杜顯龍 錢 進(jìn) 楊曉理

作者單位：云南富民諾維生物科技有限公司 650000

神經(jīng)酸(Nervonic Acid)，化學(xué)名順-15-二十四碳烯酸(Cis-15-Tetracosenic Acid)，是一種單不飽和脂肪酸。神經(jīng)酸在神經(jīng)組織和腦中含量較高，是組成生物膜的重要物質(zhì)，是腦甙中髓質(zhì)(白質(zhì))的標(biāo)志物。大腦終生都需要一些特殊的營養(yǎng)成分，神經(jīng)酸是神經(jīng)細(xì)胞(特別是大腦細(xì)胞、視神經(jīng)細(xì)胞、周圍神經(jīng))生長、再發(fā)育和維持必須的“高級營養(yǎng)素”，對提高腦神經(jīng)的活躍程度，防止腦神經(jīng)衰老有很大作用[1]。

在國外，神經(jīng)酸最早是從鯊魚腦中提取的，故別名鯊油酸(Selacholeic Acid)，由于國際社會禁止大量捕殺鯊魚，神經(jīng)酸的來源陷入絕境。后來，我國從享有“植物王國”美譽(yù)的云南省發(fā)現(xiàn)了一種我國獨(dú)有的天然植物，并研制出第一個(gè)植物源神經(jīng)酸口服制劑——神經(jīng)酸膠囊。近年來，國內(nèi)神經(jīng)酸的研究已經(jīng)延伸到元寶楓籽油、蒜頭果油等富含神經(jīng)酸的植物種植[2，3]、提取工藝[4]及應(yīng)用[5，6]。在歐美發(fā)達(dá)國家，神經(jīng)酸的研究主要在于神經(jīng)系統(tǒng)疾病、代謝內(nèi)分泌疾病的輔助治療[7，8]；添加到嬰幼兒奶粉使之更接近母乳成分；用于化妝品等。用于食品行業(yè)，相關(guān)的毒理試驗(yàn)研究較少，僅傅穎[9]等通過急性毒性試驗(yàn)和遺傳毒性試驗(yàn)證實(shí)神經(jīng)酸的大、小鼠經(jīng)口急性毒性半數(shù)致死量LD50>10g/kg，并未做30天喂養(yǎng)或90天喂養(yǎng)試驗(yàn)。為保證神經(jīng)酸的食用安全性，參考《保健食品檢驗(yàn)與評價(jià)技術(shù)規(guī)范》[10]，對純度≥85%的神經(jīng)酸(順-15-二十四碳烯酸)進(jìn)行了90天喂養(yǎng)試驗(yàn)。

1.材料與方法

1.1 樣品 神經(jīng)酸(順-15-二十四碳烯酸)，由云南某科技開發(fā)有限公司提供，純度≥85%。樣品為白色片狀粉末。人體每日推薦用量為300mg/60(kg·bw)[5mg/(kg·bw)]。

1.2 試驗(yàn)動物 選用山東大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物中心提供的健康SPF級Wistar大鼠。實(shí)驗(yàn)環(huán)境溫度(22±2)℃，相對濕度50%±10%。

1.3 樣品制備及動物處理 體重60～80g的斷乳大鼠100只，隨機(jī)分為陰性對照組(等體積溶劑)、三個(gè)受試樣品組[500mg/(kg·bw)、1000mg/(kg·bw)、1500mg/(kg·bw)]和溶劑對照組，每組20只，雌雄各半。低、中、高劑量組分別稱取5g、10g、15g，送檢樣品置于(43±2)℃水浴中將樣品融化，然后用玉米油分別稀釋并定容至30ml，灌胃量均為0.3ml/100(g·bw)，相當(dāng)于原人體每日推薦用量的100倍、200倍、300倍。單籠喂養(yǎng)，自由飲食，連續(xù)90天每日灌胃1次。

1.4 觀察指標(biāo)

1.4.1 一般情況觀察：每天觀察并記錄動物的表現(xiàn)和行為、有無中毒和死亡情況。記錄每周體重和飼料剩余量，計(jì)算食物利用率。

1.4.2 血液學(xué)指標(biāo)：測定血紅蛋白、白細(xì)胞計(jì)數(shù)、紅細(xì)胞計(jì)數(shù)及其分類。

1.4.3 血液生化學(xué)指標(biāo)：測定谷草轉(zhuǎn)氨酶、谷丙轉(zhuǎn)氨酶、肌酐、尿素氮、膽固醇、甘油三酯、血糖、人血白蛋白、總蛋白等生化學(xué)指標(biāo)。

1.4.4 病理檢查：對試驗(yàn)動物進(jìn)行大體檢查,保存重要器官和固定組織,稱重臟器(肝、脾、腎、胸腺、睪丸)，計(jì)算相對重量(肝/體比值)，并進(jìn)行病理組織學(xué)檢查。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 11.0統(tǒng)計(jì)軟件對數(shù)據(jù)分別進(jìn)行One-way ANOVA分析、Dunnett檢驗(yàn)，檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。

2.結(jié)果與分析

2.1 一般情況觀察 各組動物生長發(fā)育和日?；顒泳?，無中毒表現(xiàn),無死亡。

2.2 神經(jīng)酸對大鼠體重、增重及食物利用率的影響 以500mg/(kg·bw)、1000mg/(kg·bw)、1500mg/(kg·bw)劑量的神經(jīng)酸連續(xù)90天灌胃給予大鼠。與陰性對照組相比，各劑量組大鼠體重、體重增加量、進(jìn)食量和食物利用率均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。90天喂養(yǎng)結(jié)束時(shí)，與陰性對照組相比,各劑量組大鼠總體重增加量、總進(jìn)食量和總食物利用率均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。受篇幅影響，此處實(shí)驗(yàn)結(jié)果統(tǒng)計(jì)表省略。

2.3 神經(jīng)酸對大鼠血液學(xué)指標(biāo)的影響 以500mg/(kg·bw)、1000mg/(kg·bw)、1500mg/(kg·bw)劑量的神經(jīng)酸連續(xù)90天灌胃給予大鼠，各劑量組大鼠的血紅蛋白、白細(xì)胞計(jì)數(shù)、紅細(xì)胞計(jì)數(shù)及其分類與陰性對照組相比均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)，見表1。

表1 神經(jīng)酸90天喂養(yǎng)試驗(yàn)血液學(xué)檢查結(jié)果(n=10)

2.4 神經(jīng)酸對大鼠血液生化指標(biāo)的影響 以500mg/(kg·bw)、1000mg/(kg·bw)、1500mg/(kg·bw)劑量的神經(jīng)酸連續(xù)90天灌胃給予大鼠，與陰性對照組相比，各劑量組大鼠的血液生化指標(biāo)無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)，見表2。

表2 神經(jīng)酸90天喂養(yǎng)試驗(yàn)血液生化檢驗(yàn)結(jié)果(n=10)

2.5 病理檢查 以500mg/(kg·bw)、1000mg/(kg·bw)、1500mg/(kg·bw)劑量的神經(jīng)酸連續(xù)90天灌胃給予大鼠，各劑量組大鼠大體觀察并未發(fā)現(xiàn)異常，與陰性對照組相比，臟器絕對重量及臟/體比值無顯著性差異(P>0.05)，見表3。高劑量組和對照組動物的主要臟器進(jìn)行組織病理切片檢查結(jié)果見表4。肝臟：對照組(雄1只)、高劑量組(雄1只)肝細(xì)胞輕度脂肪變性，表現(xiàn)為肝小葉局灶細(xì)胞胞漿內(nèi)邊界清楚的小脂滴，對照組(雄1只、雌1只)、高劑量組(雌1只)肝細(xì)胞點(diǎn)狀壞死，表現(xiàn)為肝小葉局灶內(nèi)可見數(shù)個(gè)細(xì)胞胞漿紅染、細(xì)胞核濃縮。與對照組比較，試驗(yàn)組送檢臟器(肝臟、脾臟、腎臟、胃、胸腺、十二指腸、睪丸或卵巢組織)未見有意義的病理改變。

表3 神經(jīng)酸對大鼠各臟器絕對重量及臟/體比值的影響

表4 各組織病理學(xué)檢查結(jié)果(只)

3.結(jié)論

90天喂養(yǎng)試驗(yàn)中，分別以人體每日推薦量的100倍、200倍、300倍的神經(jīng)酸連續(xù)90天給大鼠灌胃，與陰性對照組相比，各劑量組大鼠的體重、體重增加量、進(jìn)食量及食物利用率的差異均無顯著性(P>0.05)。與陰性對照組相比，各劑量組大鼠血液學(xué)指標(biāo)、血生化指標(biāo)、臟器絕對重量及臟/體比值的差異均無顯著性(P>0.05)。病理組織學(xué)檢查結(jié)果顯示，85%含量的神經(jīng)酸對受檢臟器無明顯損害。