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        湖南地區(qū)9 205例孕婦B族鏈球菌感染狀況分析

        2020-03-03 16:44:02周梅華劉岱璿
        檢驗醫(yī)學(xué) 2020年1期
        關(guān)鍵詞:生期分泌物直腸

        唐 笑, 甘 甜, 周梅華, 代 冰, 劉岱璿

        (長沙金域醫(yī)學(xué)檢驗所,湖南 長沙 410006)

        B族鏈球菌(group B Streptococcus,GBS)是兼性厭氧的革蘭陽性菌,同時也是條件致病菌,常定植于直腸和陰道[1]。正常人群感染GBS后并不致病,但孕婦感染GBS后可導(dǎo)致圍生期嚴(yán)重感染[2],增加宮內(nèi)感染、胎膜早破、早產(chǎn)、產(chǎn)后出血、產(chǎn)褥感染、新生兒感染等風(fēng)險,還可造成新生兒肺炎、血流感染或腦膜炎等,同時給新生兒神經(jīng)功能造成損傷[3]。GBS被列為圍生期母嬰感染的主要致病菌之一[4-5]。本研究旨在分析湖南地區(qū)孕婦GBS感染情況,為臨床進(jìn)行早期預(yù)防和治療提供指導(dǎo),降低孕婦圍生期GBS感染風(fēng)險和新生兒感染的發(fā)病率。

        1 材料和方法

        1.1 樣本來源

        收集2017年9月—2018年8月湖南省14個地級行政區(qū)醫(yī)療機(jī)構(gòu)9 205例孕婦直腸拭子及陰道分泌物樣本。孕婦年齡16~46歲。

        1.2 儀器與試劑

        ABI 7500實時熒光PCR儀(美國ABI公司),B族鏈球菌核酸檢測試劑盒[博爾誠(北京)科技有限公司]。

        1.3 樣本采集和處理

        1.3.1 孕婦生殖道分泌物 先拭去陰道過多的分泌物,采用無菌拭子插入陰道內(nèi)1/3處,沿陰道壁輕輕旋轉(zhuǎn)取得分泌物,將采集的拭子置于無菌管中,密封送檢。

        1.3.2 孕婦直腸分泌物 將拭子插入肛門,在肛門括約肌以上約2.5 cm處,沿腸壁輕輕旋轉(zhuǎn)取得樣本,將采集拭子置于無菌管中,密封送檢。樣本一經(jīng)送檢,盡快檢測。

        1.3.3 樣本存放 待測樣本在2~8 ℃保存不超過24 h,-18 ℃以下保存不超過4 d。

        1.4 檢測方法

        1.4.1 提取DNA 取1 mL含有分泌物的0.9%氯化鈉溶液至1.5 mL離心管中,15 870×g離心10 min,棄上清,沉淀(如不明顯可重復(fù)離心),加入1 mL無菌0.9%氯化鈉溶液混勻,15 870×g離心5 min,棄上清。沉淀加入50 μL DNA提取液充分混勻,99~100 ℃加熱處理10 min,15 870×g離心10 min后提取DNA。

        1.4.2 擴(kuò)增 按樣本數(shù)量(包含質(zhì)控)分裝GBS聚合酶鏈反應(yīng)(polymerase chain reaction,PCR)反應(yīng)液,按每管35 μL分裝至0.2 mL PCR反應(yīng)管中,每管加入5 μL樣本DNA進(jìn)行擴(kuò)增。程序設(shè)定為:50 ℃ 2 min;95 ℃ 5 min;95 ℃15 s,60 ℃ 35 s,45個循環(huán)。在60 ℃時分別檢測FAM通道和HEX通道。

        1.4.3 結(jié)果分析 閾值設(shè)定在空白對照正常擴(kuò)增曲線的上方,基線設(shè)定選擇3~5個循環(huán)。陰性結(jié)果判定:如果FAM通道無循環(huán)閾值(cycle threshold,Ct)顯示,而HEX通道信號正常(Ct值≤35.00),則該樣本為陰性。陽性結(jié)果判定:(1)若樣本的FAM通道Ct值≤38.00且擴(kuò)增曲線正常則判定樣本為陽性;(2)若樣本的Ct值為>38.00~≤45.00,則對該樣本進(jìn)行復(fù)查,如復(fù)查結(jié)果的Ct值仍為>38.00~≤45.00或≤38.00,則判定為陽性;如果Ct值不顯示且HEX通道信號正常(Ct值≤35.00),則判定為陰性。

        1.5 統(tǒng)計學(xué)方法

        采用 SPSS 20.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計分析。計數(shù)資料采用率表示,組間比較采用χ2檢驗。以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

        2 結(jié)果

        2.1 直腸樣本和陰道樣本GBS陽性率比較

        9 205例孕婦中有719例GBS陽性,陽性率為7.81%。其中直腸拭子樣本5 267例,陽性516例(9.80%);陰道分泌物樣本3 938例,陽性203例(5.15%);直腸和陰道部位同時陽性548例,陽性率為7.61%(548/7 204)。直腸拭子樣本GBS陽性率高于陰道分泌物樣本(P<0.05)。

        2.2 不同年齡孕婦GBS陽性率比較

        >39歲孕婦GBS陽性率最高,<20歲孕婦GBS陽性率最低。見表1。

        表1 不同年齡孕婦GBS陽性率

        3 討論

        細(xì)菌培養(yǎng)是實驗室檢測GBS的金標(biāo)準(zhǔn)。但是培養(yǎng)法需要分離細(xì)菌,檢測耗時長,操作復(fù)雜,存在一定程度的漏檢可能。本研究采用實時熒光定量PCR方法檢測病原體核酸,能快速、靈敏、準(zhǔn)確地篩查出GBS。本研究中直腸拭子樣本陽性率(9.80%)明顯高于陰道分泌物樣本(5.15%)(P<0.05),與栗艷芳等[6]的報道一致,說明不同部位取材對于GBS的陽性率有影響。分析原因可能是直腸的環(huán)境相對于弱酸性的陰道環(huán)境更利于GBS生長繁殖所致[7]。

        本研究分析了不同年齡組GBS檢查陽性率,發(fā)現(xiàn)高齡產(chǎn)婦(≥35歲)的GBS陽性檢出率最高,可能與雌激素水平或者免疫力有關(guān)。

        據(jù)文獻(xiàn)報道,印度、中國、尼日利亞、美國和印度尼西亞是孕婦GBS定植居前5位的國家[8]。但相關(guān)研究結(jié)果表明,我國GBS檢測陽性率普遍不高,遠(yuǎn)低于美國疾病預(yù)防控制中心統(tǒng)計數(shù)據(jù)(10%~30%)。對比近幾年我國部分地區(qū)已報道的GBS篩查情況,發(fā)現(xiàn)湖南地區(qū)孕婦GBS陽性檢出率在國內(nèi)處于中等水平,低于江西(8.76%)[7]、佛山(10.15%)[9]和秦皇島(9.50%),高于中山(6.70%)、南京(4.16%)、上海(6.30%)、深圳(4.50%)、常州(4.20%)、呼和浩特(4.80%)[10-16]。

        孕婦感染GBS危害較為嚴(yán)重,會導(dǎo)致多種不良妊娠結(jié)局,誘發(fā)孕婦和新生兒的各種疾病,甚至死亡。歐美地區(qū)已廣泛開展圍生期孕婦GBS感染篩查,但我國重視程度不足,應(yīng)加大孕婦GBS感染篩查的推廣力度,及時采取相應(yīng)的預(yù)防和治療措施,降低GBS感染發(fā)生率,同時建議在條件允許的情況下接種母體GBS疫苗,有效預(yù)防妊娠期婦女GBS感染。

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