文/白羊

是什么影響了藥物分析數(shù)據(jù)的質(zhì)量 // 分析檢測(cè)的目在于獲得穩(wěn)定、可靠和準(zhǔn)確的數(shù)據(jù)，數(shù)據(jù)質(zhì)量控制是是實(shí)驗(yàn)室管理中的基礎(chǔ)所在。做好藥物分析數(shù)據(jù)的質(zhì)量控制可以從以下四個(gè)方面進(jìn)行討論。

目前，對(duì)于實(shí)驗(yàn)室數(shù)據(jù)質(zhì)量控制的重點(diǎn)關(guān)注點(diǎn)是在分析方法驗(yàn)證，但僅進(jìn)行分析方法驗(yàn)證并無法保證分析檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確可靠。USP1058認(rèn)為影響實(shí)驗(yàn)室數(shù)據(jù)質(zhì)量的是由分析儀器確認(rèn)、分析方法驗(yàn)證、系統(tǒng)適用性、質(zhì)控樣品等四個(gè)要素構(gòu)成的數(shù)據(jù)質(zhì)量矩陣，如圖1所示。

分析儀器確認(rèn)

儀器確認(rèn)

參照USP1058的推薦，實(shí)驗(yàn)室儀器可以分為以下三類：

A類：不具備測(cè)量功能或者通常不需要校準(zhǔn)，供應(yīng)商的技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)可以作為用戶需求。如渦旋混合器、離心機(jī)等。此類儀器可以通過目視觀察來對(duì)用戶需求與設(shè)備的符合性進(jìn)行確認(rèn)，并制定相關(guān)操作及維護(hù)的標(biāo)準(zhǔn)規(guī)程。

B類：具有測(cè)量功能，并且儀器控制的物理參數(shù)（如重量、溫度、壓力或流速等）需要校準(zhǔn)，用戶需求一般與供應(yīng)商的功能標(biāo)準(zhǔn)和操作限度相同。如熔點(diǎn)儀、分析天平、pH計(jì)等。此類儀器需要進(jìn)行安裝確認(rèn)（IQ）和運(yùn)行確認(rèn)（OQ），并制定相關(guān)操作、校準(zhǔn)及維護(hù)的標(biāo)準(zhǔn)規(guī)程，定期對(duì)物理參數(shù)進(jìn)行校準(zhǔn)。

C類：儀器包括儀器硬件和其控制系統(tǒng)（固件或軟件），用戶需要對(duì)儀器的功能要求、操作參數(shù)要求、系統(tǒng)配置要求等詳細(xì)描述（URS）。如高效液相色譜儀、分光光度計(jì)等。此類儀器設(shè)備需要進(jìn)行設(shè)計(jì)確認(rèn)（DQ），安裝確認(rèn)（IQ），運(yùn)行確認(rèn)（OQ）和專門的性能確認(rèn)（PQ），并制定相關(guān)操作、校準(zhǔn)及維護(hù)的標(biāo)準(zhǔn)規(guī)程，定期進(jìn)行校準(zhǔn)和性能確認(rèn)（PQ）。

軟件確認(rèn)

目前，大多數(shù)的分析儀器是由工作軟件得出數(shù)據(jù)，儀器（硬件）、軟件、網(wǎng)絡(luò)組件、可控功能和相關(guān)文件共同組成用于報(bào)告或自動(dòng)控制的多功能集成計(jì)算機(jī)化系統(tǒng)，包括數(shù)據(jù)輸入、電子處理和信息輸出等。對(duì)于工作軟件也需要根據(jù)分類進(jìn)行驗(yàn)證：

固件：儀器帶有低層次控制軟件的整合芯片（固件），如電子天平內(nèi)用于控制操作程序和自校正程序的控制芯片等。固件被認(rèn)為該儀器的一個(gè)組成部分，不需要單獨(dú)的確認(rèn)，但固件的版本應(yīng)當(dāng)作為IQ活動(dòng)的一部分被記錄，對(duì)固件版本的任何升級(jí)都應(yīng)該通過該儀器的變更控制程序進(jìn)行追蹤。

儀器控制、數(shù)據(jù)獲取、處理軟件：軟件安裝在與儀器連接的電腦上，通過該軟件操作儀器，而在儀器上較少操作控制，并用于數(shù)據(jù)獲取和結(jié)果計(jì)算，如色譜儀的工作站軟件等。此類軟件需要制造商執(zhí)行相關(guān)DQ以驗(yàn)證此軟件；并在使用場(chǎng)所通過PQ整體驗(yàn)證（包含整個(gè)儀器和軟件系統(tǒng)）對(duì)于軟件系統(tǒng)的適用性進(jìn)行確認(rèn)，可不對(duì)軟件進(jìn)行單獨(dú)的模塊驗(yàn)證。且此類軟件可能涉及分析實(shí)驗(yàn)室電子記錄數(shù)據(jù)的完整性、安全性和可追溯性，如果可能應(yīng)適當(dāng)考慮電子記錄的合規(guī)性（參照美國21CFR“part11 電子記錄與簽名”）。

獨(dú)立軟件：獨(dú)立軟件指類似如LIMIS系統(tǒng)、DCS系統(tǒng)、BMS系統(tǒng)、SCADA系統(tǒng)這些連接或控制多個(gè)系統(tǒng)和設(shè)備進(jìn)行集中管理、監(jiān)測(cè)或控制的系統(tǒng)。獨(dú)立軟件作為獨(dú)立的系統(tǒng)，應(yīng)有專門用于計(jì)算機(jī)化系統(tǒng)的驗(yàn)證活動(dòng)對(duì)其進(jìn)行確認(rèn)。驗(yàn)證的合規(guī)要求重點(diǎn)強(qiáng)調(diào)的是確認(rèn)數(shù)據(jù)的完整性，參照GAMP5良好自動(dòng)化生產(chǎn)實(shí)踐指南（以及EU GMP附錄11計(jì)算機(jī)系統(tǒng)、GMP附錄5計(jì)算機(jī)化系統(tǒng)）的要求和方法采用基于風(fēng)險(xiǎn)可增減生命周期活動(dòng)的策略進(jìn)行。

再確認(rèn)

當(dāng)儀器出現(xiàn)變更或位于一定周期時(shí)，應(yīng)進(jìn)行再確認(rèn)。變更再確認(rèn)主要包括：重大維修，更換關(guān)鍵部件，安裝地點(diǎn)變化，軟件或硬件升級(jí)，由超標(biāo)準(zhǔn)（OOS）和超趨勢(shì)（OOT）分析引起。定期再確認(rèn)根據(jù)儀器的分類而不同：A類，通常儀器狀態(tài)正常時(shí)不需要定期再確認(rèn)；B類，通常儀器狀態(tài)正常時(shí)不需要定期再確認(rèn)，但對(duì)于其測(cè)量功能或儀器控制的物理參數(shù)應(yīng)定期校準(zhǔn)；C類，根據(jù)風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估確定再確認(rèn)周期，且對(duì)于其測(cè)量功能或儀器控制的物理參數(shù)和整機(jī)性能應(yīng)在確認(rèn)周期內(nèi)進(jìn)行定期校準(zhǔn)。

分析方法驗(yàn)證

分析方法驗(yàn)證的理念已在分析實(shí)驗(yàn)室中廣泛使用，根據(jù)來源的不同可以分別進(jìn)行方法驗(yàn)證、轉(zhuǎn)移和確認(rèn)。分析方法驗(yàn)證、轉(zhuǎn)移和確認(rèn)的目的都是證明分析方法的適用性，保證檢測(cè)結(jié)果的一致性、可靠性和準(zhǔn)確度，但其概念具有一定的區(qū)別。

分析方法驗(yàn)證

一般來說，對(duì)于首次使用的方法和非法定（非藥典、國標(biāo)等方法）的分析方法，實(shí)驗(yàn)室使用前需進(jìn)行方法驗(yàn)證以證明方法的適用性。對(duì)于分析方法驗(yàn)證，在ICH、FDA、NMPA的多種分析方法驗(yàn)證指南中均有明確的規(guī)定，如中國藥典2020年版 通則9101分析方法驗(yàn)證指導(dǎo)原則（第二次征求意見稿）中規(guī)定根據(jù)檢驗(yàn)項(xiàng)目的不同，視具體情況擬訂驗(yàn)證的指標(biāo)，如專屬性、準(zhǔn)確度、精密度（包括重復(fù)性、中間精密度和重現(xiàn)性）、檢測(cè)限、定量限、線性、范圍和耐用性。但對(duì)于復(fù)雜的方法和系統(tǒng)建議均進(jìn)行完整驗(yàn)證，如《GB/T 16631—2008高效液相色譜法通則》規(guī)定，為保證數(shù)據(jù)質(zhì)量，應(yīng)驗(yàn)證新開發(fā)的分析方法（包括分析條件的改變），即使是法定方法（如專項(xiàng)標(biāo)準(zhǔn)）也應(yīng)當(dāng)由使用的實(shí)驗(yàn)室驗(yàn)證，實(shí)驗(yàn)室開發(fā)的方法（內(nèi)部方法）在應(yīng)用前也因驗(yàn)證。

分析方法轉(zhuǎn)移

分析方法轉(zhuǎn)移是指從別的實(shí)驗(yàn)室接收已經(jīng)完成方法學(xué)驗(yàn)證的方法。對(duì)于方法接收實(shí)驗(yàn)室，其需與方法建立實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行分析方法轉(zhuǎn)移，主要是進(jìn)行2～5批次、1～3濃度樣品級(jí)別、4～6次重復(fù)測(cè)定、1～2個(gè)被分析物、2～5d分析時(shí)間、2個(gè)實(shí)驗(yàn)室相同的儀器的對(duì)比試驗(yàn)，如進(jìn)口樣品申請(qǐng)上市中需要報(bào)送3個(gè)批次樣品進(jìn)行進(jìn)口藥品質(zhì)量復(fù)核。

分析方法確認(rèn)

對(duì)于法定方法，實(shí)驗(yàn)室僅需對(duì)其系統(tǒng)適用性進(jìn)行確認(rèn)，即分析方法確認(rèn)。對(duì)于這些通用方法和簡單儀器測(cè)試，通常只需要在其第一次測(cè)定時(shí)，研究不同樣品的處理方法和溶劑配制方法對(duì)分析檢測(cè)結(jié)果的影響。

系統(tǒng)適用性

系統(tǒng)適用性試驗(yàn)是確保使用的分析方法有效的基礎(chǔ)，在分析檢測(cè)前需確認(rèn)系統(tǒng)適用性滿足實(shí)驗(yàn)需求。系統(tǒng)適用性在色譜法中的描述最為具體，各種法規(guī)如CHP高效液相色譜通則中均有專門的部分描述系統(tǒng)適用性，包括理論板數(shù)N、分離度R、拖尾因子T、重復(fù)性和靈敏度這5個(gè)參數(shù)，高效液相色譜系統(tǒng)適用性選擇可參見（《中國藥典分析檢測(cè)技術(shù)指南》2017版）。

進(jìn)一步對(duì)這些參數(shù)進(jìn)行分析，結(jié)果指出：1.理論板數(shù)、靈敏度是可檢測(cè)性指標(biāo)，拖尾因子是對(duì)色譜峰對(duì)稱性的描述，也可以作為可檢測(cè)性指標(biāo)；2.分離度是專屬性指標(biāo)；3.重復(fù)性（重復(fù)5針的結(jié)果一致性）是重復(fù)性指標(biāo)。由此可見，系統(tǒng)適用性可以理解為濃縮的方法驗(yàn)證，其核心在于判斷在本實(shí)驗(yàn)室條件下整個(gè)分析檢測(cè)系統(tǒng)對(duì)于某項(xiàng)檢測(cè)的適用性。對(duì)于其他非色譜系統(tǒng)，系統(tǒng)適用性試驗(yàn)可設(shè)置為對(duì)同一個(gè)樣品重復(fù)檢驗(yàn)的可檢測(cè)性、專屬性、重復(fù)性指標(biāo)的考察。

質(zhì)控樣品

質(zhì)控樣品的使用可以保證分析檢測(cè)系統(tǒng)處于穩(wěn)定狀態(tài)的狀態(tài)。如CHP通則9012中推薦，在生物樣品定量分析方法驗(yàn)證中設(shè)置定量下限濃度（LLQC）、低濃度質(zhì)控（LQC，定量下限濃度的3倍以內(nèi)）、中濃度質(zhì)控（MQC，標(biāo)準(zhǔn)曲線中段）、高濃度質(zhì)控(HQC，定量上限濃度75%以上），以及定量上限濃度質(zhì)控（HHQC）等5個(gè)質(zhì)控樣品。質(zhì)控樣品需與校正標(biāo)樣分別配制且低、中、高濃度質(zhì)控標(biāo)示值不得與校正標(biāo)樣濃度標(biāo)示值相同，并考察標(biāo)準(zhǔn)曲線校正標(biāo)樣回算濃度的回收率。而在分析批次中，至少需要設(shè)置低、中、高濃度質(zhì)控，并依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線校正標(biāo)樣回算濃度的回收率。而在常規(guī)高效液相日常檢測(cè)中，通常20個(gè)樣品（或一段時(shí)間）應(yīng)至少進(jìn)一個(gè)質(zhì)控樣品和一個(gè)空白樣品，用來控制數(shù)據(jù)質(zhì)量。

在樣品穩(wěn)定的情況下，質(zhì)控樣品可以用定量分析中的對(duì)照品溶液，而空白樣品可以用于空白分析。空白分析能區(qū)分樣品基質(zhì)和整個(gè)分析過程的影響，而用純?nèi)軇┳鳛榭瞻卓梢詫⑷軇┛瞻着c設(shè)備的影響，如進(jìn)樣污染、交叉污染分離開并獲得溶劑空白。如在《中國藥品檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)范》2010版中規(guī)定，樣品色譜分析前必須進(jìn)行空白梯度洗脫，以辨認(rèn)溶劑雜質(zhì)峰，如洗脫過程中基線漂移較大，亦可對(duì)色譜圖進(jìn)行空白扣除處理。

結(jié)論

分析檢測(cè)的數(shù)據(jù)質(zhì)量主要受到分析儀器確認(rèn)、分析方法驗(yàn)證、系統(tǒng)適用性、質(zhì)控樣品等要素的影響。在實(shí)驗(yàn)室數(shù)據(jù)質(zhì)量控制中，應(yīng)在分析儀器確認(rèn)的基礎(chǔ)上，選擇合適的系統(tǒng)適用性參數(shù)和質(zhì)控樣品，進(jìn)行分析方法驗(yàn)證和日常檢測(cè)以確保數(shù)據(jù)質(zhì)量。