羅爽， 花京剩

臺州市立醫(yī)院血液腫瘤內(nèi)科(浙江臺州 318000)

骨髓增殖腫瘤屬于一種惡性克隆性造血干細胞疾病，患者主要的臨床特征是骨髓造血增殖失調(diào)，造成外周血粒細胞、血小板、紅細胞數(shù)量顯著增加，患者也容易發(fā)生多部位血栓、急性白血病等，骨髓增殖腫瘤會導(dǎo)致細胞成熟分化出現(xiàn)障礙，嚴重影響患者的生存質(zhì)量[1-2]。相關(guān)研究指出，骨髓增殖腫瘤在老年人群中發(fā)病率高，患者首發(fā)癥狀不明顯，未見特異性，主要表現(xiàn)為頭昏和乏力、肝脾腫大、血栓產(chǎn)生[3]。典型的ph陰性骨髓增殖腫瘤主要有真性紅細胞增多癥、原發(fā)性血小板增癥以及原發(fā)性骨髓纖維化。ph染色體BCR/ABL融合基因主要在慢性粒細胞白血病患者中體現(xiàn)，具有特異性，在發(fā)病機制中發(fā)揮重要作用[4]。JAK2屬于一種組成性酪氨酸激酶，主要作用是激活JAK-STAT信號通路。相關(guān)研究指出，70%的JAK2基因突變ph陰性骨髓增殖性腫瘤患者中會發(fā)生CALR基因突變[5]。丁莉等[6]研究指出，干擾素α對三系血細胞有降低作用，在治療骨髓增殖腫瘤方面，效果顯著。本文旨在研究干擾素α對ph陰性骨髓增殖性腫瘤患者血清JAK2、CALR基因表達的影響，為臨床治療ph陰性骨髓增殖性腫瘤提供數(shù)據(jù)參考。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2016年8月至2018年8月在我院就診的52例ph陰性骨髓增殖性腫瘤患者，男30例，女22例，年齡45～78歲，平均(58.2±10.6)歲。按照隨機數(shù)字表法分為對照組和干擾素α組各26例。對照組患者男15例，女11例，年齡(58.8±10.6)歲；干擾素α組患者男15例，女11例，年齡(58.6±10.2)歲。兩組患者在性別、年齡等一般臨床資料比較中，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。

1.2 納入標(biāo)準和排除標(biāo)準 納入標(biāo)準：所有患者均符合WHO關(guān)于ph陰性骨髓增殖性腫瘤的診斷標(biāo)準。排除標(biāo)準：患自身免疫性疾病、病毒學(xué)肝炎患者；本次實驗前使用免疫抑制劑治療患者；治療前干擾素α抗體陽性患者。本研究患者及其家屬均知情，簽署知情通知書。

1.3 主要試劑 羥基脲片(生產(chǎn)廠家：齊魯制藥有限公司，生產(chǎn)批號：國藥準字H37021289)；聚乙二醇干擾素α-2b注射液(生產(chǎn)廠家：廈門特寶生物工程股份有限公司，生產(chǎn)批號：國藥準字S20160001)。

1.4 方法

1.4.1 治療方法 對照組患者口服羥基脲進行治療，初始計量為15～20 mg/kg，1次/d，根據(jù)患者的治療效果以及患者臨床反應(yīng)，血象恢復(fù)正常后使用0.25～0.5 g進行維持治療，1次/d，同時每天口服100 mg阿司匹林進行輔助治療。干擾素α組患者給予干擾素α-2b治療，初始計量為30～50 μg/d，患者癥狀緩解后隔天1次治療，逐漸減少每周1～2次維持治療。同時每天口服100 mg阿司匹林進行輔助治療。

1.4.2 熒光定量檢測JAK2、CALR基因突變 采集每例患者空腹靜脈血液樣本5 mL，置于一次性真空無抗凝劑的采血管中，使用Ficoll液分離單個核細胞。TRIzol提取細胞RNA，經(jīng)過電泳檢測RNA并定量，經(jīng)過逆轉(zhuǎn)錄合成cDNA。之后進行實時熒光定量PCR實驗，探針或SYBR 反應(yīng)25 μL，反應(yīng)條件滿足：94℃ 5 min,94℃ 45 s,60℃ 1 min,40個循環(huán),設(shè)置標(biāo)準組和空白對照。將PCR反應(yīng)實驗前3～15個循環(huán)熒光信號作為熒光本底信號，調(diào)節(jié)基線，使用JAK2、CALR基因突變率：1/1+2(野生型Ct-突變型Ct)。

1.4.3 外周血血細胞檢測 采用流式細胞儀，將采集到的標(biāo)本，將細胞濃度調(diào)整到1×106個/mL(10% FCS和RPMI 1640稀釋)，之后1 000 r/min離心，時間為5 min，去除上清液。使用PBS緩沖液清洗2～3次，使用70%冷乙醇(1 mL)固定，-20℃過夜保存。離心之后去除固定液，加PBS緩沖液(3 mL)重懸時間為5 min。使用Rnase試劑(100 μL)，37℃進行水浴時間為30 min，之后使用PI(1 mL)細胞染色，4℃進行避光孵育，時間為30 min。分析白細胞、血紅蛋白、血小板計數(shù)。

1.4.4 臨床癥狀評分 觀察兩組患者在治療過程中出現(xiàn)的疲勞、活力不佳、腹部不適、注意力不集中、夜間盜汗、瘙癢、發(fā)熱、骨痛、體重減輕9項臨床癥狀，每項分數(shù)為0～10分，0分表示無，10分表示嚴重，分數(shù)越低，說明患者癥狀越輕。

1.4.5 治療總有效率、并發(fā)癥發(fā)生率統(tǒng)計 患者治療效果分為完全緩解(CR)、部分緩解(PR)、穩(wěn)定(SD)、進展(PD)。CR是指患者JAK2、CALR基因突變下降比例，白細胞、血紅蛋白、血小板計數(shù)下降>50%；PR是指患者JAK2、CALR基因突變下降比例，白細胞、血紅蛋白、血小板計數(shù)降低20%～50%；SD是指JAK2、CALR基因突變下降比例，白細胞、血紅蛋白、血小板計數(shù)降低0～20%；PD是指患者白細胞、血紅蛋白、血小板計數(shù)，JAK2、CALR基因突變未下降。治療有效率=(CR+PR)/總例數(shù)×100%。觀察兩組患者在治療過程中出現(xiàn)的肌肉酸痛、嗜睡、消化道出血、血栓形成等并發(fā)癥，統(tǒng)計患者并發(fā)癥發(fā)生率。

1.5 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS 20.0統(tǒng)計軟件進行分析，其中計數(shù)資料采用百分率描述，組間比較采用2檢驗，計量資料采用進行描述，治療前后比較采用重復(fù)測量資料方差分析，兩組間比較采用獨立樣本t檢驗。以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 干擾素α對患者JAK2、CALR基因突變下降的影響 對照組和干擾素α組患者治療前JAK2、CALR基因突變比比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。兩組患者治療后JAK2、CALR基因突變比低于治療前(P<0.05)，干擾素α組治療后JAK2、CALR基因突變比表達低于對照組治療后，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表1。

項目對照組(n=26)干擾素α組(n=26)t值P值JAK2基因突變比 治療前68.36±11.9368.25±12.120.0330.974 治療后16.33±3.899.28±1.573.8150.001CALR基因突變比 治療前69.75±12.5869.16±11.920.1740.863 治療后16.89±4.898.68±2.627.5460.001

2.2 干擾素α對患者外周血血細胞的影響 對照組和干擾素α組患者治療前白細胞、血紅蛋白、血小板計數(shù)比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。兩組患者治療后白細胞、血紅蛋白、血小板計數(shù)低于治療前(P<0.05)，干擾素α組治療后白細胞、血紅蛋白、血小板計數(shù)低于對照組治療后，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表2。

項目對照組(n=26)干擾素α組(n=26)t值P值白細胞(×109·L-1) 治療前15.26±5.1415.49±5.020.1630.871 治療后8.75±2.446.33±1.084.6240.001血紅蛋白(g/L) 治療前127.82±30.16128.02±30.090.0240.981 治療后100.61±10.8685.36±8.665.5980.001血小板(×109·L-1)治療前1067.75±60.351057.96±60.480.5840.562治療后957.82±50.66890.36±30.625.8110.001

2.3 干擾素α對患者臨床癥狀評分的影響 對照組和干擾素α組兩組患者治療前臨床癥狀評分比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。兩組患者治療后臨床癥狀評分低于治療前(P<0.05)，干擾素α組治療后臨床癥狀評分低于對照組治療后，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表3。

2.4 干擾素α對患者治療總有效率的影響 干擾素α組患者治療總有效率為84.62%,高于對照組患者的53.85%，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(2=5.778,P<0.016)。見表4。

2.5 干擾素α對患者并發(fā)癥的影響 干擾素α組患者并發(fā)癥發(fā)生率為7.69%，低于對照組患者的30.77%，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(2=4.457,P=0.035)。見表5。

3 討論

ph陰性骨髓增殖性腫瘤患者主要表現(xiàn)的臨床癥狀包括乏力、頭暈、視覺異常、血栓栓塞等，大部分患者在發(fā)病時無癥狀[7]。相關(guān)研究指出，干擾素在臨床試驗中治療BCR/ABL陰性骨髓增殖性腫瘤效果顯著，主要作用是通過抑制巨核細胞產(chǎn)生，降低紅系集落細胞形成，達到緩解分子生物學(xué)作用[8-9]。

目前JAK2突變檢測是ph陰性骨髓增殖性腫瘤診斷的重要途徑，成為ph陰性骨髓增殖性腫瘤患者靶向治療的有效靶點[10]。CALR基因主要在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中表達，與鈣通道結(jié)合，具有高度保守性，主要作用是在蛋白質(zhì)折疊過程中發(fā)揮重要作用，有助于細胞內(nèi)鈣離子穩(wěn)定，并且在免疫反應(yīng)、細胞增殖、凋亡以及細胞吞噬和纖維化過程中，意義重大[11]。有研究指出，長時間使用干擾素治療真性紅細胞增多癥，能夠降低JAK2V617F表達，有助于延長患者生存時間[12]。干擾素在骨髓增殖性腫瘤治療中，患者臨床緩解率較高，降低患者急性白血病發(fā)生率，促進JAK2基因突變轉(zhuǎn)陰[13]。

表3 兩組患者臨床癥狀評分比較 分

表4 兩組患者治療總有效率比較

表5 兩組患者并發(fā)癥發(fā)生情況比較 例(%)

本研究結(jié)果顯示，經(jīng)過治療后兩組患兒JAK2基因突變比降低，其中干擾素α組患者治療后JAK2基因突變比降低明顯，說明干擾素α治療ph陰性骨髓增殖性腫瘤能夠降低JAK2、CALR基因突變比。趙亞玲[14]在研究中指出，干擾素α在治療JAK2V617F陽性骨髓增殖性疾病中，能夠降低JAK2基因獲得性突變，改善JAK2基因表達，本研究結(jié)果與其保持一致。相關(guān)研究指出，外周血細胞在患者疾病中水平不同，在同一疾病患者血細胞中一系、兩系外周血細胞增生異常，也會對其他系外周血細胞產(chǎn)生影響[15-16]。本研究結(jié)果顯示，經(jīng)過治療后兩組患者白細胞、血紅蛋白、血小板計數(shù)降低，其中干擾素α組治療后白細胞、血紅蛋白、血小板計數(shù)顯著降低，說明干擾素α治療ph陰性骨髓增殖性腫瘤能夠降低患者白細胞和血小板數(shù)量，改善患者血紅蛋白水平。權(quán)學(xué)蓮等[17]在研究中指出，扶正清髓湯治療BCR/ABL陰性的骨髓增殖性腫瘤,患者白細胞計數(shù)、血紅蛋白、血小板計數(shù)均降低，本文研究結(jié)果與其保持一致，說明采用干擾素α治療也能達到相同的治療效果。

本研究數(shù)據(jù)顯示，經(jīng)過治療后兩組患者疲勞、活力不佳、腹部不適、注意力不集中、夜間盜汗、瘙癢、發(fā)熱、骨痛、體重減輕等臨床癥狀降低，其中干擾素α組患者較低，說明干擾素α治療ph陰性骨髓增殖性腫瘤有助于改善患者臨床癥狀，促進患者早期康復(fù)。干擾素在臨床中主要治療淋巴瘤、白血病以及多種腫瘤疾病，并且治療效果顯著。本研究結(jié)果顯示，干擾素α組患者治療總有效率較高，說明干擾素α能夠提高ph陰性骨髓增殖性腫瘤治療效率。與丁莉等[18]研究結(jié)果保持一致。相關(guān)研究指出，ph陰性骨髓增殖性腫瘤治療主要以降低患者血栓為根本[19-20]。本研究數(shù)據(jù)中，干擾素α組患者無血栓形成病例，并發(fā)癥發(fā)生率較低，說明干擾素α治療ph陰性骨髓增殖性腫瘤能夠降低患者并發(fā)癥發(fā)生率，臨床治療較為安全。

綜上所述，干擾素α對ph陰性骨髓增殖性腫瘤患者治療效果顯著，降低JAK2、CALR基因突變比，改善患者臨床癥狀，減少患者并發(fā)癥發(fā)生，臨床治療較為安全。