程俊貞，劉光輝，閆若潛，趙勝杰，房大學(xué)

（1.許昌市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，河南 許昌 461000；2.河南省動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，鄭州 450008）

豬球蟲病是由豬等孢球蟲（Isospora suis）和某些艾美耳屬（Eimeria）球蟲寄生在哺乳期及新近斷奶仔豬小腸上皮細(xì)胞所引起一種寄生性原蟲病，臨床上以腹瀉為主要癥狀[1-4]。哺乳仔豬患球蟲病是養(yǎng)豬場(chǎng)的常見問題[5]。發(fā)病主要出現(xiàn)在8～15日齡仔豬，感染日齡越小，病情越嚴(yán)重[5-7]。發(fā)病仔豬出現(xiàn)腹瀉，糞便為黃色到灰色，開始時(shí)糞便松軟或呈糊狀，隨著病情加重變?yōu)橐籂?，并且發(fā)出腐敗乳汁樣酸臭味。仔豬吮乳減少，被毛粗亂，脫水，增重下降，導(dǎo)致新生仔豬死亡率增加，斷奶時(shí)營(yíng)養(yǎng)不良，很多仔豬成了僵豬，給養(yǎng)豬生產(chǎn)造成了很大的經(jīng)濟(jì)損失[1，6-9]。

河南省是我國的養(yǎng)豬大省之一，為掌握河南省仔豬球蟲病目前的流行狀況及種類分布，以及為制定切實(shí)可行的預(yù)防措施提供依據(jù)，筆者于2018年8—11月和2019年3—5月選取河南省豫東、豫西、豫南、豫北和豫中的部分市縣的25個(gè)規(guī)?；i場(chǎng)及專業(yè)戶和6個(gè)農(nóng)村散養(yǎng)戶豬球蟲感染情況和種類分布情況進(jìn)行了初步的調(diào)查，其結(jié)果如下。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 試劑 飽和糖-鹽水溶液：380 g氯化鈉與500 g蔗糖溶解于1 L水中，加熱溶解，冷卻備用。比重為1.226。

1.1.2 器材 顯微鏡、80目金屬篩、130目金屬篩、漏斗、離心機(jī)、鐵架臺(tái)、天平、燒杯、玻璃棒、蓋玻片、載玻片、膠頭滴管、冰箱等。

1.2 方法

1.2.1 樣品采集 采用直腸取糞法，采集1～10日齡、11～20日齡、21～30日齡、31～40日齡的仔豬及41日齡以上仔豬、肥育豬等糞樣或收集剛排出的新鮮糞便約50～100 g，分別裝入干凈塑料袋中，標(biāo)注豬場(chǎng)名稱、編號(hào)、豬的年齡，置4℃冰箱內(nèi)備查。

1.2.2 樣品處理

（1）定性檢查卵囊。用飽和糖-鹽水溶液漂浮法檢查球蟲卵囊。取2 g糞便樣品，用10 mL自來水?dāng)嚢杈鶆蚝?，加?0 mL自來水?dāng)嚢杈鶆?，?0目和130目金屬篩雙層過濾，將濾液置于離心管中以3 000 r/min離心10 min，取出離心管棄去上清液，之后再加入50 mL左右飽和糖-鹽水溶液用干凈的玻璃棒攪拌均勻，再以3 000 r/min離心10 min，然后用吊環(huán)吊一環(huán)上清液涂片，在高倍顯微鏡（400×）下觀察，根據(jù)卵囊大小、形態(tài)進(jìn)行查找。

（2）定量檢查每克糞便卵囊數(shù)（OPG值）。用麥克馬斯特氏計(jì)數(shù)法[3]進(jìn)行計(jì)數(shù)：稱取2 g糞便置100mL燒杯中，加10mL飽和鹽水，將糞便搗碎成泥狀，再加飽和鹽水至60 mL，混勻；用60目銅篩過濾，用膠頭滴管取濾液注入麥克馬斯特氏計(jì)數(shù)室，靜置2 min后在100×顯微鏡下檢查，計(jì)數(shù)1 cm2刻度中的蟲卵總數(shù)，求兩個(gè)刻室中蟲卵的平均數(shù)（該小室中的容積為1 cm×1 cm×0.15 cm＝0.15 cm3），乘以200即為每克糞便卵囊數(shù)（OPG）。

1.2.3 卵囊收集 用飽和糖-鹽水溶液漂浮法收集球蟲卵囊。將陽性糞樣加4～5倍量水?dāng)嚢杈鶆?，在裝有80目和130目雙層金屬篩的漏斗中過濾，將濾液置于離心管中以3 000 r/min離心10 min，取出離心管棄去上清液，再加入50mL左右飽和糖－鹽水溶液用干凈的玻璃棒攪拌均勻，再以3 000 r/min離心10 min，然后用專門收集卵囊用的鐵絲圈網(wǎng)多次蘸取上層表面液在裝有100 mL左右自來水的燒杯中涮洗，即將卵囊收集到燒杯中制成卵囊混懸液；再將卵囊混懸液以3 000 r/min離心10 min，取出離心管棄去上清液，離心管中便為球蟲卵囊。

1.2.4 卵囊培養(yǎng) 將收集到的球蟲卵囊，加入2.5%重鉻酸鉀溶液，取1～2滴收集的新鮮卵囊液置18mm×18mm蓋玻片上，再覆以同樣大小蓋玻片，四周用凡士林封閉后置載玻片上，28℃恒溫箱中培養(yǎng)，每隔2 h用顯微鏡（400×）觀察其孢子化程度，記錄結(jié)果并顯微拍照。其余卵囊置平皿于27～28℃的恒溫箱中培養(yǎng)觀察直至80%卵囊完全孢子化，期間保持深度0.5 cm，每天用吸管吹打2～3次，計(jì)數(shù)后置于4℃冰箱中保存。

2 結(jié)果與分析

2.1 豬場(chǎng)及散養(yǎng)戶豬球蟲感染情況

調(diào)查商丘、漯河、許昌、禹州、洛陽、新安、偃師、宜陽、鄭州、淇縣、鶴壁、嵩縣、伊川、汝陽等14個(gè)地、市縣的25個(gè)具有代表性的規(guī)?；i場(chǎng)及專業(yè)戶和6個(gè)地市農(nóng)村散養(yǎng)戶，共檢查2 051份樣品，豬球蟲及豬等孢球蟲感染情況的具體結(jié)果見表1和表2。

表1 豬場(chǎng)及散養(yǎng)戶豬球蟲感染情況

表2 豬場(chǎng)及散養(yǎng)戶豬等孢球蟲感染情況

表2 豬場(chǎng)及散養(yǎng)戶豬等孢球蟲感染情況（續(xù)）

2.2 不同豬場(chǎng)及散養(yǎng)戶各日齡段豬球蟲感染情況

在25個(gè)豬場(chǎng)及專業(yè)戶和6個(gè)地市的散養(yǎng)戶中，除了偃師某豬場(chǎng)2和偃師散養(yǎng)戶的球蟲感染為陰性，其余豬場(chǎng)的豬球蟲感染均為陽性。感染日齡主要集中在11～20日齡，豬場(chǎng)陽性率為61.29%，球蟲的最高感染率為83.33%，平均感染率為23.29%；其次在1～10日齡，豬場(chǎng)陽性率為41.94%，球蟲的最高感染率為66.67%，平均感染率為17.71%；在21～30日齡，豬場(chǎng)陽性率為35.48%，球蟲的最高感染率為85.71%，平均感染率為13.35%；在31～40日齡，豬場(chǎng)陽性率為38.71%，球蟲的最高感染率為80%，平均感染率為7.04%；在41日齡以上豬場(chǎng)陽性率為48.39%，球蟲的最高感染率為37.50%，平均感染率為7.95%。

2.3 不同豬場(chǎng)及散養(yǎng)戶各日齡段豬等孢球蟲感染情況

在25個(gè)豬場(chǎng)及專業(yè)戶和6個(gè)地市的散養(yǎng)戶中，除了洛陽某豬場(chǎng)1、偃師某豬場(chǎng)2、洛陽專業(yè)戶2、嵩縣專業(yè)戶、宜陽散養(yǎng)戶和偃師散養(yǎng)戶的等孢球蟲感染為陰性，其余豬場(chǎng)的豬等孢球蟲感染均為陽性。感染日齡也主要集中在11～20日齡，豬場(chǎng)陽性率為61.29%，豬等孢球蟲的最高感染率為66.67%，平均感染率為19.52%；其次在1～10日齡，豬場(chǎng)陽性率為38.71%，豬等孢球蟲的最高感染率為50%，平均感染率為14.39%；在21～30日齡，豬場(chǎng)陽性率為35.48%，豬等孢球蟲的最高感染率為42.86%，平均感染率為7.95%；在31～40日齡，豬場(chǎng)陽性率為19.35%，豬等孢球蟲的最高感染率為20%，平均感染率為2.13%；在41日齡以上的感染率為0。

2.4 各日齡段豬球蟲和等孢球蟲感染情況

在所有調(diào)查豬場(chǎng)中，球蟲感染日齡主要集中在11～20日齡，感染率為23.29%；其次在1～10日齡，感染率為17.71%；再次在21～30日齡，感染率為13.35%；在31～40日齡，感染率為7.04%；在41日齡以上，感染率為7.95%；平均感染率為12.14%。而等孢球蟲感染日齡也主要集中在11～20日齡，感染率為19.52%；其次在1～10日齡，感染率為14.39%；在21～30日齡，感染率為7.95%；在31～40日齡，感染率為2.13%；在41日齡以上，感染率為0；平均感染率為6.53%。

2.5 豬場(chǎng)及散養(yǎng)戶豬球蟲感染強(qiáng)度（OPG值）

由表3可知，在25個(gè)豬場(chǎng)及專業(yè)戶和6個(gè)地市的散養(yǎng)戶中，總的感染強(qiáng)度不大。豬球蟲感染強(qiáng)度最大的是2號(hào)豬場(chǎng)（漯河某豬場(chǎng)），為46 400；其次是16號(hào)豬場(chǎng)（淇縣某豬場(chǎng)1），為32 400；除了12號(hào)（偃師某豬場(chǎng)2）和31號(hào)（偃師散養(yǎng)戶）外，感染強(qiáng)度最小的是13號(hào)（偃師某豬場(chǎng)3），為200；平均強(qiáng)度為9 593。豬等孢球蟲感染強(qiáng)度最大的是2號(hào)豬場(chǎng)（漯河某豬場(chǎng)），為46 400；其次是16號(hào)豬場(chǎng)（淇縣某豬場(chǎng)1），為28 600；除了7號(hào)豬場(chǎng)（洛陽某豬場(chǎng)）、12號(hào)豬場(chǎng)（偃師某豬場(chǎng)2）、23號(hào)豬場(chǎng)（洛陽專業(yè)戶2）、25號(hào)豬場(chǎng)（嵩縣專業(yè)戶）、27號(hào)（宜陽散養(yǎng)戶）和31號(hào)（偃師散養(yǎng)戶）外，感染強(qiáng)度最小的是13號(hào)（偃師某豬場(chǎng)3），為200；平均強(qiáng)度為6 284。

表3 豬場(chǎng)及散養(yǎng)戶豬球蟲總的感染強(qiáng)度和豬等孢球蟲感染強(qiáng)度 個(gè)

3 結(jié)論與討論

3.1 11～20日齡仔豬球蟲感染率最高

調(diào)查和試驗(yàn)結(jié)果表明，豬球蟲主要感染1～20日齡仔豬，尤其是11～20日齡的仔豬，感染率為23.29%，最高感染率可達(dá)83.33%，21日齡以后感染率逐漸降低；等孢球蟲感染日齡也主要集中在11～20日齡，感染率為19.52%，最高感染率為66.67%；41日齡以上則不易感，調(diào)查的結(jié)果是41日齡以上感染率為0。據(jù)有關(guān)資料報(bào)道：仔豬球蟲主要感染8～15日齡的仔豬[5-7]。本研究結(jié)果與之相比，易感日齡有擴(kuò)大化的趨勢(shì)，說明仔豬年齡越小，對(duì)球蟲越易感。

3.2 豬球蟲病在河南省普遍存在

豬球蟲平均感染率為12.14%，豬等孢球蟲平均感染率為6.53%。在25個(gè)豬場(chǎng)及專業(yè)戶和6個(gè)地市的散養(yǎng)戶中，除了12號(hào)豬場(chǎng)（偃師某豬場(chǎng)2）和31號(hào)（偃師散養(yǎng)戶）的球蟲感染為陰性，其余豬場(chǎng)的豬球蟲感染均為陽性。在陽性場(chǎng)中，豬球蟲感染率可高達(dá)40.43%（淇縣某豬場(chǎng)3）和35.29%（淇縣某豬場(chǎng)1），感染率最低為0.84%（洛陽某豬場(chǎng)）。說明豬球蟲病在河南廣泛存在，而且感染率挺高。不同豬場(chǎng)間球蟲感染率存在顯著的差別，其原因是：洛陽某豬場(chǎng)為新建的大型養(yǎng)殖場(chǎng)，沒有受過豬球蟲的污染，這就大幅減少了豬的感染機(jī)會(huì)，飼養(yǎng)管理和衛(wèi)生條件比較好，豬的糞便采取水沖式，且及時(shí)清掃糞便，再加上嚴(yán)格的消毒措施，所以感染率較低。淇縣某豬場(chǎng)3和淇縣某豬場(chǎng)1雖然規(guī)模比較大，但其是個(gè)老場(chǎng)，況且飼養(yǎng)管理和衛(wèi)生條件都比較差，豬的糞便不能及時(shí)清理，以前曾經(jīng)發(fā)生過球蟲感染病例，而且一旦發(fā)生球蟲感染，卵囊就很難清除，所以此豬場(chǎng)的設(shè)施以及用具都是污染源，因而其感染率比較高?？梢娯i場(chǎng)球蟲的感染情況與豬場(chǎng)的飼養(yǎng)管理和環(huán)境衛(wèi)生條件有密切的關(guān)系。

在所有被調(diào)查的豬場(chǎng)中，散養(yǎng)戶的平均感染率為11.91%，而豬場(chǎng)的平均感染率則為12.54%，說明與散養(yǎng)戶相比，豬場(chǎng)的球蟲感染率較高，其原因可能是豬場(chǎng)的養(yǎng)殖密度大，豬球蟲更易傳播。說明豬球蟲的傳播與養(yǎng)殖密度也相關(guān)，養(yǎng)殖密度大，豬群之間更易接觸，給豬球蟲的傳播創(chuàng)造有利條件；反之亦然。

據(jù)周繼賢等（1996）[10]報(bào)道，河南省的仔豬球蟲感染率為43.4%，豬等孢球蟲的感染率為2.54%。這次我們對(duì)河南省調(diào)查結(jié)果為：仔豬球蟲平均感染率為12.14%，豬等孢球蟲平均感染率為6.53%，說明河南省的仔豬平均球蟲感染率雖然有所降低，但等孢球蟲的感染率有所升高。在仔豬球蟲病中，豬等孢球蟲的致病性較強(qiáng)，因此對(duì)仔豬球蟲病要引起高度重視。

3.3 各豬場(chǎng)之間仔豬球蟲的感染強(qiáng)度存在差異

本調(diào)查結(jié)果顯示，豬球蟲病在河南省廣泛存在，感染率也較高，但是各豬場(chǎng)之間仔豬球蟲的感染強(qiáng)度大小不等，豬球蟲感染強(qiáng)度最大為46 400，最小為200，平均感染強(qiáng)度為9 593；豬等孢球蟲感染強(qiáng)度最大為46 400，感染強(qiáng)度最小也為200，平均感染強(qiáng)度為6 284。其原因可能是近年來，人們對(duì)仔豬球蟲病越來越重視，大量抗球蟲藥應(yīng)用于生產(chǎn)中，對(duì)抑制球蟲病的傳播起到一定的作用。雖然仔豬球蟲的感染強(qiáng)度不大，但是其致病力很大，我們不能掉以輕心。