繆宇騰，郁宏燕，陸利霞，熊曉輝

(1.南京工業(yè)大學(xué) 食品與輕工學(xué)院，江蘇 南京 211800；2.昆山市市場(chǎng)監(jiān)督管理局 食品質(zhì)量監(jiān)管隊(duì)，江蘇 蘇州 215300)

氯霉素(chloramphenicol，CAP)是一種使用時(shí)間較長(zhǎng)、應(yīng)用廣泛的抗生素。長(zhǎng)期食用氯霉素殘留的食物，會(huì)使機(jī)體菌群產(chǎn)生耐藥性，導(dǎo)致機(jī)體正常菌群失調(diào)[1]。

美國(guó)、歐盟規(guī)定氯霉素殘留限量標(biāo)準(zhǔn)為不得檢出[2]。目前，我國(guó)對(duì)氯霉素的檢測(cè)定量方法主要包括高效液相色譜、氣相色譜等[3]。高裕鋒等[4]對(duì)廣東省7個(gè)城市水產(chǎn)品中氯霉素殘留情況進(jìn)行了調(diào)研，最終水產(chǎn)品中氯霉素檢出率高達(dá)10%，且7個(gè)城市均存在氯霉素檢出的情況，情況不容樂(lè)觀。

目前，國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)中用于氯霉素檢測(cè)的方法包括高效液相色譜、氣相色譜-質(zhì)譜以及液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜等[5]，但耗時(shí)長(zhǎng)，檢測(cè)設(shè)備昂貴。方便快捷的氯霉素檢測(cè)方法逐漸受到關(guān)注，包括電化學(xué)生物傳感器、表面等離子體共振、壓電免疫傳感器、熒光免疫分析法和化學(xué)發(fā)光等。本文中，筆者分析了各種氯霉素檢測(cè)方法，對(duì)各方法的原理和優(yōu)缺點(diǎn)進(jìn)行了介紹，并對(duì)氯霉素檢測(cè)未來(lái)發(fā)展方向進(jìn)行了探討和展望。

1 氯霉素殘留量檢測(cè)方法

1.1 電化學(xué)傳感器(ECBSS)

ECBSS是由生物材料作為敏感元件，電極作為轉(zhuǎn)換元件，以電勢(shì)或電流作為特征檢測(cè)信號(hào)的傳感器。利用電化學(xué)傳感器進(jìn)行物質(zhì)檢測(cè)時(shí)，待測(cè)物擴(kuò)散進(jìn)入生物活性材料，通過(guò)分子識(shí)別，產(chǎn)生生物學(xué)反應(yīng)，經(jīng)過(guò)電極等轉(zhuǎn)化為光電等信號(hào)，放大信號(hào)，最終得到待測(cè)物濃度。

近年來(lái)基于分子印跡(MIPs)的電化學(xué)傳感器成為研究熱門(mén)，傳感器以分子印跡技術(shù)作為模板的識(shí)別元件，將MIPs電活性材料修飾電極后，可以制備出用于特定識(shí)別目標(biāo)分子的高靈敏傳感器[6]。

Munawar等[7]采用新型納米雜化材料構(gòu)建三維印跡納米結(jié)構(gòu)。通過(guò)兩步主要過(guò)程將銅納米粒子沉積在碳納米管上，然后在3D CNTs@Cu NPs上包覆分子印跡聚合物而形成雜化結(jié)構(gòu)，最終一層層地組裝成一個(gè)電化學(xué)傳感器用于氯霉素的檢測(cè)。結(jié)果表明在最佳實(shí)驗(yàn)條件下，檢出限(LOD)為10 μmol/L。由于特定的結(jié)合位點(diǎn)產(chǎn)生選擇性的傳感器信號(hào)，對(duì)氯霉素有100%的選擇性，表明該方法可以用于對(duì)氯霉素的靈敏檢測(cè)。Chen等[8]使用二硫化鉬聚苯胺(MoS2/PANI)復(fù)合納米材料設(shè)計(jì)了一款用于氯霉素檢測(cè)的電化學(xué)傳感器，該傳感器檢測(cè)范圍為(1.0×10-7)～(1.0×10-4)mol/L，LOD為6.9×10-8mol/L，由于MoS2和聚苯胺(polyainlin，PANI)的協(xié)同作用，該傳感器具有特殊的三維結(jié)構(gòu)，更容易吸附氯霉素分子，故靈敏度更好。Meenakshi等[9]展示了一種無(wú)介體電化學(xué)敏感傳感器用于檢測(cè)氯霉素。通過(guò)表面活性劑輔助剝離法合成了石墨烯納米片(GNFs)修飾在玻碳電極(GCE)上。氯霉素使用無(wú)介體玻碳電極平臺(tái)進(jìn)行敏感檢測(cè)，在最佳實(shí)驗(yàn)條件下，LOD為0.38 nmol/L。Zhao等[10]制造了一種電化學(xué)仿生傳感器用于檢測(cè)牛奶和蜂蜜中的氯霉素殘留量，使用鉑薄膜微電極(Pt TFME)可以對(duì)樣品量較少的基質(zhì)進(jìn)行檢測(cè)，在最佳實(shí)驗(yàn)條件下，LOD為0.396 1 nmol/L。加標(biāo)牛奶樣品檢測(cè)過(guò)程中，使用液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法(LC-MS/MS)驗(yàn)證結(jié)果一致，表明該方法具有良好的準(zhǔn)確性。Cardoso等[11]采用分子印跡和電化學(xué)傳感器的方法，設(shè)計(jì)了一款可以應(yīng)用于現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)的儀器，檢測(cè)范圍從1 nmol/L～100 μmol/L，方法簡(jiǎn)單，操作性強(qiáng)，適用于現(xiàn)場(chǎng)的快速檢測(cè)。

相比較而言，經(jīng)過(guò)電極材料的優(yōu)化，傳感器的靈敏度被逐步提高，三維納米材料的應(yīng)用使分子吸附更加容易，克服了電化學(xué)傳感器靈敏度不高、檢測(cè)范圍較窄的缺陷。不同的分子印跡材料對(duì)傳感器的靈敏度存在不同影響。

1.2 熒光探針技術(shù)(fluorescent probe technique)

熒光探針是以熒光物質(zhì)作為指示劑，并在一定波長(zhǎng)光的激發(fā)下使指示劑產(chǎn)生熒光，通過(guò)對(duì)所產(chǎn)生熒光的檢測(cè)，實(shí)現(xiàn)對(duì)被檢測(cè)物質(zhì)的定性或定量分析。熒光分子探針通常由識(shí)別基團(tuán)、熒光基團(tuán)和連接體三部分組成。由于投資小、附加值高等優(yōu)勢(shì)，廣泛應(yīng)用于日常食品檢測(cè)中。

Wang等[12-13]基于熒光共振能量轉(zhuǎn)移(fluorescence resonance energy transfer，F(xiàn)RET)和單鏈DNA結(jié)合蛋白，利用適配體及量子點(diǎn)與膠體金距離小于10 nm會(huì)發(fā)生能量共振轉(zhuǎn)移現(xiàn)象這一特點(diǎn)，將單鏈DNA結(jié)合蛋白結(jié)合到硒化鎘(CdSe)量子點(diǎn)上面得到QDs@SSB受體。金納米粒子上面通過(guò)Au-S鍵結(jié)合巰基化的適配體得到受體Au@apt。在最佳實(shí)驗(yàn)條件下，熒光強(qiáng)度隨著氯霉素質(zhì)量濃度從0.005 ng/mL到100 ng/mL線(xiàn)性增加。LOD為3 pg/mL。檢測(cè)時(shí)間小于30 min，通過(guò)改變適配體，也可以應(yīng)用于其他物質(zhì)的檢測(cè)中。Miao等[14]采用相同原理，在Wang等[12-13]基礎(chǔ)上優(yōu)化了受體，利用納米金粒子與SiO2復(fù)合物結(jié)合形成SiO2@Au受體，可以極大地催化CdSe量子點(diǎn)熒光強(qiáng)度值的猝滅，導(dǎo)致熒光強(qiáng)度變化劇烈，并用于CAP量化。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，CAP檢測(cè)線(xiàn)性范圍為0.001～10 ng/mL，LOD為0.000 2 ng/mL。該方法檢出限更低，適用于微量殘留的檢測(cè)。Li等[15]利用靜電紡絲技術(shù)制備碲化鎘(CdTe)量子點(diǎn)/聚乳酸(PLA)納米熒光纖維探針，通過(guò)靜電紡絲的方法將量子點(diǎn)結(jié)合在纖維膜上，用于提高量子點(diǎn)穩(wěn)定性。在最佳實(shí)驗(yàn)條件下，體系的熒光猝滅強(qiáng)度與氯霉素質(zhì)量濃度在10～80 μg/mL范圍內(nèi)呈良好線(xiàn)性關(guān)系，其LOD為0.814 μg/mL。結(jié)果顯示，熒光探針的方法檢測(cè)氯霉素比電化學(xué)傳感器更加靈敏，線(xiàn)性范圍達(dá)到了4個(gè)數(shù)量級(jí)，且檢出限比電化學(xué)方法更低。

Tan等[16]利用牛血清白蛋白穩(wěn)定的金納米團(tuán)簇(BSA-AuNCs)熒光法來(lái)測(cè)定氯霉素，在最佳條件下，可以對(duì)微量的氯霉素進(jìn)行檢測(cè)，其線(xiàn)性范圍為0.10～70.00 μmol/L，LOD為33 nmol/L(信噪比=3)，應(yīng)用于牛奶樣品的檢測(cè)時(shí)，回收率為98.4%～106%。劉長(zhǎng)青等[17]采取類(lèi)似的方法，利用BSA-Au NCs熒光體系，改良形成一種可以應(yīng)用于氯霉素檢測(cè)的新型檢測(cè)方法，此方法LOD為1.2×10-9mol/L，應(yīng)用在實(shí)際牛奶樣品的檢測(cè)時(shí)，回收率為98.8%～101.75%。

1.3 表面增強(qiáng)拉曼光譜技術(shù)(surface enhanced raman spectroscopy，SERS)

拉曼光譜技術(shù)是一種能提供拉曼光譜特征和光譜信息的光譜技術(shù)，然而，拉曼散射的產(chǎn)率很低，在大多數(shù)情況下都會(huì)產(chǎn)生微弱的拉曼信號(hào)[18]。表面增強(qiáng)拉曼光譜技術(shù)(SERS)是拉曼光譜中的一種，利用一些分子被吸附到某些粗糙的金屬(如金、銀、銅等)表面時(shí)，拉曼散射強(qiáng)度會(huì)增加104～106倍，SERS信號(hào)的強(qiáng)弱與拉曼的增強(qiáng)基底有著密切的關(guān)系[19]。

Ji等[20]利用膠體金納米粒子作為基底，可以顯著提高CAP的拉曼光譜信號(hào)。以1 344 cm-1處的拉曼峰作為食品樣品中CAP的定量分析指標(biāo)。最佳實(shí)驗(yàn)條件下，LOD為0.1 μg/mL。通過(guò)對(duì)實(shí)際雞肉樣品的測(cè)定，其變異系數(shù)為1.5%左右。Yu等[21]研究并開(kāi)發(fā)了分散磁性固相微觀表面增強(qiáng)拉曼散射光譜技術(shù)(Dis-MSPME-SERS)。采用層層組裝的方法制備了一種多功能磁性石墨烯基底(Fe3O4@GO@Ag)，利用這種三元基底對(duì)氯霉素的殘留進(jìn)行測(cè)定。在最佳實(shí)驗(yàn)條件下，定量限(LQD)和LOD分別為1.0×10-8和1.0×10-10mol/L，通常情況下檢測(cè)時(shí)間<10 min。利用這種三元基底提高了靈敏度，改善了SERS難以對(duì)多種分子混合體系檢測(cè)的弊端。劉治剛[22]采用同樣的方法、基底，將其應(yīng)用在農(nóng)殘和地溝油的檢測(cè)中，同樣取得良好的效果。Ding等[23]用均勻和單分散的膠體金(Au NPs)當(dāng)作該方法的底物，在最佳實(shí)驗(yàn)條件下，其檢出限為1×10-8mol/L，并用HPLC對(duì)該方法進(jìn)行了驗(yàn)證，兩者結(jié)果一致，表明其準(zhǔn)確性良好。

Xie等[24]通過(guò)一種新型雜化分子印跡材料(MIP-Au)作為基底，制作了一種可以應(yīng)用于快速檢測(cè)氯霉素的SERS傳感器。該傳感器可以用于實(shí)際牛奶樣品的檢測(cè)中，其檢出限為0.1 μg/mL，靈敏度不如劉長(zhǎng)青等[17]的熒光方法，但檢測(cè)時(shí)間更短，通常在10 min內(nèi)得到結(jié)果。Yang等[25]用磁分離和表面增強(qiáng)拉曼光譜的方法，設(shè)計(jì)出一款新型傳感器用于氯霉素的檢測(cè)，使用抗體綴合磁珠代替固體基質(zhì)作為支持材料和分離工具，借助磁體，達(dá)到良好的富集、濃縮作用。該傳感器檢測(cè)線(xiàn)性范圍廣(1～1×104pg/mL),檢出限為1.0 pg/mL。Gao等[26]將分子印跡和表面增強(qiáng)拉曼光譜相結(jié)合(MIPs-SERS)，開(kāi)發(fā)了一種生物納米傳感器，傳感器可以實(shí)現(xiàn)對(duì)牛奶、蜂蜜等實(shí)際樣品的氯霉素加標(biāo)檢測(cè)，效果良好。這種傳感器價(jià)格便宜、方便快捷，最快可以在15 min內(nèi)得出結(jié)果。

SERS活性基底主要有貴金屬電極活性基底、金屬溶膠活性基底、雙金屬納米活性基底等幾類(lèi)，通過(guò)開(kāi)發(fā)不同的基底，靈敏度也越來(lái)越高。相比較其他方法，該方法更適合現(xiàn)場(chǎng)的快速檢測(cè)，相對(duì)比較完善，具有一定潛力。

1.4 色譜分析(chromatography and chromato-graphic analysis)

高效液相色譜(HPLC)是一種以液體為流動(dòng)相，采用高壓輸液系統(tǒng)，將具有不同極性的單一溶劑或不同比例的混合溶劑、緩沖溶液等流動(dòng)相泵入裝有固定相的色譜柱，柱內(nèi)樣品分離后，進(jìn)入檢測(cè)器檢測(cè)[27]。根據(jù)檢測(cè)器的不同逐漸發(fā)展出液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法(LC-MS)和超高效液相色譜(UPLC)等。

Chu等[28]利用電紡納米纖維的固相萃取技術(shù)(PFSRE)和HPLC測(cè)定牛奶中的氯霉素，在最佳實(shí)驗(yàn)條件下，LOD為0.2 mg/L，線(xiàn)性范圍為0.5～10 mg/L，回收率在97.5%～104.0%范圍內(nèi)。加標(biāo)樣品的日內(nèi)和日間RSD分別為4.6%～7.1%和8.4%，均低于10%。證明該方法精密度良好。王安偉等[29]采用HPLC測(cè)定羅非魚(yú)中的氯霉素殘留量，在最佳實(shí)驗(yàn)條件下檢測(cè)限為 0.02 μg/g，回收率為80.5%～107.1%。

Amelin等[30]使用高效液相色譜-高分辨質(zhì)譜法檢測(cè)對(duì)肉類(lèi)、牛奶等7種樣品進(jìn)行檢測(cè)，不僅顯示出氯霉素的存在，而且顯示出其琥珀酸的形式。在最佳實(shí)驗(yàn)條件下，LOD和LQD分別為0.1 μg/kg和0.3 μg/kg。分析結(jié)果RSD<10%。分析檢測(cè)時(shí)間小于1 h。niegocki等[31]提出了一種可以測(cè)定20多種生物基質(zhì)中氯霉素的方法，提取物通過(guò)SPE柱分離后，通過(guò)LC-MS/MS以電噴霧模式分析氯霉素。該方法檢出范圍為0.10～10 μg/kg?；厥章试?2.1%～107.1%，重復(fù)性小于11.0%。

Ashraf等[32]建立了一種測(cè)定蜂蜜中氯霉素殘留量的超高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)(UPLC-MS/MS)，并結(jié)合電子噴霧電離技術(shù)，利用多重反應(yīng)監(jiān)測(cè)躍遷串聯(lián)質(zhì)譜法對(duì)目標(biāo)物進(jìn)行了鑒定，結(jié)果表明該方法定量限、決策限和決策能力分別為0.15、0.10和0.20 μg/kg。Kivrak等[33]采用和前者類(lèi)似的技術(shù)，引入超聲波提取的方法，可以對(duì)蜂蜜中23種抗生素同時(shí)檢測(cè)。結(jié)果表明，氯霉素LOD、LQD分別為0.61和0.27 μg/kg。色譜分析方法靈敏度高，可重復(fù)性強(qiáng)，結(jié)果可靠。但是對(duì)操作人員有一定的技術(shù)要求，且方法較SERS繁瑣，檢測(cè)成本高。

1.5 免疫學(xué)技術(shù)(immunological technique)

1.5.1 酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)

酶聯(lián)免疫法，該方法核心就是讓抗體與酶復(fù)合物相結(jié)合，然后通過(guò)顯色來(lái)檢測(cè)。ELISA可用于測(cè)定抗體，也可用于測(cè)定抗原。ELISA試劑盒具有高效、靈敏、穩(wěn)定且重現(xiàn)性好等特點(diǎn)，廣泛應(yīng)用于醫(yī)療和食品等日常檢測(cè)中。

Tao等[34]建立了一種非常敏感的直接競(jìng)爭(zhēng)酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(CL-ELISA)，該方法用于檢測(cè)實(shí)際樣品效果良好。在最佳實(shí)驗(yàn)條件下，LOD為0.7 ng/L，線(xiàn)性范圍為2.1～92.4 ng/L，該方法所需時(shí)間較短，15 min內(nèi)可以得到結(jié)果，適用于快速檢測(cè)實(shí)際樣品的氯霉素殘留。通過(guò)與安徽省地方標(biāo)準(zhǔn)DB34/T 821—2008酶聯(lián)免疫法的對(duì)比，優(yōu)化后的ELSA方法檢出限遠(yuǎn)低于標(biāo)準(zhǔn)0.1 μg/kg的要求。Chughtai等[35]開(kāi)發(fā)和驗(yàn)證了一種直接競(jìng)爭(zhēng)的ELISA方法。結(jié)果表明，加標(biāo)后的牛奶樣品平均回收率為73%～100%，方差系數(shù)為7%～11%，決定限度(CCα)和檢測(cè)能力(CCβ)分別為0.10和0.12 ng/mL。

Jester等[36]用LC-MS/MS的方法評(píng)估了一種市場(chǎng)上銷(xiāo)售的ELISA試劑盒，驗(yàn)證發(fā)現(xiàn)在加標(biāo)的蟹和蝦肌肉樣品中ELISA具有良好的重復(fù)性，CAP的回收率范圍為102%～107%，表明ELISA試劑盒快檢可以應(yīng)用于對(duì)大量樣品的篩選，為以后的定量檢測(cè)做準(zhǔn)備。

1.5.2 化學(xué)發(fā)光免疫分析(chemiluminescence immuno assay，CLIA)

化學(xué)發(fā)光免疫分析，是將具有高度靈敏的化學(xué)發(fā)光測(cè)定技術(shù)與特異性的免疫反應(yīng)相結(jié)合。當(dāng)有機(jī)分子吸收化學(xué)能后發(fā)生能級(jí)躍遷，產(chǎn)生一種高能級(jí)的電子激發(fā)態(tài)不穩(wěn)定的中間體，當(dāng)其返回到基態(tài)而發(fā)出光子，這就是化學(xué)發(fā)光，化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù)通常包括2個(gè)部分，即免疫反應(yīng)系統(tǒng)和發(fā)光化學(xué)系統(tǒng)。該方法適用于各種抗原、抗體和藥物等分析檢測(cè)。

Liang等[37]開(kāi)發(fā)了納米金磁性微球(Au-MNPs)的直接競(jìng)爭(zhēng)化學(xué)發(fā)光免疫測(cè)定法(CLIA)，

通過(guò)使兩種CAP抗原(CAP堿基和CAP琥珀酸酯)固定在微球的表面上，獲得兩種不同的抑制曲線(xiàn)。兩種方法的50%抑制濃度(IC50)值分別約為0.044和0.072 ng/mL，LOD分別約為0.001和0.006 ng/mL。兩種方法檢出限均遠(yuǎn)低于傳統(tǒng)ELISA方法。Wang等[38]制備了Fe3O4@SiO2磁性納米粒子(Fe-MNPs)應(yīng)用于化學(xué)發(fā)光免疫檢測(cè)。使用兩種不同類(lèi)型的功能化Fe-MNP(胺官能化Fe3O4@SiO2和羧酸官能化Fe3O4@SiO2)的兩種方法檢測(cè)樣品。兩種方法的IC50值分別約為0.024和0.046 ng/mL，LOD分別約為0.000 2和0.001 ng/mL。相比較使用納米金磁性微球作為載體，該方法成本相對(duì)較低并且不影響靈敏度。

1.5.3 膠體金免疫層析技術(shù)(gold immuno chromatographic assay，GICA)

膠體金免疫層析技術(shù)是一種是以膠體金顆粒作為示蹤標(biāo)志物，以顯示抗原一抗體反應(yīng)的一種免疫標(biāo)記技術(shù)，膠體金在弱堿環(huán)境下帶負(fù)電荷，由于靜電作用，與蛋白質(zhì)分子的正電荷基團(tuán)結(jié)合，形成牢固的金標(biāo)結(jié)合物。近年來(lái)，膠體金免疫層析技術(shù)在食品安全領(lǐng)域的應(yīng)用逐漸廣泛，主要應(yīng)用于水產(chǎn)品中氯霉素的檢測(cè)。

Zhou等[39]制備了平均直徑約為20 nm的納米金顆粒，構(gòu)建膠體金免疫試紙條，檢測(cè)水產(chǎn)品中的氯霉素殘留量，該方法CAP的檢出限為0.5 ng/mL。用于實(shí)際樣品的檢測(cè)時(shí)，色譜分析時(shí)間小于10 min，在不同溫度下，色譜分析帶的儲(chǔ)存壽命大于90 d。Zhou等[40]建立了氯霉素、鏈霉素、四環(huán)素和β-內(nèi)酰胺類(lèi)抗生素這4種抗生素的四聯(lián)體金免疫熒光分析法，對(duì)氯霉素的可視化檢測(cè)限為2.4 ng/mL;氯霉素的檢測(cè)范圍為0.019～1.2 ng/mL，線(xiàn)性相關(guān)系數(shù)大于0.97。通過(guò)對(duì)比地方標(biāo)準(zhǔn)(DB34/T 2254—2014)水產(chǎn)品中氯霉素殘留的檢測(cè)-膠體金法，可以發(fā)現(xiàn)兩種方法的檢出限均遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于地方標(biāo)準(zhǔn)提供方法的檢出限。

免疫分析法特異性強(qiáng)，靈敏度高，成本低，安全可靠，但其檢測(cè)限不高，定量檢測(cè)受到一定的限制，不如色譜方法，但可以為國(guó)標(biāo)方法定量檢測(cè)提供依據(jù)。檢測(cè)陽(yáng)性的樣品需要通過(guò)現(xiàn)行有效的LC-MS/MS，或氣相色譜串聯(lián)質(zhì)譜(GC-MS/MS)驗(yàn)證。

1.6 表面等離子共振技術(shù)(surface plasmon resonance，SPR)

表面等離子共振技術(shù)，根據(jù)入射光與金屬表面的等離子發(fā)生共振的原理，依靠光在其表面能量的變化來(lái)檢測(cè)分子之間的相互作用。該方法無(wú)需標(biāo)記樣品，故樣品所需用量少，可以動(dòng)態(tài)檢測(cè)生物分子相互作用的全過(guò)程，具有高靈敏度、檢測(cè)過(guò)程簡(jiǎn)單等優(yōu)點(diǎn)。然而由于儀器價(jià)格昂貴、分析時(shí)所用芯片較多，故成本高、難以大面積推廣。目前該技術(shù)多與其他檢測(cè)技術(shù)連用，用于提高檢測(cè)靈敏度。

Xia等[41]以表面等離子共振技術(shù)為基礎(chǔ)制作了一種生物傳感器，用于檢測(cè)復(fù)雜樣品中氯霉素和慶大霉素的含量。將抗原和牛血清白蛋白(BSA)兩種結(jié)合物共同固定在傳感器芯片上，通過(guò)梯度洗脫后順序檢測(cè)，最終得出2種抗生素的含量，對(duì)于氯霉素的檢測(cè)，LOD為5.28 ng/mL。該方法提高了樣品同時(shí)檢測(cè)的能力，但氯霉素抗體的解離能力有限，該傳感器還有很大的提升空間。Kara等[42]基于MIP和SPR技術(shù)結(jié)合檢測(cè)CAP，通過(guò)MIP納米粒子制備了具有CAP識(shí)別位點(diǎn)的SPR納米傳感器，該傳感器對(duì)蜂蜜樣品檢出限為40 ng/kg。選擇弗洛芬尼(Flovanni，F(xiàn)LP)和甲砜霉素(thiamphenicol，TAP)作為競(jìng)爭(zhēng)者以確定納米顆粒的選擇性，通過(guò)實(shí)驗(yàn)確定CAP/TAP的選擇性常數(shù)為8.86，CAP/FLP的選擇性常數(shù)為8.36，表明該方法具有良好的選擇性。

2 不同檢測(cè)方法的比較

色譜技術(shù)是國(guó)際上公認(rèn)的氯霉素殘留檢測(cè)方法，應(yīng)用于歐盟、日本和韓國(guó)等標(biāo)準(zhǔn)中，具有高靈敏度、結(jié)果準(zhǔn)確、重復(fù)性好等優(yōu)勢(shì)。然而該方法不適合大量樣品的檢測(cè)，現(xiàn)階段單一的色譜技術(shù)已經(jīng)不能滿(mǎn)足國(guó)際上對(duì)氯霉素檢出限的要求，如我國(guó)2015年后使用液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜的方法全面替代傳統(tǒng)的高效液相色譜法。

免疫分析法特異性強(qiáng)、靈敏度高、成本低廉并且安全可靠。然而該方法檢出限不高，定量檢測(cè)受到一定限制。表面等離子共振技術(shù)具有高靈敏度、檢測(cè)過(guò)程簡(jiǎn)單等優(yōu)點(diǎn)。然而由于儀器價(jià)格昂貴、分析時(shí)所用芯片較多，故成本高、難以大面積推廣。表面增強(qiáng)拉曼光譜技術(shù)檢測(cè)范圍極其廣，且不受樣品狀態(tài)的影響?？梢詸z測(cè)固體、流動(dòng)的液體。然而該技術(shù)發(fā)展仍有待改進(jìn)，優(yōu)化樣品光路、設(shè)計(jì)新型分光計(jì)等都可以進(jìn)一步提高拉曼檢測(cè)能力。

電化學(xué)傳感器以其高靈敏性、高穩(wěn)定性、高選擇性以及簡(jiǎn)捷、快速、經(jīng)濟(jì)等優(yōu)點(diǎn)，被廣泛應(yīng)用于氯霉素的檢測(cè)，是一種流行的檢測(cè)方法，目前關(guān)于電化學(xué)研究較為廣泛。但是目前的研究還存在線(xiàn)性范圍窄、離子干擾等問(wèn)題，尤其是化學(xué)修飾電極的研究應(yīng)用還處在探索試驗(yàn)階段，因此電化學(xué)傳感器測(cè)定氯霉素的研究還處在不斷發(fā)展中。

3 結(jié)論與展望

隨著人民生活水平的提高，食品安全問(wèn)題日益成為人們關(guān)注的焦點(diǎn)。為了滿(mǎn)足實(shí)際檢測(cè)的需要，各種實(shí)驗(yàn)方法也在快速發(fā)展。針對(duì)目前的研究現(xiàn)狀和實(shí)際發(fā)展，開(kāi)發(fā)創(chuàng)新型的檢測(cè)方法勢(shì)在必行。筆者認(rèn)為，納米材料的應(yīng)用提高了各種方法的靈敏度，如磁性納米材料的應(yīng)用、半導(dǎo)體量子點(diǎn)的應(yīng)用、納米金顆粒的應(yīng)用等，為日益嚴(yán)格的食品檢測(cè)提供了新的契機(jī)，其覆蓋了食品檢測(cè)的各個(gè)環(huán)節(jié)，包括樣品的前處理、傳感器的制備以及檢測(cè)分析信號(hào)的產(chǎn)生等。

目前氯霉素檢測(cè)方法取得了一定的進(jìn)展，但由于食品基質(zhì)復(fù)雜多樣，實(shí)際樣品基質(zhì)干擾嚴(yán)重，并且氯霉素殘留量為不得檢出，單一的檢測(cè)技術(shù)已經(jīng)不能滿(mǎn)足檢測(cè)靈敏度的要求。前處理技術(shù)應(yīng)當(dāng)與新型儀器設(shè)備組合使用，實(shí)現(xiàn)萃取進(jìn)樣的智能化，使得分析更加快速簡(jiǎn)潔化，樣品提取過(guò)程中應(yīng)當(dāng)減少有機(jī)溶劑的使用，合成高選擇性的固相聚合物材料。目前可以通過(guò)固相萃取、微萃取和磁珠分離技術(shù)等樣品前處理技術(shù)與食品安全快速檢測(cè)技術(shù)聯(lián)用，建立用于復(fù)雜食品樣品分析的快速檢測(cè)方法。在未來(lái)的研究中，應(yīng)當(dāng)開(kāi)發(fā)小型化、便攜、穩(wěn)定性好以及靈敏度高、可定量的傳感器。

此外，各級(jí)政府及食品全鏈條應(yīng)當(dāng)加強(qiáng)對(duì)氯霉素非法使用的監(jiān)督管理工作，從源頭上對(duì)氯霉素的使用精細(xì)管控，從而從源頭上杜絕氯霉素的非法添加。