫存中取50 億/mL 枯草芽孢桿菌制劑成品，室溫下攪拌（600 r/min）6 h，分裝到規(guī)格為60 mL 的西林瓶中，每瓶裝入50 mL 樣品，共50瓶樣品，編號(hào)。

1.3 樣品的均勻性與穩(wěn)定性檢驗(yàn)

按照《能力驗(yàn)證樣品均勻性和穩(wěn)定性評(píng)價(jià)指南》（CNAS-GL003：2018）［2］、《能力驗(yàn)證提供者認(rèn)可準(zhǔn)則在微生物領(lǐng)域的應(yīng)用說明》（CNASCL03-A001：2018）［3］的要求進(jìn)行。

1.3.1 樣品均勻性

從樣品中隨機(jī)抽取10個(gè)樣品進(jìn)行均勻性檢驗(yàn)，每個(gè)樣品在相同條件下重復(fù)測(cè)試2次。測(cè)試數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)換為以10 為底的對(duì)數(shù)后進(jìn)行均勻性評(píng)價(jià)。以單因子方差分析（F檢驗(yàn)）作為初步評(píng)價(jià)均勻性的方法，在參加者的檢測(cè)結(jié)果返回后，獲得σ，再利用Ss≤0.3σ準(zhǔn)則進(jìn)行評(píng)價(jià)［4］。

表1 實(shí)驗(yàn)儀器

表2 實(shí)驗(yàn)試劑

1.3.2 樣品穩(wěn)定性

從樣品中隨機(jī)抽取5個(gè)進(jìn)行穩(wěn)定性檢驗(yàn)，將均勻性檢驗(yàn)數(shù)據(jù)作為穩(wěn)定性檢驗(yàn)的第一次測(cè)試數(shù)據(jù)，模擬運(yùn)輸條件放置60 d 后，進(jìn)行第二次測(cè)試。每個(gè)樣品在相同條件下重復(fù)測(cè)試2 次。以t檢驗(yàn)作為初步評(píng)價(jià)穩(wěn)定性的方法，在參加者的檢測(cè)結(jié)果返回后，獲得σ，再利用|-x--y|≤0.3σ準(zhǔn)則確認(rèn)樣品是否穩(wěn)定［4］。

1.4 檢測(cè)方法

實(shí)驗(yàn)樣品均按照《農(nóng)用微生物菌劑》（GB 20287-2006）［5］、《微生物肥料產(chǎn)品檢驗(yàn)規(guī)程》（NY/T 2321-2013）［6］檢測(cè)有效活菌數(shù)。

1.5 數(shù)據(jù)處理

對(duì)供試樣品檢測(cè)結(jié)果經(jīng)對(duì)數(shù)轉(zhuǎn)換后，按式（1）計(jì)算z值：

其中，x為參加者檢測(cè)結(jié)果；X為指定值；σ為能力評(píng)定標(biāo)準(zhǔn)差。

依據(jù)CNAS-CL03-A001：2018《能力驗(yàn)證提供者認(rèn)可準(zhǔn)則在微生物領(lǐng)域的應(yīng)用說明》，以z值評(píng)價(jià)參加者結(jié)果，如表3。

表3 CNAS標(biāo)準(zhǔn)評(píng)價(jià)準(zhǔn)則

2 結(jié)果與討論

本次能力驗(yàn)證共有18 個(gè)參加者，主要為生產(chǎn)企業(yè)和第三方檢測(cè)機(jī)構(gòu)。

2.1 能力驗(yàn)證樣品的均勻性和穩(wěn)定性

2.1.1 均勻性檢驗(yàn)

由表4 可知，F(xiàn)＜F臨界值，表明樣品間無顯著性差異，樣品是均勻的。

表4 樣品均勻性檢驗(yàn)

2.1.2 穩(wěn)定性檢驗(yàn)

由表5 可知，t＜t臨界，表明樣品在測(cè)試期間是穩(wěn)定的，能夠滿足能力驗(yàn)證樣品的要求。

2.2 檢測(cè)結(jié)果和數(shù)理統(tǒng)計(jì)

按照CNAS-GL002：2018《能力驗(yàn)證結(jié)果的統(tǒng)計(jì)處理和能力評(píng)價(jià)指南》附錄A 中算法A 確定指定值和能力評(píng)定標(biāo)準(zhǔn)差[7]。確定指定值為：9.672，能力評(píng)定標(biāo)準(zhǔn)差為：0.054 6。按1.5 計(jì)算z 值，并按大小順序排列作柱狀圖（如圖1 所示），圖上標(biāo)有參加者的代碼，每個(gè)參加者均可通過該圖將其結(jié)果與其他參加者的差異進(jìn)行比較，從而了解其檢測(cè)水平，發(fā)現(xiàn)檢測(cè)方面存在的問題與不足，提升檢測(cè)能力。

表5 樣品穩(wěn)定性檢驗(yàn)統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果

圖1 參加者的檢測(cè)結(jié)果Z值柱狀圖

根據(jù)《能力驗(yàn)證提供者認(rèn)可準(zhǔn)則在微生物領(lǐng)域的應(yīng)用說明》（CNAS-CL03-A001：2018）將本次能力驗(yàn)證結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，結(jié)果見表6。

表6 能力驗(yàn)證結(jié)果評(píng)價(jià)表

2.3 有問題結(jié)果、不滿意結(jié)果的原因分析

（1）母液制備，部分實(shí)驗(yàn)室未嚴(yán)格按照標(biāo)準(zhǔn)要求10 mL樣品加入到90 mL無菌水中；

（2）梯度稀釋，部分實(shí)驗(yàn)室每根管未準(zhǔn)確移9 mL 無菌水，而是采用移好的9 mL 水滅菌后直接使用，稀釋過程中試管未充分振蕩均勻；

（3）培養(yǎng)基，部分實(shí)驗(yàn)室的培養(yǎng)基沒有經(jīng)過培養(yǎng)基試用性檢查。

3 結(jié)論

本文首次報(bào)道了高含量有效活菌數(shù)的檢測(cè)能力驗(yàn)證計(jì)劃，完善能力驗(yàn)證在該領(lǐng)域的應(yīng)用。本次能力驗(yàn)證按|z|≤2.0 評(píng)定，滿意率為83.3%，表明大部分參試者具備高含量有效活菌數(shù)的檢測(cè)能力，客觀反映了參試者的檢測(cè)水平。對(duì)于不滿意結(jié)果的參試者，應(yīng)積極查找原因，采取措施，進(jìn)一步加強(qiáng)檢測(cè)能力。