胡耶芳，李 曉，劉子禎，范書(shū)生，王 樂(lè)，折改梅*

（1.廣西桂林市中醫(yī)醫(yī)院，廣西 桂林 541002； 2.北京中醫(yī)藥大學(xué)中藥學(xué)院，北京 102488）

民族藥滇白珠為杜鵑花科白珠樹(shù)屬植物滇白珠Gaultheria leucocarpavar.yunnanensis的干燥根或全草，又稱(chēng)為透骨草、黑油果、登能、透骨香等，具有祛風(fēng)除濕、清熱解毒、活血化瘀、順氣平喘等作用。其始載于明初蘭茂所著的《滇南本草》，《中藥大辭典》《中國(guó)民族藥志》也有記載［1-4］。滇白珠廣泛分布于云南、廣東、廣西、四川、貴州等地，是苗族、白族、納西族、彝族、傈傈族、哈尼族、瑤族、侗族、壯族等少數(shù)民族治療風(fēng)濕類(lèi)疾病的常用藥。此外還用于眩暈、閉經(jīng)、風(fēng)寒感冒、咳嗽、哮喘等疾?。?］。近年來(lái)，隨著滇白珠化學(xué)成分和藥理作用研究的逐步深入，多種類(lèi)型的化學(xué)成分包括水楊酸甲酯糖苷類(lèi)、黃酮類(lèi)、木脂素類(lèi)、揮發(fā)油類(lèi)、萜類(lèi)、有機(jī)酸類(lèi)等逐漸被發(fā)現(xiàn)。現(xiàn)代藥理研究表明滇白珠在抗炎、鎮(zhèn)痛、抗氧化、抗癌、抗瘧、抗眩暈、止瀉、預(yù)防或治療系統(tǒng)性紅斑狼瘡、改善老年癡呆等多方面具有突出的藥理活性［4，6-13］。

滇白珠的近緣種和變種較多，芳香白珠G.fragrantissima、尾葉白珠G.griffithiana、紅粉白珠G.hookeri和五雄白珠G.semi-infera等在當(dāng)?shù)乇徽`作為滇白珠使用［14］，嚴(yán)重影響其臨床應(yīng)用與療效。本文對(duì)滇白珠的化學(xué)成分、藥理作用及質(zhì)量控制的國(guó)內(nèi)外研究情況進(jìn)行綜述，以期為其進(jìn)一步研究和開(kāi)發(fā)利用提供科學(xué)依據(jù)。

1 化學(xué)成分

文獻(xiàn)共報(bào)道了滇白珠83 個(gè)化合物，包括6 個(gè)水楊酸甲酯糖苷類(lèi)（1～6）、16 個(gè)黃酮類(lèi)（7～22）、14 個(gè)苯丙素類(lèi)（23～36）、14 個(gè)萜類(lèi)和4 個(gè)甾體類(lèi)（37～54），16 個(gè)有機(jī)酸類(lèi)（55～70），13 個(gè)其他類(lèi)（71～83），見(jiàn)表1。水楊酸甲酯糖苷類(lèi)化合物的化學(xué)結(jié)構(gòu)與阿司匹林相似，具有顯著的抗炎鎮(zhèn)痛活性，被認(rèn)為是滇白珠的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)［6-7，10，15-16］。滇白珠苷A（29）曾被認(rèn)為是滇白珠抗炎活性成分，含有量約為2%［17］。滇白珠揮發(fā)油的主要成分是水楊酸甲酯（1），含有量可達(dá)96%～99%，可用于調(diào)配牙膏、食用香精等，具有重要的經(jīng)濟(jì)價(jià)值［1，5］。滇白珠中主要質(zhì)量控制指標(biāo)成分的結(jié)構(gòu)式見(jiàn)圖1。

表1 滇白珠中的化學(xué)成分

續(xù)表1

續(xù)表1

2 藥理作用

2.1 抗炎、鎮(zhèn)痛 炎癥是機(jī)體對(duì)被損害組織的一種防御和修復(fù)反應(yīng)，它對(duì)急性感染和損傷有確定的益處，但不被控制的、持續(xù)的炎癥反應(yīng)對(duì)組織有損害，甚至可能導(dǎo)致組織功能喪失和死亡［34-35］。抗炎鎮(zhèn)痛活性是滇白珠藥理作用的研究熱點(diǎn)。其作用機(jī)制主要與抑制炎癥介質(zhì)的產(chǎn)生和分泌，自由基的產(chǎn)生及細(xì)胞因子的產(chǎn)生有關(guān)［7，16，36-42］。

目前關(guān)于滇白珠不同藥用部位的抗炎鎮(zhèn)痛活性均有報(bào)道。張治針等［43］發(fā)現(xiàn)滇白珠根部的乙酸乙酯和正丁醇部位能顯著抑制小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性而具有抗炎作用。同時(shí)也報(bào)道了滇白珠全株的乙酸乙酯、正丁醇提取物及其經(jīng)大孔樹(shù)脂層析的乙醇洗脫部分對(duì)小鼠熱刺激法所致疼痛有明顯的鎮(zhèn)痛作用，其30%乙醇洗脫部分作用最強(qiáng)［4］。謝威等［33］發(fā)現(xiàn)滇白珠種子75%乙醇提取物的乙酸乙酯萃取物能顯著減輕二甲苯致炎小鼠的耳廓腫脹度，其藥效與陽(yáng)性對(duì)照藥阿司匹林相當(dāng)。熊玉蘭等［6］發(fā)現(xiàn)滇白珠全株的正丁醇提取物經(jīng)大孔樹(shù)脂層析的30%乙醇洗脫部分有明顯的抗大鼠佐劑性關(guān)節(jié)炎作用。該部位的主要成分是木脂素類(lèi)化合物，如（－）-5′-甲氧基異落葉松樹(shù)脂醇-2α-O-β-D木糖苷（30）、（－）-異落葉松樹(shù)脂醇-2α-O-β-D-木糖苷（28）和（＋）-lyoniresinol-2α-O-β-D-glueopyranosid（31）等。Zhang等［36］分別比較了同等摩爾劑量的冬綠苷、阿司匹林對(duì)醋酸誘導(dǎo)的小鼠扭體模型的鎮(zhèn)痛作用，發(fā)現(xiàn)二者的藥效作用基本相同；體外實(shí)驗(yàn)表明，人腸道細(xì)菌產(chǎn)生的β-糖苷酶和腸、血、肝中的酯酶依次代謝冬綠苷，最終釋放出水楊酸鹽，而不在胃內(nèi)釋放水楊酸鹽，從而減少對(duì)胃部的刺激，降低不良反應(yīng)。

圖1 主要質(zhì)量控制指標(biāo)成分結(jié)構(gòu)

滇白珠的抗炎作用主要與抑制炎癥介質(zhì)一氧化氮（NO）、腫瘤壞死因子α（TNF-α）、白細(xì)胞介素1β（IL-1β）和IL-6 等的產(chǎn)生和分泌及自由基的產(chǎn)生有關(guān)。有學(xué)者發(fā)現(xiàn)滇白珠水提物可以降低大鼠肺組織和血清中的C-反應(yīng)蛋白及IL-8，減輕肺組織及氣道炎癥，降低肺組織中NFκB、TNF-α 的表達(dá)，誘導(dǎo)Nrf2 的表達(dá)，升高HO-1，從而抑制慢性阻塞性肺疾病大鼠氧化應(yīng)激［40-42］。高劑量滇白珠（16 g／kg）能降低急性痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎模型大鼠踝關(guān)節(jié)關(guān)節(jié)液K＋、DA、NE、5-HT 及血清PGE2、LTB4水平［37］。滇白珠中水楊酸甲酯糖苷通過(guò)降低胸膜炎大鼠胸腔炎性滲出液的體積、白細(xì)胞數(shù)量和蛋白質(zhì)含有量，抑制NO、TNF-α、IL-1β 和PGE2而發(fā)揮抗角叉菜膠誘導(dǎo)的大鼠急性胸膜炎作用［39］。該類(lèi)成分還能夠抑制小神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞活化產(chǎn)生的炎癥反應(yīng)，劑量依賴(lài)性（2、10、50 μmol／L）地抑制LPS 誘導(dǎo)的BV-2 細(xì)胞NO、TNF-α 及IL-6 的釋放［16］。水楊酸甲酯糖苷還具有降低狼瘡小鼠體內(nèi)自身抗體和炎癥因子的表達(dá)水平、改善免疫功能的藥理作用，可作為新型的治療系統(tǒng)性紅斑狼瘡及其免疫功能失調(diào)、狼瘡關(guān)節(jié)炎、狼瘡性腎炎、狼瘡性脾臟損傷等并發(fā)癥的活性單體［7］。

2.2 抗氧化 李東宸等［12］采用清除DPPH 和ABTS 自由基方法研究發(fā)現(xiàn)滇白珠地上部分具有較為顯著的抗氧化能力，其中乙酸乙酯部位的抗氧化能力與陽(yáng)性對(duì)照藥維生素C 和維生素E 相近，該部位主要成分為黃酮類(lèi)化合物。滇白珠乙醇提取物經(jīng)大孔吸附樹(shù)脂層析100%甲醇洗脫部分抗氧化能力強(qiáng)于陽(yáng)性對(duì)照藥，薄層色譜表明其中主要成分為槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖醛酸苷（13）。滇白珠水楊酸甲酯糖苷能明顯抑制大鼠胸膜炎模型血漿中丙二醛（MDA）水平，并且明顯增強(qiáng)超氧化物岐化酶（SOD）的活力，該研究結(jié)果提示滇白珠的抗炎作用可能與抗氧化作用有關(guān)［39］。

2.3 其他 滇白珠抗菌、抗瘧、祛痰、改善眩暈、改善小腸功能及止瀉等作用也被報(bào)道。滇白珠根部的揮發(fā)油中水楊酸甲酯（1）含有量達(dá)到93.36%，可能是抑制金黃色葡萄球菌、綠膿桿菌、大腸桿菌和變形桿菌主要藥效成分［43］。肖朝江等［8］發(fā)現(xiàn)滇白珠提取物具有較好的β-羥高鐵血紅素形成抑制活性（IC50＞1 388.9 μg／mL），表明滇白珠具有一定的抗瘧活性。小鼠、家兔祛痰酚紅排泄實(shí)驗(yàn)證明滇白珠雖有祛痰作用（以生理鹽水為對(duì)照），但與冬青油無(wú)顯著差異［4］。白珠樹(shù)屬植物揮發(fā)油中的庚醛可顯著地軟化，溶解小鼠自發(fā)形成的乳腺腫瘤。揮發(fā)油中所含的檸檬醛和庚醛均有抑制移植性腫瘤的作用［9］。滇白珠糖漿對(duì)老年痰淤互阻型眩暈患者進(jìn)行輔助治療，能夠顯著改善患者的椎動(dòng)脈血流，同時(shí)改善眩暈癥狀，提高治療效果［13］。有文獻(xiàn)報(bào)道滇白珠提取物還具有顯著抑制胃腸運(yùn)動(dòng)亢進(jìn)，改善小腸吸收功能以及止瀉作用［11］。

3 質(zhì)量控制

滇白珠口服安全性高，對(duì)機(jī)體無(wú)明顯影響，研究開(kāi)發(fā)前景廣闊，但目前對(duì)于滇白珠的質(zhì)量控制研究較單?。?4-45］。2003 年版《貴州省中藥材、民族藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)》中收錄的滇白珠，主要包括形態(tài)描述、顯微鑒別、化學(xué)成分定性鑒別，但是無(wú)含有量測(cè)定項(xiàng)［46］。有研究者建立了滇白珠苷中木脂素類(lèi)成分或黃酮類(lèi)成分高效液相色譜法含有量測(cè)定方法，以及水楊酸甲酯的氣相色譜測(cè)定方法。

3.1 水楊酸類(lèi)成分含有量測(cè)定 麻秀萍等［47］以高效液相色譜法測(cè)定滇白珠全株藥材中水楊酸含有量，結(jié)果表明，貴陽(yáng)3 個(gè)地區(qū)滇白珠藥材中含有量為0.003 4%～0.006 2%，遠(yuǎn)低于《中國(guó)藥典》對(duì)阿司匹林中游離水楊酸限量不高于0.1%的規(guī)定，初步說(shuō)明黔產(chǎn)滇白珠內(nèi)服較為安全。梁光平等［48］采用氣相色譜法測(cè)定5 個(gè)產(chǎn)地滇白珠葉中水楊酸甲酯的含有量在0.66%～2.05%范圍內(nèi)。吳琴等［49］采用氣相色譜法測(cè)得滇白珠全株樣品揮發(fā)油出油率為0.51%～0.59%，水楊酸甲酯的平均含有量為0.54%。李蒙禹等［50］采用氣相色譜法對(duì)不同干燥方式的透骨香藥材揮發(fā)油中水楊酸甲酯含有量進(jìn)行測(cè)定，發(fā)現(xiàn)不同干燥方式對(duì)水楊酸甲酯的含有量影響較大，其中陰干的透骨香藥材中水楊酸甲酯含有量均高于曬干藥材的含有量，原因可能是曬干過(guò)程中溫度較高而使其揮發(fā)油揮發(fā)，從而導(dǎo)致水楊酸甲酯含有量的降低。除氣相色譜外，周曉霞等［51］建立了熒光分析法測(cè)定滇白珠中水楊酸甲酯含有量的新方法，測(cè)得水楊酸甲酯在對(duì)照藥材中的平均含有量為0.262%。

在現(xiàn)代藥理研究的基礎(chǔ)上，有學(xué)者以水楊酸甲酯糖苷類(lèi)成分為指標(biāo)性成分建立滇白珠質(zhì)量控制方法。Liu 等［52］建立滇白珠7 個(gè)種源的21 個(gè)樣品的UPLC 指紋圖譜，并進(jìn)行相似度分析、聚類(lèi)分析和主成分分析對(duì)滇白珠易混淆品種進(jìn)行了有效分類(lèi)，方法學(xué)考察顯示RSD 均低于2%；同時(shí)建立了滇白珠8 個(gè)抗炎類(lèi)成分的快速同時(shí)定量的含有量測(cè)定方法，方法精密度、穩(wěn)定性和重復(fù)性均良好，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明滇白珠多基源品種之間存在差異（P＜0.05），不同藥用部位之間的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），主流品種滇白珠為最佳品種（根據(jù)抗炎成分含有量高低程度判斷）［53］。趙怡程等［54］以30% 乙醇提取滇白珠，提取液經(jīng)AB-8 富集制備得到的35%乙醇洗脫部位為抗炎鎮(zhèn)痛的活性部分，以水楊酸甲酯三糖苷（6）為指標(biāo)性成分建立該部分的HPLC 指紋圖譜，所建立的滇白珠抗炎鎮(zhèn)痛活性部分的指紋圖譜相似度均大于0.900，方法精密度、穩(wěn)定性和重復(fù)性良好。

3.2 木脂素類(lèi)成分含有量測(cè)定 滇白珠木脂素類(lèi)成分是早期認(rèn)為的抗炎活性成分，故采用木脂素苷含有量作為滇白珠質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)［6，55］，張治針等［4］率先采用高效液相色譜法建立滇白珠根中4 種木脂素苷成分的含有量測(cè)定方法。由于滇白珠中正丁醇萃取物中含有大量的鞣質(zhì)成分，導(dǎo)致分離效果差，故采用甲醇超聲提取樣品，聚酰胺處理除去正丁醇萃取物中的酚類(lèi)成分，制備得到樣品液。采用二極管陣列檢測(cè)器，以甲醇-水為流動(dòng)相，梯度洗脫，所建方法分離效果及重現(xiàn)性好，回收率高。在此基礎(chǔ)上，趙玉娟等［56］采用30%甲醇為溶劑回流提取，解決了純甲醇及純水提取樣品時(shí)滇白珠苷雜峰多及峰形差的問(wèn)題，并且發(fā)現(xiàn)云南不同地區(qū)滇白珠中滇白珠苷的含有量差別很大，且根中含有量高于莖、葉。馬小軍等［57-58］采用HPLC 法測(cè)定滇白珠不同產(chǎn)地、不同季節(jié)和不同白珠樹(shù)屬的木脂素苷（LG）的含有量，研究表明海南和貴陽(yáng)樣品中LG 含有量最高，但結(jié)合生物量考慮，選云南大理和廣西金秀的資源更合理，并且根據(jù)不同月份的LG 含有量，提出采根應(yīng)避免6～9 月，采莖應(yīng)在6～9 月，采收全株應(yīng)在8 月適宜［57］。滇白珠及同屬植物根中LG 含有量順序?yàn)榈岚字椋景字闃?shù)＞四裂白珠＞尾葉白珠，這與民間用藥以滇白珠為主、白珠樹(shù)為輔的情況相符［58］。謝紅等［59］發(fā)現(xiàn)滇白珠根莖17 個(gè)樣品中，木脂素苷（＋）-lyoniresinol-2α-O-β-L-arabinopyranoside（29）含有量都極少，難以定量，且根和莖中（－）-5-甲氧基異落葉松樹(shù)脂醇-2α-O-β-D-吡喃木糖苷（30）和（－）-異落葉松樹(shù)脂-2α-O-β-D-吡喃木糖苷（28）的含有量相當(dāng)，但葉含有量幾乎沒(méi)有。陳青鳳等［60］采用高效液相色譜法，以?xún)翰杷貫閮?nèi)參物，建立其與白珠樹(shù)苷（3）、滇白珠苷A（29）的相對(duì)校正因子，并進(jìn)行含有量測(cè)定，實(shí)現(xiàn)一測(cè)多評(píng)，用于滇白珠藥材多指標(biāo)成分含有量測(cè)定。

3.3 黃酮類(lèi)成分含有量測(cè)定 張萌萌等［61］用高效液相色譜法測(cè)得貴陽(yáng)3 個(gè)產(chǎn)地滇白珠藥材中槲皮素（7）的含有量在0.03～0.14 mg／g 范圍內(nèi)。宋志釗等［62］測(cè)得6 批滇白珠藥材中槲皮苷含有量在0.36%～0.48%范圍內(nèi)。劉紹歡等［63］用高效液相色譜法對(duì)不同采收期和部分的黔產(chǎn)透骨香中槲皮素的含有量進(jìn)行測(cè)定，發(fā)現(xiàn)不同產(chǎn)地、不同季節(jié)所采收的藥材中槲皮素的含有量變化不明顯，但都呈現(xiàn)葉＞莖＞根的規(guī)律。

4 總結(jié)與展望

滇白珠作為傳統(tǒng)治療風(fēng)濕病的民族藥，在我國(guó)用藥歷史悠久。研究表明其主要含有水楊酸甲酯糖苷類(lèi)、黃酮類(lèi)、木脂素類(lèi)和有機(jī)酸類(lèi)等，具有抗炎、鎮(zhèn)痛、抗氧化、抗癌等多方面的藥理活性。其中，水楊酸甲酯糖苷類(lèi)成分結(jié)構(gòu)與非甾體類(lèi)抗炎藥阿司匹林結(jié)構(gòu)母核相似，并能減輕胃腸道的不良反應(yīng)，是滇白珠研究的熱點(diǎn)。目前，滇白珠多局限于民族用藥，其缺乏科學(xué)的質(zhì)量控制體系，藥效物質(zhì)基礎(chǔ)及作用機(jī)制的研究也不深入，關(guān)于其不良反應(yīng)及毒性試驗(yàn)的研究較少。并且藥理研究多集中于粗提取物，而對(duì)于單體成分的藥理作用研究較少，主要是水楊酸甲酯糖苷類(lèi)成分，其他成分如黃酮類(lèi)成分則少有涉及，這將嚴(yán)重制約滇白珠的臨床應(yīng)用與發(fā)展。因此，加快建立滇白珠科學(xué)的質(zhì)量控制體系，加強(qiáng)單體化合物的藥理作用研究，深入活性成分作用機(jī)制及滇白珠不良反應(yīng)或毒性研究，以期為滇白珠的臨床用藥、新藥開(kāi)發(fā)及擴(kuò)大藥源提供基礎(chǔ)。