鐘璧璟，雷芹

安康市中醫(yī)醫(yī)院病理科，陜西 安康 725000

結直腸癌是一種常見的惡性腫瘤，近年來的發(fā)病率一直呈上升的趨勢[1]。在我國，結直腸癌發(fā)病率顯著上升，死亡率也很高，其中城市發(fā)病率高于農村，導致該病的因素很多，如有家族史、患有腸炎或者腸道腺瘤等[2]。MLH1、MSH2、MSH6、PMS2四項腫瘤標志物是該病相關的錯配修復蛋白，其如果發(fā)生突變會使得發(fā)生結直腸癌的概率大大增加[3]。如果結直腸癌篩查中及早發(fā)現(xiàn)，可以起到預防作用，有報道稱，檢測以上四項腫瘤標志物能夠為治療和預后提供指導[4]。淋巴轉移是結直腸癌主要的轉移方式，是否轉移決定手術操作和術后生存情況[5]。本文旨在研究結直腸癌患者MLH1、MSH2、MSH6、PMS2四項錯配修復蛋白表達水平、病理特點及其與淋巴轉移的相關性。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2018年1月至2019年3月在安康市中醫(yī)醫(yī)院接受治療的結直腸癌患者105例作為研究對象。其中男性65例，女性40例；年齡30~85歲，平均(62.35±6.54)歲；病變位于左半結腸35例，有半結腸30例，直腸40例。本研究經醫(yī)院倫理委員會批準，患者及其家屬均簽署知情同意書。

1.2 觀察指標與檢測方法 所有患者均通經過兩名病理醫(yī)師診斷，收集所有患者的病理標本，采用4%福爾馬林固定，之后進行石蠟包埋和HE染色。石蠟切片為3~4μm，烤切片后脫蠟、水化后用PBS進行沖洗，利用過氧化物酶阻斷劑封閉內源性過氧化酶的活性，加入一抗。在室溫孵育后加生物素標記的二抗，再加鏈霉素抗生物素的過氧化酶溶液，進行孵育后向其中滴加DAB顯色，采用蘇木素再復染，最后常規(guī)脫水，透明和封片。MLH1、MSH2、MSH6和PMS2抗體均購自于福州邁新生物技術開發(fā)有限公司。MLH1、MSH2、MSH6和PMS2的陽性染色均定位于細胞核中，用磷酸鹽緩沖液(PBS)代替一抗作為陰性對照。采用免疫組化法檢測MLH1、MSH2、MSH6、PMS2蛋白的表達水平。

1.3 統(tǒng)計學方法 應用SPSS18.0統(tǒng)計軟件進行數(shù)據(jù)分析，計數(shù)資料兩兩比較采用χ2檢驗，以P<0.05為差異具有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 結直腸癌患者組織中MLH1、MSH2、MSH6、PMS2蛋白的表達和缺失情況 105例結直腸癌患者中四項腫瘤標志物表達缺失者21例，總缺失率為20.00%，其中MLH1、MSH2、MSH6、PMS2表達缺失者分別為5例(4.76%)、3例(2.86%)、3例(2.86%)和10例(9.52%)，見圖1。

2.2 結直腸癌患者組織中MLH1、MSH2、MSH6、PMS2蛋白表達與病理的關系 結直腸癌患者中MLH1、MSH2、MSH6和PMS2的表達缺失與年齡、性別和腫瘤大小無關(P>0.05)；與腫瘤部位相關，右半結腸蛋白表達缺失明顯高于左半結腸和直腸，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。MSH2的表達缺失與發(fā)病位置和侵襲程度無關(P>0.05)；MSH6的表達缺失與侵襲程度和淋巴轉移無關(P>0.05)；PMS2的表達缺失與侵襲程度無關(P>0.05)，見表1。

圖1 結直腸癌患者組織中MLH1、MSH2、MSH6、PMS2四項腫瘤標志物表達情況(×10)

表2 結直腸癌患者組織中MLH1、MSH2、MSH6和PMS2蛋白表達與病理特點的關系

3 討論

結直腸癌由多種生活因素、遺傳和疾病共同所致[6]。生活因素主要包括肥胖、高脂肪、高蛋白和低纖維的飲食習慣等，肉類食物的增加與結直腸癌的發(fā)生有明顯相關性[7]。臨床研究顯示，基因突變會導致家族性腺瘤性息肉病和遺傳性非息肉性結腸癌，其中遺傳性非息肉性結腸癌是由錯配修復蛋白(MLH1、MSH2、MSH6、PMS2)突變造成，腺瘤越大，癌變的可能性也越大[8-9]。多位學者研究發(fā)現(xiàn)，通過早期篩查錯配修復蛋白，評估患者的病情狀況，能降低癌變的發(fā)生[10]。結直腸癌的主要治療方式是放化療和手術治療，而淋巴轉移影響治療的效果，也影響患者的恢復[11]。因此，探討影響淋巴轉移的因素可以用來指導臨床治療，從而提高生存率。

本研究中，105例結直腸癌患者中四項腫瘤標志物表達缺失者21例，總缺失率為20.00%，其中MLH1、MSH2、MSH6、PMS2表達缺失者分別為5例(4.76%)、3例(2.86%)、3例(2.86%)和10例(9.52%)，這些與彭芳等[12]研究結果一致。錯配修復蛋白是機體內的安全保證，其能夠維持遺傳物質的完整性和穩(wěn)定性，在DNA修復過程中會涉及很多分子和酶[13]。MLH1與MSH2是其中最主要的參與者，這兩種蛋白一般會與其同源性的錯配修復蛋白組成二聚體來發(fā)揮作用，MLH1和PMS2，MSH2和MSH6分別形成兩種功能性的二聚體復合物[14-15]。MLH1和MSH2兩種蛋白是二聚體中的主導蛋白，而PMS2和MSH6是兩種配對蛋白，MLH1和MSH2發(fā)生突變會降解二聚體蛋白，導致主導蛋白和配對蛋白的表達缺失[16]。如果MLH1蛋白表達缺失，PMS2蛋白就會發(fā)生表達缺失，如果MSH2蛋白表達缺失，MSH6就會同時發(fā)生表達缺失[17]。采用免疫組化的法檢測以上四種蛋白，能夠為檢測基因和診斷疾病提供指導[18]。

本研究結果顯示，MLH1表達缺失與發(fā)病位置、侵襲程度和淋巴轉移顯著相關，左右半結腸明顯高于直腸，侵襲漿膜外的明顯高于黏膜和肌層，MSH2表達缺失與淋巴轉移相關，MSH6的表達缺失與發(fā)病位置相關，左右半結腸明顯高于直腸，PMS2表達缺失與與發(fā)病位置和淋巴轉移明顯相關，左右半結腸明顯高于直腸，表明蛋白表達缺失在左右半結腸和直腸處的發(fā)生存在差異，其與侵襲程度和淋巴轉移有一定關系。蛋白表達缺失者淋巴轉移少，以上表明蛋白表達缺失的結直腸癌手術后的預后要優(yōu)于蛋白表達的結直腸癌手術[19]。

綜上所述，檢測MLH1、MSH2、MSH6、PMS2四種腫瘤標志物蛋白表達情況能夠判斷缺失類型，蛋白表達情況和病理特點與淋巴轉移明顯相關，錯配修復蛋白檢測判斷疾病病情、治療和預后有很重要的價值。