沈蕙穎， 林孝怡， 楊 慧， 鄭建新

（1.上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬上海兒童醫(yī)學(xué)中心檢驗(yàn)科，上海 200127；2.上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬瑞金醫(yī)院檢驗(yàn)科，上海 200025）

臨床上較多疾病的診斷（如溶血性貧血、血栓性血小板減少性紫癜等）依賴于外周血異常紅細(xì)胞形態(tài)的檢查。雖然人工顯微鏡下細(xì)胞分類(lèi)仍然是外周血血細(xì)胞形態(tài)學(xué)分類(lèi)的金標(biāo)準(zhǔn)，但該方法費(fèi)時(shí)費(fèi)力，并且需要經(jīng)驗(yàn)豐富的技師來(lái)操作，不同技師間分類(lèi)結(jié)果差異較大。目前，市售的自動(dòng)化數(shù)字圖像分析系統(tǒng)，如CellaVision DM96（簡(jiǎn)稱DM96）自動(dòng)化數(shù)字圖像分析系統(tǒng)已實(shí)現(xiàn)了對(duì)外周血血涂片細(xì)胞形態(tài)的有效識(shí)別，極大程度地提高了分片效率。因其具有操作簡(jiǎn)便、快速、自動(dòng)化、可標(biāo)準(zhǔn)化等優(yōu)點(diǎn)，已在不少實(shí)驗(yàn)室較廣泛地應(yīng)用。本研究旨在評(píng)價(jià)DM96紅細(xì)胞形態(tài)預(yù)分類(lèi)結(jié)果與人工顯微鏡檢查結(jié)果之間的一致性。

1 材料和方法

1.1 標(biāo)本

采集上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬上海兒童醫(yī)學(xué)中心門(mén)診和住院貧血、骨髓纖維化、紅白血病、急慢性炎癥、球形紅細(xì)胞增多癥、異常血紅蛋白病、溶血尿毒癥綜合征等患兒外周血標(biāo)本500份，乙二胺四乙酸二鉀抗凝。

1.2 儀器

奧林巴斯CX21顯微鏡（日本奧林巴斯公司）；CellaVision DM96自動(dòng)化數(shù)字圖像分析系統(tǒng)（瑞典CellaVision AB公司）；SP-10涂片機(jī)（日本Sysmex公司）。

1.3 試劑

瑞氏-姬姆薩復(fù)合染色液（珠海貝索生物技術(shù)有限公司）。

1.4 方法

1.4.1 人工顯微鏡檢查 500份血標(biāo)本經(jīng)SP-10涂片機(jī)制片后，瑞氏-姬姆薩復(fù)合染色液染色，選擇血涂片厚薄均勻的部位，100×物鏡和10×目鏡下，計(jì)數(shù)8個(gè)視野中各種類(lèi)型異常紅細(xì)胞百分比。異常紅細(xì)胞形態(tài)特征及陽(yáng)性判斷標(biāo)準(zhǔn)參照2015年國(guó)際血液學(xué)標(biāo)準(zhǔn)化委員會(huì)（the International Council for Standardization in Haematology，ICSH）推薦標(biāo)準(zhǔn)[1]。

1.4.2 DM96紅細(xì)胞形態(tài)預(yù)分類(lèi) DM96由涂片掃描裝置和裝有血細(xì)胞分析軟件的計(jì)算機(jī)組成。外周血血涂片裝載到該系統(tǒng)后，儀器開(kāi)始自動(dòng)掃描涂片，并拍攝數(shù)碼照片。每張血涂片分析2 000～4 000個(gè)紅細(xì)胞，經(jīng)軟件識(shí)別后輸出預(yù)分類(lèi)結(jié)果。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

以人工顯微鏡下紅細(xì)胞形態(tài)分類(lèi)結(jié)果為金標(biāo)準(zhǔn)，計(jì)算DM96異常紅細(xì)胞形態(tài)預(yù)分類(lèi)結(jié)果的敏感性、特異性、一致性、假陽(yáng)性率和假陰性率。

2 結(jié)果

人工顯微鏡檢查發(fā)現(xiàn)500例患者標(biāo)本中350例患者為紅細(xì)胞形態(tài)中度或顯著異常，涵蓋嗜多色紅細(xì)胞（194例）、淚滴狀紅細(xì)胞（117例）、低色素紅細(xì)胞（60例）、大紅細(xì)胞（51例）、毫焦小體（39例）、小紅細(xì)胞（35例）、靶形紅細(xì)胞（30例）、球形紅細(xì)胞（25例）、鐮形紅細(xì)胞（21例）、棘形紅細(xì)胞（20例）、裂紅細(xì)胞（15例）、口形紅細(xì)胞（13例）等12種異常紅細(xì)胞形態(tài)。異常例數(shù)最多的紅細(xì)胞形態(tài)為嗜多色紅細(xì)胞（194例），異常例數(shù)最少的紅細(xì)胞形態(tài)為口形紅細(xì)胞（13例）。

DM96紅細(xì)胞形態(tài)預(yù)分類(lèi)結(jié)果的總準(zhǔn)確性為94.9%。敏感性隨紅細(xì)胞異常類(lèi)型而異（23.1%～89.7%），特異性為91.6%～99.8%，一致性為91.0%～98.8%，假陽(yáng)性率為0.2%～8.4%，假陰性率為10.3%～76.9%。見(jiàn)表1。

表1 DM96紅細(xì)胞形態(tài)預(yù)分類(lèi)性能 （%）

3 討論

目前，DM96白細(xì)胞分類(lèi)結(jié)果評(píng)價(jià)的研究較多，但對(duì)其異常紅細(xì)胞分類(lèi)的性能評(píng)價(jià)較少。本研究中DM96紅細(xì)胞預(yù)分類(lèi)結(jié)果的總體準(zhǔn)確性較高（94.9%），與先前的一項(xiàng)對(duì)比研究結(jié)果一致（92.0%）[2]。BRIGGS等[3]的研究結(jié)果顯示，DM96對(duì)嗜多色紅細(xì)胞、低色素紅細(xì)胞、小紅細(xì)胞、大紅細(xì)胞、紅細(xì)胞大小不均和畸形紅細(xì)胞預(yù)分類(lèi)結(jié)果的一致性為42%～87%，對(duì)預(yù)分類(lèi)結(jié)果進(jìn)行再分類(lèi)后，其一致性提高至74%～85%。最新發(fā)表的一項(xiàng)關(guān)于DM96異常紅細(xì)胞形態(tài)半定量分級(jí)系統(tǒng)結(jié)果準(zhǔn)確性的研究結(jié)果顯示，對(duì)于大多數(shù)異常紅細(xì)胞形態(tài)類(lèi)型，DM96半定量分級(jí)結(jié)果與手工鏡檢結(jié)果的一致性在可接受范圍內(nèi)（56.9%～100.0%），其對(duì)嗜多色紅細(xì)胞分級(jí)結(jié)果準(zhǔn)確性最低。對(duì)于橢圓形紅細(xì)胞、紅細(xì)胞碎片、鐮形紅細(xì)胞、球形紅細(xì)胞、靶形紅細(xì)胞、淚滴狀紅細(xì)胞、豪焦小體及含鐵小體分級(jí)結(jié)果的一致性均在80%以上[4]。

雖然多項(xiàng)研究結(jié)果均顯示DM96的總準(zhǔn)確性較高，但其對(duì)異常紅細(xì)胞形態(tài)分類(lèi)的敏感性因紅細(xì)胞異常類(lèi)型而異。本研究結(jié)果顯示，DM96對(duì)豪焦小體、嗜多色紅細(xì)胞、淚滴狀紅細(xì)胞識(shí)別的敏感性較高，分別為89.7%、88.1%和86.3%，對(duì)大紅細(xì)胞和口形紅細(xì)胞識(shí)別的敏感性較低，分別為33.3%和23.1%。其原因可能是口形紅細(xì)胞陽(yáng)性標(biāo)本例數(shù)過(guò)少、部分大紅細(xì)胞儀器掃描后沒(méi)有列入自動(dòng)判別或紅細(xì)胞識(shí)別軟件功能不足等。HORN等[5]的研究結(jié)果顯示，DM96對(duì)紅細(xì)胞凝集和棘形紅細(xì)胞的識(shí)別敏感性較低，分別為33%和47%，對(duì)口形紅細(xì)胞和鐮形紅細(xì)胞的識(shí)別敏感性較高，均為100%。2項(xiàng)研究對(duì)不同類(lèi)型異常紅細(xì)胞識(shí)別敏感性差異可能與所選取的標(biāo)本有關(guān)，也可能與研究使用的異常疾病的類(lèi)型不同有關(guān)，還可能與制片、染液質(zhì)量等因素有關(guān)。DM96敏感性因紅細(xì)胞異常形態(tài)而異的原因尚不明確，也無(wú)相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道，有待于在以后的工作中進(jìn)一步摸索和總結(jié)。理想狀態(tài)下，應(yīng)盡量提高儀器對(duì)診斷價(jià)值較大的異常紅細(xì)胞形態(tài)（如靶形紅細(xì)胞、鐮形紅細(xì)胞、淚滴狀紅細(xì)胞、寄生蟲(chóng)進(jìn)入紅細(xì)胞內(nèi)、球形紅細(xì)胞和裂紅細(xì)胞等）分類(lèi)結(jié)果的敏感性，從而減少手工復(fù)檢次數(shù)。CRIEL等[6]的研究結(jié)果表明，通過(guò)優(yōu)化各紅細(xì)胞形態(tài)的陰性和陽(yáng)性臨界值，可使DM96對(duì)診斷價(jià)值較大的異常紅細(xì)胞形態(tài)分類(lèi)敏感性均達(dá)80%以上。

綜上所述，DM96對(duì)異常紅細(xì)胞分類(lèi)的特異性較高，但其敏感性因不同紅細(xì)胞異常形態(tài)而異。臨床上應(yīng)優(yōu)化紅細(xì)胞形態(tài)陰性和陽(yáng)性臨界值，提高其敏感性。同時(shí)必須特別關(guān)注敏感性較低的異常紅細(xì)胞類(lèi)型，謹(jǐn)慎對(duì)待儀器分類(lèi)結(jié)果，必要時(shí)進(jìn)行人工顯微鏡復(fù)檢。

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