葉吉明，楊景然，劉 宇，王競宇，杜 明，馮琳珊*，陳文君

(1.云南省第一人民醫(yī)院 藥學(xué)部，云南 昆明 650032；2.寧波工程學(xué)院 理學(xué)院，浙江 寧波 315211；3.昆明賽諾制藥股份有限公司 質(zhì)量部，云南 昆明 650051)

隨著城市建設(shè)進(jìn)程的不斷加快，空氣中粉塵也隨之增加，加之畜牧飼養(yǎng)中抗生素、激素的大量使用，使得過敏性鼻炎的發(fā)生率呈逐年上升趨勢．過敏性鼻炎以突發(fā)和反復(fù)發(fā)作性鼻塞、鼻癢、打噴嚏、流涕為主要癥狀，常有過敏史，嚴(yán)重影響患者的生活質(zhì)量[1-3]．抗過敏滴鼻液是某醫(yī)院耳鼻喉科的外用經(jīng)驗(yàn)方，臨床上已使用多年，其主要由醋酸氫化可的松、鹽酸麻黃堿、馬來酸氯苯那敏和部分輔料制成，作為醫(yī)院的協(xié)定處方，在療效上已得到患者的肯定．作為醫(yī)院的傳統(tǒng)制劑，其具有療效確切、價廉物美的優(yōu)勢，但對其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)上的探討，還僅停留在對醋酸氫化可的松、鹽酸麻黃堿、馬來酸氯苯那敏等用化學(xué)顯色法的定性鑒別．目前，大量報道[4-9]主要是對醋酸氫化可的松、鹽酸麻黃堿、馬來酸氯苯那敏單藥測定的研究，而作為協(xié)定處方，從多點(diǎn)對抗過敏滴鼻液進(jìn)行考察和評價的報道卻較少．為此，采用高效液相色譜法對抗過敏滴鼻液進(jìn)行系統(tǒng)穩(wěn)定性考察，旨在為控制產(chǎn)品質(zhì)量，保證臨床用藥的安全性、有效性，以及效期、法定標(biāo)準(zhǔn)和補(bǔ)充檢驗(yàn)方法的制定提供參考依據(jù)．

1 儀器與方法

1.1 儀器與材料

LC-2030高效液相色譜儀(日本島津有限公司)，C18色譜柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)．

醋酸氫化可的松(中國食品藥品檢定研究院，批號：100013-201408)，鹽酸麻黃堿(中國食品藥品檢定研究院，批號：171241-201809)，馬來酸氯苯那敏(中國食品藥品檢定研究院，批號：100047-201507)；乙腈(色譜純，西格瑪奧德里奇(上海)貿(mào)易有限公司)；磷酸、三乙胺、磷酸二氫鉀(分析純，天津市風(fēng)船化學(xué)試劑有限公司)．

1.2 方法

1.2.1 色譜條件

以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑(250 mm×4.6 mm，5 μm)，柱溫 30 ℃，流速 1 mL/min．醋酸氫化可的松：V(流動相乙腈)∶V(水)=36∶64， 檢測波長 254 nm； 鹽酸麻黃堿：V(磷酸鹽緩沖液)∶V(乙腈)=90∶10，檢測波長為 210 nm；馬來酸氯苯那敏：V(磷酸鹽緩沖液)∶V(乙腈)=76∶24，檢測波長 262 nm．

1.2.2 溶液的制備

1)醋酸氫化可的松．對照品溶液制備：取醋酸氫化可的松適量，精密稱定 2.5 mg，置 50 mL 容量瓶中，用流動相制成每 1 mL 含 50 μg 的溶液，作為對照品溶液．

供試品溶液制備：取本品數(shù)支，充分混合均勻后，并入同一具塞錐形瓶中，再充分振搖．精密吸取 5 mL 置 50 mL 量瓶中，用甲醇分3次洗滌移液管內(nèi)壁，洗液并入量瓶中，振搖使醋酸氫化可的松溶解，加甲醇稀釋至刻度，搖勻．精密量取 5 mL 置 25 mL 量瓶中，用流動相稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液．

陰性樣品溶液的制備：按處方比例，稱取缺少醋酸氫化可的松的其他原料與輔料，加水制成陰性樣品，充分振搖后，并入同一具塞錐形瓶中，再充分振搖．精密量取 5 mL 置 50 mL 量瓶中，用甲醇分3次洗滌移液管內(nèi)壁，洗液并入量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻．精密量取 5 mL，置 25 mL 量瓶中，用流動相稀釋至刻度，搖勻，作為陰性樣品溶液．

2)鹽酸麻黃堿．對照品溶液的制備：取鹽酸麻黃堿對照品適量，精密稱定 1.5 mg，置 50 mL 容量瓶中，用流動相制成每 1 mL 含 30 μg 的溶液，作為對照品溶液．

供試品溶液的制備：取本品數(shù)支，充分振搖后，并入同一具塞錐形瓶中，充分振搖．精密量取 3 mL 置 50 mL 量瓶中，用流動相稀釋至刻度，搖勻．精密量取 5 mL 置 50 mL 量瓶中，用流動相稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液．

陰性樣品溶液的制備：按處方比例，稱取缺少鹽酸麻黃堿的其他原料與輔料，加水制成陰性樣品，充分振搖后，并入同一具塞錐形瓶中，再充分振搖．精密量取 3 mL 置 50 mL 量瓶中，用流動相稀釋至刻度，搖勻．精密量取 5 mL 置 50 mL 量瓶中，用流動相稀釋至刻度，搖勻，為陰性樣品溶液．

3)馬來酸氯苯那敏．對照品溶液的制備：取馬來酸氯苯那敏對照品適量，精密稱定 2 mg，置 25 mL 容量瓶中，加流動相制成每 1 mL 含 80 μg 的溶液，作為對照品溶液．

供試品溶液的制備：取本品數(shù)支，充分振搖后，并入同一具塞錐形瓶中，再充分振搖．精密量取 2 mL，然后置于 25 mL 量瓶中，用流動相稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液．

陰性樣品溶液的制備：按處方比例，稱取缺少馬來酸氯苯那敏的其他原料與輔料，加水制成陰性樣品，充分振搖后，并入同一具塞錐形瓶中，再充分振搖．精密量取 2 mL 置 25 mL 量瓶中，用流動相稀釋至刻度，搖勻，作為陰性樣品溶液．

2 試驗(yàn)結(jié)果

2.1 系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

按1.2.2項(xiàng)下方法配制各溶液，并按1.2.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣分析，記錄色譜圖．由圖1至圖3可見，醋酸氫化可的松、鹽酸麻黃堿和馬來酸氯苯那敏的對照品溶液、供試品溶液和陰性樣品溶液各溶劑峰形良好，分離度大于1.5，理論塔板數(shù)分別按醋酸氫化可的松、鹽酸麻黃堿和馬來酸氯苯那敏峰計算不低于 1 500．在此色譜條件下，其他原料、輔料均對這3種藥物的含量測定不產(chǎn)生干擾，表明所用方法專屬性良好．

圖1 醋酸氫化可的松色譜圖

圖2 鹽酸麻黃堿色譜圖

圖3 馬來酸氯苯那敏色譜圖

2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

分別精密吸取醋酸氫化可的松對照品溶液5，10，20，25，50 μL，鹽酸麻黃堿和馬來酸氯苯那敏對照品溶液各1，5，10，20，25 μL，按1.2.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣分析，以峰面積(Y)為縱坐標(biāo)，質(zhì)量濃度(X)為橫坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸計算，則得到醋酸氫化可的松、鹽酸麻黃堿和馬來酸氯苯那敏的回歸方程分別為：Y=18 874X-383，R2=1；Y=2 001.5X-0.608 1，R2=1和Y= 94 725X-688.5，R2=1．

結(jié)果表明，醋酸氫化可的松在0.250～2.502 μg/mL，鹽酸麻黃堿在0.030～0.750 μg/mL 和馬來酸氯苯那敏在0.083～2.076 μg/mL 范圍內(nèi)與峰面積呈良好線性關(guān)系．

2.3 精密度試驗(yàn)

取醋酸氫化可的松對照品溶液 20 μL，鹽酸麻黃堿和馬來酸氯苯那敏對照品溶液各 10 μL，在上述色譜條件下，重復(fù)進(jìn)樣6次，記錄峰面積，計算得到醋酸氫化可的松、鹽酸麻黃堿和馬來酸氯苯那敏峰面積的RSD分別為0.06%、0.06%和0.70%．

說明在該色譜條件下，各供試品溶液色譜圖中醋酸氫化可的松、鹽酸麻黃堿和馬來酸氯苯那敏峰面積的精密度良好．

2.4 重復(fù)性考察

取同一批號(20181218)的制劑樣品，共6份，在3種條件下分別重復(fù)進(jìn)樣6次，記錄峰面積，通過計算得到醋酸氫化可的松、鹽酸麻黃堿和馬來酸氯苯那敏峰面積的RSD分別為0.25%、0.08%和0.27%．

2.5 穩(wěn)定性考察

取供試品溶液(批號：20181218)于室溫下存放，分別于0，2，4，6，8，12，18，24 h 進(jìn)行測定，得到供試品溶液在室溫放置 24 h，醋酸氫化可的松、鹽酸麻黃堿和馬來酸氯苯那敏峰面積的RSD值分別為0.25%、1.30%和0.60%．

2.6 加樣回收試驗(yàn)

分別精密量取醋酸氫化可的松和鹽酸麻黃堿的陰性樣品各 5 mL，分置于 25 mL 量瓶中；精密量取馬來酸氯苯那敏陰性樣品 2 mL，置 25 mL 量瓶中，然后再分別精密量取4，5，6 mL 醋酸氫化可的松、鹽酸麻黃堿和馬來酸氯苯那敏的對照品溶液(質(zhì)量濃度分別為0.252，0.150，0.393 mg/mL)，加流動相稀釋至刻度，搖勻．吸取醋酸氫化可的松 20 μL，鹽酸麻黃堿和馬來酸氯苯那敏各吸取 10 μL，按1.2.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣分析，結(jié)果見表1．醋酸氫化可的松、鹽酸麻黃堿和馬來酸氯苯那敏的平均回收率分別為101.2%、99.2%和101.9%；RSD分別為0.5%、0.4%和1.4%．

2.7 樣品質(zhì)量分?jǐn)?shù)測定及限度確定

取抗過敏滴鼻液(批號：20190423；20190424；20190425)，按1.2.2 項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按1.2.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣分析，其質(zhì)量分?jǐn)?shù)(含量，以下同)測定結(jié)果見表2．根據(jù)質(zhì)量分?jǐn)?shù)測定結(jié)果以及處方組成和制備過程，為保證本品的質(zhì)量，將本品的3種藥物的質(zhì)量分?jǐn)?shù)限度定為標(biāo)示量的90.0%～110.0%．

表1 制劑樣品中3種藥物的加樣回收試驗(yàn)結(jié)果

表2 3批樣品中3種藥物的質(zhì)量分?jǐn)?shù)測定結(jié)果

續(xù)表2

3 討論

抗過敏滴鼻液作為醫(yī)院制劑已得到臨床和患者的肯定，其用量逐步穩(wěn)定增長，但作為內(nèi)控標(biāo)準(zhǔn)的質(zhì)量控制仍然停留在從前．為此，從保障患者用藥安全的角度以及復(fù)方制劑的多維度含量測定出發(fā)，提升復(fù)方制劑的質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)勢在必行[10-12]．2015年版《中國藥典：二部》，依舊采用單一成分對照品進(jìn)行含量測定，但單一成分難以代表多組分制劑，如抗過敏滴鼻液等的復(fù)雜體系．有研究[6]發(fā)現(xiàn)，馬來酸氯苯那敏的穩(wěn)定性會因遇堿性物質(zhì)或過渡金屬離子而降低，從而游離出馬來酸和氯苯那敏，因此，控制流動相極性和比例是準(zhǔn)確定量的關(guān)鍵環(huán)節(jié)；張誠賢等[4]用超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法同時測定抗鼻炎中成藥及保健品中19種化學(xué)藥物；呂冠欣等[7]用HPLC梯度洗脫法同時測定鼻炎噴劑中3種組分的含量，為抗過敏滴鼻液的質(zhì)量控制提供參考；張新軍等[8]用HPLC測定荊桔抗感合劑中鹽酸麻黃堿和鹽酸偽麻黃堿的含量；莊愛愛等[9]用雙波長HPLC法同時測定麻杏止咳糖漿中5個成分含量，并在多組分含量測定中對流動相的選擇進(jìn)行了研究和比較．采用磷酸鹽緩沖液-乙腈為流動相進(jìn)行梯度洗脫，能夠維持流動相pH值穩(wěn)定，所得色譜峰峰形對稱，分離度好，陰性對照無干擾，與本研究所用流動相V(磷酸鹽緩沖液)∶V(乙腈)=90∶10相似．此外，需要引起大家關(guān)注的是，鹽酸麻黃堿和醋酸氫化可的松分別屬于限制用特殊管理藥物和激素用藥，用量過大將造成不良后果，而用量過小達(dá)不到治療目的．為此，應(yīng)依據(jù)臨床所需和療效按需投料，并對其含量進(jìn)行上下限限度檢測和控制，這也是今后工作的要求和期望．此外，依據(jù)臨床要求，完善和提高抗過敏滴鼻液的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)和控制，可進(jìn)一步保障患者用藥的安全性和有效性．