申思洋，萇建峰，柴逸飛，李 娟，褚夢真，李連珍

(河南農(nóng)業(yè)大學(xué) 農(nóng)學(xué)院，鄭州 450046)

高血脂是誘發(fā)高血壓、冠心病、心肌梗死等心腦血管疾病的重要因素。我國因高血脂引起的心梗、腦梗、中風(fēng)、偏癱、致殘、致死人數(shù)以每年12%的速度遞增。高血脂已成為吞噬人類健康的第一隱形殺手[1]。因此，開發(fā)安全有效的降血脂食品或藥物對人類健康具有重要意義。

研究表明，多不飽和脂肪酸(PUFAs)中的ω-3和ω-6系列在降血脂、抗衰老、抗心血管疾病等方面有著重要作用[2]。膳食結(jié)構(gòu)中ω-6 PUFAs攝入增加，ω-3 PUFAs攝入減少，ω-6 PUFAs/ω-3 PUFAs的比例失調(diào)，可能是高脂血癥發(fā)生的重要原因。ω-3系列PUFAs主要有α-亞麻酸(ALA)、二十碳五烯酸(EPA)和二十二碳六烯酸(DHA)等，ω-6 系列PUFAs主要有亞油酸(LA)和花生四烯酸(AA)等。修偉娜等[3]對10種藥用植物油的分析結(jié)果顯示，紅花籽油中亞油酸(ω-6系列)含量最高，紫蘇籽油中α-亞麻酸(ω-3系列)含量最高。余德林等[4]發(fā)現(xiàn)紫蘇籽油和紅花籽油等質(zhì)量混合，對高血脂小鼠的降血脂作用強(qiáng)于紫蘇油軟膠囊組，但并未對兩者的最佳配比進(jìn)行研究。本實驗以紅花籽油和紫蘇籽油不同配比為切入點(diǎn)，探討其對正常小鼠和大鼠的降血脂作用，尋求兩者配伍最佳比例，以期為開發(fā)藥用植物保健食用油提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實驗材料

1.1.1 實驗動物

健康清潔型SD大鼠48只，雌雄各半，體重(200±20)g；健康清潔型SD小鼠60只，雌雄各半，體重(20±10)g，由山西醫(yī)科大學(xué)提供，合格證號為20150001。

1.1.2 試劑與儀器

紅花籽油(物理壓榨)，紫蘇籽油(物理壓榨)。生理鹽水，山東科倫藥業(yè)有限公司；甘油三酯測試盒(批號為20170420-01)、總膽固醇測試盒(批號為20170415-02)、高密度脂蛋白試劑盒(批號為20170516-02)、低密度脂蛋白試劑盒(批號為20170605-01)，深圳市錦瑞生物科技有限公司。GS200全自動生化分析儀，深圳市錦瑞生物科技有限公司。

1.2 實驗方法

1.2.1 實驗設(shè)計

(1)給藥量設(shè)計。參考文獻(xiàn)[5]，國家對人體攝入食用油標(biāo)準(zhǔn)按體表面積折算出大鼠1～2 mL/100 g，小鼠1～3 mL/100 g，考慮到藥物性質(zhì)、濃度等因素，結(jié)合前期預(yù)實驗，大鼠和小鼠灌胃量均設(shè)定為10 mL/kg。按亞油酸與α-亞麻酸含量比1∶1、2∶1、4∶1、6∶1、8∶1、12∶1，根據(jù)測定的紅花籽油和紫蘇籽油中亞油酸和α-亞麻酸含量計算，調(diào)配紅花籽油和紫蘇籽油的配比。

(2)分組給藥設(shè)計。大鼠和小鼠實驗室適應(yīng)性喂養(yǎng)3 d，禁食8 h后，稱重，按體重隨機(jī)分組。60只小鼠分為6組，每組10只，雌雄各半，即空白組，紅花籽油組，紫蘇籽油組，紅花籽油與紫蘇籽油配比1.18∶1、2.59∶1、5.42∶1 3個不同配比組。48只大鼠分為6組，每組8只，雌雄各半，即空白組和紅花籽油與紫蘇籽油配比0.47∶1、2.59∶1、4.01∶1、5.42∶1、8.25∶1 5個不同配比組。紅花籽油與紫蘇籽油配比和亞油酸與α-亞麻酸含量比對應(yīng)關(guān)系如表1所示?？瞻捉M灌胃生理鹽水，其他組灌胃相應(yīng)配比食用油。灌胃量10 mL/kg，每天灌胃1次。

表1 紅花籽油和紫蘇籽油不同配比對應(yīng)關(guān)系

1.2.2 動物實驗

小鼠連續(xù)灌胃30 d，灌胃結(jié)束當(dāng)日晚上9點(diǎn)禁食不禁水12 h，次日早上9點(diǎn)，摘眼球取血。血液靜置3 h后，4 000 r/min離心20 min，取血清，備用。

大鼠連續(xù)灌胃30 d，灌胃結(jié)束當(dāng)日晚上9點(diǎn)禁食不禁水12 h，次日早上9點(diǎn)，用10%水合氯醛麻醉，腹主靜脈取血。血液靜置3 h后，4 000 r/min離心20 min，取血清，備用。取大鼠肝臟，-80℃保存。

準(zhǔn)確稱取肝臟質(zhì)量，按質(zhì)量體積比1∶9加入9倍體積的生理鹽水，機(jī)械勻漿，12 000 r/min離心12 min，取上清，備用。

1.2.3 指標(biāo)測定

測定前對全自動生化儀進(jìn)行校準(zhǔn)，按試劑盒要求對血清和肝臟進(jìn)行處理，分別測定總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)的含量。

1.2.4 統(tǒng)計學(xué)處理

使用SPSS22.0作統(tǒng)計學(xué)分析，組間比較使用t檢驗，差異顯著為P<0.05，差異極顯著為P<0.01。

2 結(jié)果與討論

2.1 紅花籽油和紫蘇籽油的脂肪酸組成、營養(yǎng)成分與部分理化性質(zhì)(見表2～表4)

表2 紅花籽油和紫蘇籽油的脂肪酸組成及含量 %

表3 紅花籽油和紫蘇籽油的營養(yǎng)成分含量 g/100 g

由表2～表4可知，紅花籽油與紫蘇籽油氣滋味與透明度良好，紅花籽油富含亞油酸(73.80%)，紫蘇籽油富含α-亞麻酸(52.20%)。二者的維生素E含量分別為52.25、34.62 g/100 g，甾醇含量分別為186.48、329.57 g/100 g。

表4 紅花籽油和紫蘇籽油的部分理化性質(zhì)

2.2 對血清中TC、TG含量的影響(見表5、表6)

表5 各組小鼠血清中TC、TG含量變化 mmol/L

注：與空白組比，*P<0.05，**P<0.01,差異極顯著。下同。

表6 各組大鼠血清中TC、TG含量變化 mmol/L

由表5、表6可知：與空白組比較，紅花籽油與紫蘇籽油配比2.59∶1組、5.42∶1組小鼠血清中TC含量極顯著或顯著降低，TG含量顯著降低；大鼠血清中TC、TG含量紅花籽油與紫蘇籽油配比0.47∶1組顯著降低、2.59∶1組極顯著降低;其余各組與對照相比有降低趨勢，但沒有統(tǒng)計學(xué)差異。

膽固醇(TC)和甘油三酯(TG)是人體脂質(zhì)的組成成分，是血脂分析的常規(guī)項目，是臨床上高脂血癥診斷的常用指標(biāo)。藺新英等[6]研究發(fā)現(xiàn)紅花籽油能顯著降低動脈粥樣硬化家兔血清中TC、TG含量，有降血脂作用。丁晶晶等[7]研究發(fā)現(xiàn)紫蘇籽油能顯著降低高血脂大鼠血清中TC、TG含量，其降低機(jī)理可能與所含α-亞麻酸有關(guān)。余德林等[4]研究認(rèn)為兩者等質(zhì)量合用后對血清中TC、TG的降低作用增強(qiáng)。本實驗結(jié)果中，與空白組比，紅花籽油與紫蘇籽油6個配比對大鼠和小鼠血清中TC、TG含量均有不同程度降低作用，有3個配比組出現(xiàn)了統(tǒng)計學(xué)差異，其中紅花籽油與紫蘇籽油配比2.59∶1組在大鼠和小鼠的實驗中差異均達(dá)到了顯著水平。綜合兩個實驗結(jié)果，紅花籽油和紫蘇籽油合用對正常動物血清中TC、TG含量有降低作用，且以紅花籽油與紫蘇籽油配比為2.59∶1組效果更好。

2.3 對血清中LDL-C和HDL-C含量的影響(見表7、表8)

表7 各組小鼠血清中LDL-C、HDL-C 含量變化 mmol/L

表8 各組大鼠血清中LDL-C、HDL-C 含量變化 mmol/L

由表7、表8可知：與空白組比較，小鼠血清中紅花籽油與紫蘇籽油配比2.59∶1組LDL-C含量顯著降低，紅花籽油與紫蘇籽油配比2.59∶1組、5.42∶1組HDL-C含量顯著升高；大鼠血清中紅花籽油與紫蘇籽油配比0.47∶1組、2.59∶1組LDL-C含量顯著降低，紅花籽油與紫蘇籽油配比2.59∶1組HDL-C含量顯著升高。

低密度脂蛋白(LDL)和高密度脂蛋白(HDL)在脂質(zhì)轉(zhuǎn)化過程中起關(guān)鍵作用。LDL是血漿膽固醇的主要載體，其氧化性修飾可導(dǎo)致動脈粥樣硬化；而HDL有助于膽固醇的清除，能抗動脈粥樣硬化。血清中LDL和HDL含量亦常作為臨床診斷高脂血癥的重要指標(biāo)。田華等[8]研究發(fā)現(xiàn)紅花籽粕提取物能顯著降低糖尿病大鼠血清中的LDL含量，顯著升高HDL含量，具有降低糖尿病大鼠血脂的作用。藺新英等[6]研究發(fā)現(xiàn)紅花籽油能顯著降低動脈粥樣硬化家兔血清中LDL值，升高HDL值，有降血脂作用。武鏹[9]研究表明紫蘇籽油能降低高血脂大鼠LDL水平，升高HDL水平，具有降血脂作用。本研究比較了紅花籽油和紫蘇籽油不同配比對血清中LDL-C和HDL-C含量的影響，結(jié)果顯示，6個配比對LDL-C均有不同程度降低作用，對HDL-C整體有不同程度升高作用，有3個配比出現(xiàn)了統(tǒng)計學(xué)差異。紅花籽油與紫蘇籽油配比2.59∶1組在大鼠和小鼠的實驗中統(tǒng)計學(xué)差異均達(dá)到了顯著水平。綜合分析可知，紅花籽油和紫蘇籽油合用能降低正常動物血清中LDL-C值，升高HDL值，且與配比有關(guān)，以配比2.59∶1組作用更明顯。

2.4 對肝臟中TC、TG含量的影響(見表9)

表9 各組大鼠肝臟中TC、TG含量變化 mmol/L

由表9可知：與空白組組比，紅花籽油與紫蘇籽油配比0.47∶1組、2.59∶1組大鼠肝臟中TC含量顯著或極顯著降低；紅花籽油與紫蘇籽油配比2.59∶1組、4.01∶1組肝臟中TG含量極顯著或顯著降低。其余組未見統(tǒng)計學(xué)差異。

肝臟是TC和TG合成和儲存的主要器官。詹麒平等[10]研究表明高含量DHA/EPA甘油三酯能夠顯著降低小鼠肝臟中TC和TG含量，有效改善肝臟脂肪酸組成，這可能與其為ω-3系列多不飽和脂肪酸有關(guān)。DHA、EPA和α-亞麻酸均屬于ω-3系列多不飽和脂肪酸，α-亞麻酸亦可降低肝臟TC、TG含量。本實驗結(jié)果顯示，與空白組相比，5個配比組對肝臟中的TC和TG含量有降低作用，3個配比組出現(xiàn)了統(tǒng)計學(xué)差異。其中紅花籽油與紫蘇籽油配比2.59∶1組對大鼠肝臟中TC和TG含量均有降低作用，且達(dá)到了極顯著水平?？梢姡t花籽油與紫蘇籽油配比2.59∶1組對肝臟TC、TG降低作用最明顯。

2.5 對肝臟中LDL-C、HDL-C含量的影響(見表10)

表10 各組大鼠肝臟中LDL-C、HDL-C含量變化 mmol/L

由表10可知：與空白組相比，紅花籽油與紫蘇籽油配比0.47∶1組、2.59∶1組LDL-C含量顯著降低，其余組未見統(tǒng)計學(xué)差異；HDL-C含量各組均未見統(tǒng)計學(xué)差異。

LDL-C和HDL-C主要是由肝臟合成。HDL-C由磷脂、載脂蛋白、膽固醇和少量脂肪酸組成，主要生理功能是轉(zhuǎn)運(yùn)磷脂和膽固醇，能促進(jìn)外周組織中膽固醇的消除，降低血脂，防止動脈粥樣硬化。LDL-C的氧化修飾可引起動脈粥樣硬化。本實驗結(jié)果顯示，5個不同配比組對肝臟中LDL-C含量均有降低作用，對HDL-C含量均有升高作用，2個配比組出現(xiàn)了統(tǒng)計學(xué)差異，分別是紅花籽油與紫蘇籽油配比2.59∶1組和0.47∶1組。

本實驗中紅花籽油與紫蘇籽油配比2.59∶1組降血脂作用最明顯，該配比所對應(yīng)的ω-6 PUFAs與ω-3 PUFAs的含量比4∶1。這與喜食富含ω-3 PUFA的海魚的日本，膳食中ω-6 PUFAs與ω-3 PUFAs的比例相同(ω-6/ω-3 =4.0)[11]。亦與中國營養(yǎng)學(xué)會提出的人體內(nèi)最佳的ω-6 PUFAs與ω-3 PUFAs比為4∶1～6∶1，聯(lián)合國衛(wèi)生組織推薦的合理膳食ω-6 PUFAs與ω-3 PUFAs攝入比例值4～5一致。

與空白組相比，單獨(dú)紫蘇籽油和紅花籽油組小鼠血清中TC、TG有降低趨勢，但與空白組相比，未出現(xiàn)統(tǒng)計學(xué)差異，與余德林等[4]的研究結(jié)果有所差異，這可能與本實驗用的是正常動物而不是高血脂動物有關(guān)。

3 結(jié) 論

本實驗研究了紅花籽油和紫蘇籽油不同配比對正常小鼠血清、大鼠血清和肝臟中TC、TG、HDL-C和LDL-C含量的影響，尋求兩者降血脂作用的最佳配比。實驗結(jié)果顯示，兩者經(jīng)過不同配比后對臨床常檢查的血脂四項(TC、TG、HDL、LDL)均有不同程度的作用，表現(xiàn)出降血脂效果，其中紅花籽油與紫蘇籽油配比2.59∶1組降血脂作用最明顯。