肖 琳， 蔣麗娟， 王曉琳， 楊柳燕

（南京大學(xué)環(huán)境學(xué)院環(huán)境科學(xué)與工程國家級實驗教學(xué)示范中心，南京210023）

0 引 言

當(dāng)今科學(xué)處于飛速發(fā)展時期，在環(huán)境科學(xué)與生命科學(xué)的交叉領(lǐng)域尤為突出，對人才素質(zhì)和能力的要求越來越高。創(chuàng)新性人才通常是指能夠獨立思考，具有創(chuàng)造意識和創(chuàng)新精神，能夠創(chuàng)造性地提出問題和解決問題。創(chuàng)新性人才的培養(yǎng)需要在日常的教學(xué)活動中提供給學(xué)生進行主動進行創(chuàng)新觀察、超前思維、豐富知識，并通過創(chuàng)新實踐來培養(yǎng)堅韌的創(chuàng)新意志的機會［1］。本科教學(xué)偏重基礎(chǔ)，為適應(yīng)學(xué)科快速發(fā)展和變化，在保證基礎(chǔ)教學(xué)內(nèi)容系統(tǒng)完整實施的前提下，當(dāng)前大學(xué)教育還需要引入新進展及新技術(shù)，以拉近學(xué)生與現(xiàn)代科學(xué)發(fā)展的距離，并能學(xué)以致用［2］。大學(xué)生實驗課是一個實踐過程，在提高學(xué)生認知能力，理論聯(lián)系實際，運用所學(xué)知識和技能解決實際問題，培養(yǎng)創(chuàng)新型思維方面具有重要意義［3-4］。環(huán)境微生物學(xué)是采用微生物知識和技術(shù)研究處理環(huán)境問題的理論和技術(shù)基礎(chǔ)，在“環(huán)境微生物學(xué)實驗”中如仍沿襲傳統(tǒng)的教學(xué)內(nèi)容和教學(xué)模式已經(jīng)不能適應(yīng)新時代對人才培養(yǎng)的需求，微生物學(xué)實驗課教學(xué)改革的重要性和必要性更顯重要。

目前大多數(shù)高校所開設(shè)的“環(huán)境微生物學(xué)實驗”基本以驗證性實驗為主，雖然能夠培養(yǎng)學(xué)生微生物學(xué)的實驗操作能力，但驗證性實驗不要求學(xué)生進行主動系統(tǒng)的思考和創(chuàng)新，限制了學(xué)生主動思維和創(chuàng)新能力的提高。并且由于只是進行課本上的傳統(tǒng)型微生物操作實驗，對新進展和新技術(shù)的培養(yǎng)相對滯后，不利于學(xué)生整體素質(zhì)的提高。為滿足雙創(chuàng)型人才培養(yǎng)的需求，很多高校紛紛開展了綜合性設(shè)計實驗、研究型實驗、自主性實驗，以增強學(xué)生在實驗過程中的參與度，提高學(xué)生綜合素質(zhì)和創(chuàng)新能力［3-9］。環(huán)境學(xué)院自2008 年起即開設(shè)了環(huán)境微生物自主實驗［8］，但如綜合性設(shè)計實驗等一樣，存在著教師主導(dǎo)實驗設(shè)計和進程的問題，實驗題目仍較單一，學(xué)生實際參與性不強等問題而影響了培養(yǎng)目標(biāo)的達成［10］。為克服這些問題，在開設(shè)了多年自主實驗的基礎(chǔ)上，自2014 年起嘗試將學(xué)科前沿引入環(huán)境微生物學(xué)和環(huán)境微生物實驗的教學(xué)實踐，并實現(xiàn)完全的學(xué)生自主實驗，以促進學(xué)生對環(huán)境微生物前沿知識的接觸和創(chuàng)新能力的培養(yǎng)。本文介紹結(jié)合環(huán)境科學(xué)與工程的專業(yè)特色，引入學(xué)科前沿，為本科生開設(shè)“環(huán)境微生物學(xué)實驗”全自主實驗的探索和實踐。

1 自主性實驗教學(xué)改革的目的和總體思路

“環(huán)境微生物學(xué)實驗”的教學(xué)目的是與理論教學(xué)相結(jié)合，使環(huán)境科學(xué)和工程專業(yè)的學(xué)生建立和掌握微生物及相關(guān)操作的概念和技術(shù)，培養(yǎng)科學(xué)素養(yǎng)，強化自主創(chuàng)新能力，深化對微生物及在環(huán)境中的應(yīng)用的認識，為今后從事環(huán)境科學(xué)的研究、環(huán)境工程和環(huán)境修復(fù)等相關(guān)工作奠定實踐基礎(chǔ)［8］。

大量新的環(huán)境問題不斷涌現(xiàn)，如病原菌傳播和抗藥性基因的水平轉(zhuǎn)移問題、消毒副產(chǎn)物、個人護理品和微塑料等新型污染物問題，以及固廢和氣體污染物的合理處置問題等，給環(huán)境微生物學(xué)的發(fā)展帶來了機遇。同時，微生物學(xué)的新發(fā)現(xiàn)和新技術(shù)也極大促進了對環(huán)境問題的認識和處理技術(shù)的發(fā)展。同時，微生物學(xué)的新發(fā)現(xiàn)和新技術(shù)也極大促進了對環(huán)境問題的認識和處理技術(shù)的發(fā)展。

針對不斷涌現(xiàn)的新的環(huán)境問題和生物學(xué)技術(shù)的迅猛發(fā)展，在環(huán)境微生物學(xué)自主實驗中鼓勵學(xué)生聚焦環(huán)境微生物領(lǐng)域前沿發(fā)展動態(tài)，創(chuàng)新性思考微生物學(xué)在環(huán)境科學(xué)與工程領(lǐng)域的研究和應(yīng)用中的切入點，然后設(shè)計實驗并實施。這種自主實驗將提出問題和實驗內(nèi)容的權(quán)力完全交給學(xué)生，培養(yǎng)學(xué)生通過思考提出問題到解決問題的實踐培養(yǎng)學(xué)生的創(chuàng)新能力，不僅激發(fā)學(xué)生進行思考和探究專業(yè)問題的興趣，而且提供給學(xué)生相對系統(tǒng)的科研創(chuàng)新訓(xùn)練的機會，培養(yǎng)學(xué)生動手實踐能力，并且促使學(xué)生主動學(xué)習(xí)一些新知識和新技術(shù)，以順利達成目標(biāo)，解決問題，為其將來在專業(yè)領(lǐng)域深入開展研究奠定基礎(chǔ)。完全自主實驗開設(shè)以來，學(xué)生主動提出了如腸道微生物對污染物的響應(yīng)和對動物健康的影響，微生物在環(huán)境中的傳播、微生物對微塑料環(huán)境行為的影響等研究問題，并進行了實驗研究。這些針對學(xué)科前沿和社會熱點環(huán)境問題的實踐探索，讓學(xué)生了解環(huán)境領(lǐng)域亟待解決的實際問題，認識環(huán)境工程微生物實驗技術(shù)在環(huán)境領(lǐng)域的重要地位，激發(fā)專業(yè)學(xué)習(xí)和探索的興趣，更有利于學(xué)生主動創(chuàng)新能力的培養(yǎng)。

2 基礎(chǔ)性微生物學(xué)實驗是自主性實驗的必要條件

“環(huán)境微生物學(xué)實驗”是一門基礎(chǔ)實驗課，基礎(chǔ)性微生物學(xué)操作技術(shù)是教學(xué)中的重點。在有限的教學(xué)課時中需要合理安排實驗內(nèi)容，使學(xué)生能夠系統(tǒng)掌握微生物學(xué)的基本原理和實驗操作的技能，為進行完全自主實驗打下基礎(chǔ)。在環(huán)境微生物學(xué)實驗教學(xué)中進行了模塊化設(shè)計，分別為基礎(chǔ)微生物學(xué)技術(shù)模塊、環(huán)境微生物模塊和分子微生物學(xué)模塊，對學(xué)生進行基本技能的訓(xùn)練。其中基礎(chǔ)微生物學(xué)技術(shù)模塊著重培養(yǎng)學(xué)生無菌操作的概念和技術(shù)、進行微生物純培養(yǎng)的技術(shù)（包括培養(yǎng)基的配制滅菌、平板分離方法）、顯微觀察技術(shù)（包括微生物制片染色和顯微鏡的使用）、微生物鑒定技術(shù)（生理生化反應(yīng)和16S rDNA分析）等基本技術(shù)體系。環(huán)境微生物模塊根據(jù)環(huán)境科學(xué)與工程的專業(yè)特點，開設(shè)微生物監(jiān)測技術(shù)（水的細菌學(xué)檢查和發(fā)光菌急性毒性試驗）和微生物降解環(huán)境污染物（苯酚降解菌的分離）。分子微生物學(xué)模塊開設(shè)環(huán)境總DNA 的提取、環(huán)境中16S rDNA的擴增和分析的實驗，讓學(xué)生緊隨學(xué)科的發(fā)展，從分子水平去認識和研究環(huán)境微生物問題。

學(xué)生在進行這些基礎(chǔ)微生物實驗的學(xué)習(xí)中，全程參與每一個實驗的前期準備工作，進行完整的環(huán)境微生物學(xué)實驗技能訓(xùn)練。如在進行各類微生物的形態(tài)觀察和微生物染色、大小測量和計數(shù)的實驗中，都需要進行培養(yǎng)基的配制滅菌和接種的前期準備工作。在實驗的安排中，則把培養(yǎng)基的配制和滅菌作為第一個實驗，學(xué)生學(xué)習(xí)細菌、真菌和放線菌培養(yǎng)基的配制技術(shù)、滅菌和倒平板技術(shù)，既為后續(xù)實驗做了準備，又學(xué)習(xí)了操作知識。這種調(diào)整也能使學(xué)生更清楚一個完整的實驗流程，為自主實驗打下基礎(chǔ)。

為了能順利進行自主實驗，學(xué)生掌握基礎(chǔ)技能，需要在教學(xué)過程中進行適當(dāng)?shù)恼{(diào)整，既能完成基礎(chǔ)性環(huán)境微生物實驗的教學(xué)計劃，又有充足的時間進行自主實驗。如在微生物生長曲線的測定時，雖然總體耗時較長，但在取樣間隔有大量的空余時間。充分利用空余時間，安排學(xué)生進行后續(xù)細菌純種分離、生理生化反應(yīng)和水的細菌學(xué)檢查的培養(yǎng)基的配制，進一步提高他們對固體、液體、半固體培養(yǎng)基的區(qū)別和配制方法、不同生理生化反應(yīng)檢測所需培養(yǎng)基的配制方法、以及進行水中大腸菌群檢測的培養(yǎng)基的配制方法的理解和實際操作技能的掌握。通過這樣不斷強化他們的基礎(chǔ)性環(huán)境微生物操作技能，為自主實驗的實施做好技能和思想準備。學(xué)生在進行操作時，也能充分發(fā)現(xiàn)一些在實際操作中所存在的問題，如檸檬酸鹽利用培養(yǎng)基pH的調(diào)節(jié)對培養(yǎng)基的顏色有較大影響，甚至?xí)绊懞罄m(xù)實驗現(xiàn)象的觀察，這也會促使他們在進行自主實驗時注意避免已出現(xiàn)的問題。此外，也能讓學(xué)生更熟悉在微生物實驗中所用藥品，如瓊脂和營養(yǎng)瓊脂的區(qū)別。為避免影響整體的實驗進度，在學(xué)生進行準備實驗時，教師需進行檢查，如發(fā)現(xiàn)一些錯誤，要及時更正，并重新準備，最終使學(xué)生既能觀察到應(yīng)觀察的現(xiàn)象，達到實驗?zāi)康?，更能充分進行完整的實驗操作訓(xùn)練，不斷成長［8］。

3 自主性實驗過程

自主實驗本著完全開放的原則，鼓勵學(xué)生結(jié)合個人興趣自主選擇實驗題目。自主實驗的分組也完全參照學(xué)生自愿，自由組合，可以2 ～4 人一組，也可以1 人一組［11］。對于環(huán)境科學(xué)與工程的大三學(xué)生，在專業(yè)課的學(xué)習(xí)中已經(jīng)對環(huán)境科學(xué)的發(fā)展前沿有所接觸，更有利于自主實驗選題。如在2018 ～2019 學(xué)年，學(xué)生選擇了環(huán)境中的新型熱點污染物微塑料及不同污染物對小鼠腸道微生物的代謝產(chǎn)酸作用進行了研究，這是非常具有前沿性的研究方向。學(xué)生在選題的過程中主動接觸和了解不同環(huán)境問題的研究現(xiàn)狀，使教學(xué)內(nèi)容得到補充和更新，也使環(huán)境微生物自主實驗具有前沿性、挑戰(zhàn)性和新穎性。

以微塑料為例，它作為一種新型污染物引發(fā)了學(xué)生的研究興趣。在學(xué)生提出后，教師指導(dǎo)學(xué)生查閱相關(guān)的微塑料研究進展的文獻，發(fā)現(xiàn)微塑料上有大量細菌定殖，并且細菌的群落結(jié)構(gòu)與水體中具有較大的差異［12-13］。根據(jù)這個研究現(xiàn)狀，學(xué)生提出研究不同因素（水體中的可溶性有機物和光照）對微生物在微塑料上定殖的影響。在自主實驗題目確定，科學(xué)問題提出后，學(xué)生們通過進一步對微塑料進行文獻查閱、小組討論，在教師的協(xié)助下，分別選擇了生物可降解性微塑料和傳統(tǒng)型微塑料作為研究材料，對實驗方案進行分析和整理。實驗小組根據(jù)實驗方案分別研究了腐殖酸和光照對大腸桿菌在聚乳酸、PHA、聚乙烯微塑料上定殖的影響。在這個自主實驗中，學(xué)生對微生物培養(yǎng)全過程、收集、檢測、顯微觀察和拍照、微生物形成的生物膜的測試等方面進行了全方位的環(huán)境微生物學(xué)基本科研訓(xùn)練，而且對微生物與環(huán)境科學(xué)（水化學(xué)調(diào)節(jié)、光降解、吸附解析、微塑料的環(huán)境行為）的交叉，環(huán)境微生物學(xué)研究在環(huán)境中研究和應(yīng)用中的意義有了更為深入的體會。

環(huán)境微生物學(xué)自主實驗基本是一個小的獨立科研訓(xùn)練，學(xué)生不僅要完成實驗，更需要用科研的思維來完成整個實驗從選題到結(jié)題報告。在完成自主實驗的過程中，學(xué)生進行了獨立思考，獨立查閱文獻，根據(jù)研究進展和自己已有的知識提出科學(xué)問題，根據(jù)制訂實驗方案，確定實驗方法和步驟，準備實驗材料，并根據(jù)實驗需要學(xué)習(xí)儀器的使用方法（如在微塑料的研究中微生物定殖前后zeta 電位的測試），最后撰寫符合科研論文要求的實驗報告等。經(jīng)過全自主性的環(huán)境微生物實驗，學(xué)生得到了較為科學(xué)研究的訓(xùn)練，體會了創(chuàng)新思維、獨立思考、主動參與的實踐樂趣，為以后參與大學(xué)生創(chuàng)新計劃項目和畢業(yè)論文等都打下了堅實的基礎(chǔ)。

4 自主性實驗的效果

環(huán)境學(xué)院自2014 年起，在原來的半自主性綜合實驗的基礎(chǔ)上，進行了全自主性環(huán)境微生物實驗教學(xué)的改革與實踐，取得了明顯的教學(xué)效果，也獲得了一些經(jīng)驗和體會。①基礎(chǔ)性實驗和自主實驗兩者是相輔相成的。學(xué)生經(jīng)過一段時間的學(xué)習(xí)和訓(xùn)練，儲備了足夠多的知識和技能，才有可能獨立完成自主性實驗。而自主性實驗是對前期基礎(chǔ)性實驗的融合和提高，結(jié)合學(xué)生的興趣和當(dāng)前熱點，是學(xué)生開始獨立工作，自主創(chuàng)新的一個起點和實踐。②學(xué)生具有很強的求知欲和自我管理能力，在教學(xué)活動中應(yīng)予以充分的鼓勵和肯定。通過自主性實驗的教學(xué)實踐，進行實驗內(nèi)容和實驗室的雙開放，可以給學(xué)生更大的自由思考和自主學(xué)習(xí)的空間，使其各方面能力得到充分的培養(yǎng)和鍛煉，有利于學(xué)生素質(zhì)和創(chuàng)新能力的培養(yǎng)［8］。

經(jīng)過5 年的實踐，發(fā)現(xiàn)自主性實驗在激發(fā)學(xué)生學(xué)習(xí)熱情、培養(yǎng)學(xué)生的創(chuàng)新能力、嚴謹求實的科學(xué)態(tài)度、團隊協(xié)作精神方面成效顯著。改革后不縮減原實驗教學(xué)內(nèi)容，每堂課內(nèi)所安排的實驗內(nèi)容增加較多，尤其是后期的自主實驗，實驗的時間已經(jīng)不局限于每周的實驗課時安排，而是根據(jù)實驗的進度來安排時間，學(xué)生主動利用午休、晚上和周末的時間來完成自己的實驗。同時，學(xué)生對于如何將理論用于實踐實現(xiàn)新的產(chǎn)出，也有了自己的實踐體會。如在垃圾降解菌的分離中，學(xué)生在分離到產(chǎn)淀粉酶和蛋白酶的菌株后，想進一步提高其產(chǎn)酶能力，欲采用誘變的方法進行。通過查閱文獻，確定采用紫外誘變，不僅提高了產(chǎn)酶能力，也掌握了在原來的實驗教學(xué)大綱中并未包含的微生物誘變技術(shù)。

在基礎(chǔ)性實驗中，由于學(xué)生的全程參與，已對實驗的嚴謹性有所體會。在自主實驗中，學(xué)生更是得到了從實驗方案制定、每個測試的實驗步驟制定到全程自己準備、操作和獲取實驗結(jié)果的全面訓(xùn)練。這個過程中，若考慮不周，如出現(xiàn)培養(yǎng)基配制量不足、槍頭忘記滅菌等情況，則會影響實驗的進度，甚至造成實驗的失敗。通過這種全自主實驗，對學(xué)生全面思考、嚴謹和求實的科學(xué)態(tài)度進行了很好的鍛煉和培養(yǎng)。在自主實驗中，通常每組會有2 ～3 名同學(xué)共同參與，也培養(yǎng)了學(xué)生的團隊協(xié)作和溝通能力。如在進行實驗的過程中，組內(nèi)同學(xué)根據(jù)選課時間的不同，靈活安排實驗時間，輪流進行實驗，確保實驗完成。小組間在實驗技術(shù)和實驗材料上也可以進行友好協(xié)商，互通有無，培養(yǎng)學(xué)生的科研團隊協(xié)作精神。

創(chuàng)新和科研總不是一帆風(fēng)順的，常常會有失敗的發(fā)生。環(huán)境微生物學(xué)自主實驗因為并非驗證性實驗，并且是鼓勵學(xué)生根據(jù)環(huán)境學(xué)科的前沿進行的實驗設(shè)計，失敗難免發(fā)生。如在微塑料的實驗中就發(fā)現(xiàn)，聚乳酸和PHA微塑料在水中具有很好的分散性，而聚乙烯在水體中很難分散，并且后續(xù)很難離心操作，同學(xué)們只能舍去這個實驗組，體會到創(chuàng)新和科研的不易，以及如何正確面對失敗。

5 自主性實驗存在的問題及反思

在自主實驗中，雖然是要完全發(fā)揮學(xué)生的主動性，培養(yǎng)創(chuàng)新能力，但自主性實驗仍是本科實驗教育的內(nèi)容之一，要保證每一個學(xué)生都能完成，教師需要在其中發(fā)揮好掌舵人的作用。在教學(xué)過程如發(fā)現(xiàn)有的學(xué)生積極性不夠或尚不具備閱讀文獻、獨立思考提出科研問題的能力時，教師就給予該學(xué)生足夠的輔助，以敦促和幫助他們進行思考、探索、提出問題和設(shè)計實驗方案［14］。在自主實驗的選題上，重點鼓勵學(xué)生選擇自己感興趣的內(nèi)容進行研究，教師在教學(xué)中可根據(jù)當(dāng)前的一些熱點環(huán)境問題，提出幾個備選方案（微生物對環(huán)境類激素的降解、餐廚垃圾分解菌的篩選等），有些學(xué)生可以在老師提供的方向中進一步細化來進行自主實驗，以保證每個學(xué)生都能完成自主實驗，得到充分的訓(xùn)練。在實驗方案的制定中，可以通過提問，了解他的研究假設(shè)是什么，想證明什么問題，他設(shè)計的試驗內(nèi)容是否能夠證明這些問題，并提出他還需要在哪些方面進行更改或深化。

環(huán)境微生物自主實驗是針對大三的本科生開設(shè)的，雖然有些學(xué)生在大一和大二已經(jīng)歷些科研訓(xùn)練，但絕大多數(shù)學(xué)生的實踐還以驗證性實驗為主。有的學(xué)生此時對完整的實驗方案設(shè)計能力尚不足，此時需要老師反復(fù)對學(xué)生進行引導(dǎo)。為保證自主實驗的順利進行，①在前期基礎(chǔ)性實驗中的有意訓(xùn)練，在進行自主性實驗時，更要與學(xué)生進行反復(fù)溝通，幫助學(xué)生完善實驗方案。與大學(xué)生創(chuàng)新計劃不同，自主實驗時間較短，故實驗方案的工作量和難度要適宜，以保證在有限的時間內(nèi)能夠完成。②通過讓學(xué)生進行提前準備，確定實驗方案，從而最大限度保證學(xué)生能在此階段找到自己感興趣的問題，并完成實驗設(shè)計。③自主實驗需要老師進行全程跟蹤，要有研究生助教全程協(xié)助指導(dǎo)。由于在自主實驗過程中實驗室全天開放，實驗室的安全管理也是重中之重［15］。自主實驗雖然由學(xué)生自主設(shè)計、自主準備和自主完成，但老師的提醒和保障作用是自主實驗?zāi)軌蛲瓿傻闹匾蛩亍Ｗ灾鲗嶒炓驗閷嶒灠才诺男枰?，大部分學(xué)生的實驗并不能在原定的上課時間進行。老師即使不能在現(xiàn)場，也應(yīng)該通過微信等即時通信，跟蹤每個學(xué)生的實驗進程，提醒學(xué)生養(yǎng)成良好的實驗記錄習(xí)慣，應(yīng)對不時出現(xiàn)的問題，確保他們遇到問題能夠及時解決，順利完成自主實驗。

6 結(jié) 語

雖然開設(shè)自主實驗對本科生教訓(xùn)實驗室的建設(shè)管理和教師都提出了更高的要求，但自主實驗是對傳統(tǒng)的實驗教學(xué)的一個更好補充，將學(xué)生被動接受被動學(xué)習(xí)的模式轉(zhuǎn)變?yōu)閷W(xué)生主動學(xué)習(xí)，以提高學(xué)生的自主學(xué)習(xí)意識和能力，有助于培養(yǎng)學(xué)生的創(chuàng)新意識。以自主實驗為基礎(chǔ)，通過大學(xué)生創(chuàng)新訓(xùn)練計劃和創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)訓(xùn)練，逐步提高大學(xué)生的雙創(chuàng)能力，挖掘大學(xué)生自身潛在的創(chuàng)造力，為國家培養(yǎng)更出色的人才。