于 芳

新疆獸藥飼料監(jiān)察所，烏魯木齊830063

在我國，蜂王漿屬于極為常見的一類保健品，其在國際上的出口量也日益增多。然而在世界經(jīng)濟(jì)全球化進(jìn)程的持續(xù)深入過程中，各大進(jìn)口貿(mào)易國對(duì)蜂王漿藥物殘留的檢測要求也在提升。因此，有關(guān)部門應(yīng)當(dāng)對(duì)蜂王漿藥物殘留問題予以高度關(guān)注，致力于提升檢測技術(shù)，確保蜂王漿順利提升出口量，促進(jìn)行業(yè)發(fā)展。

1 高效液相色譜基本原理

高效液相色譜主要指高壓相層析儀，此類儀器多被用在化學(xué)以及生物學(xué)領(lǐng)域，其檢測系統(tǒng)最重要的組成部分包含了記錄儀、儲(chǔ)液器、檢測儀與色譜柱等關(guān)鍵設(shè)備[1]。把待檢樣品放進(jìn)儲(chǔ)液器，利用高壓泵直接將其打進(jìn)檢測系統(tǒng)，當(dāng)樣品載入到色譜柱中，其固定相和流動(dòng)相中擁有各不相同的分配系數(shù)，而樣品在通過反復(fù)吸附、解吸，最終被分離，此時(shí)液體將從色譜柱逐漸流出，同時(shí)檢測儀向記錄儀發(fā)送分離信號(hào)，進(jìn)而用圖譜形式把分離數(shù)據(jù)完整地打印出來。

2 高效液相色譜在蜂王漿藥物殘留檢測中的具體應(yīng)用

2.1 對(duì)蜂王漿中氟喹諾酮類藥物殘留的檢測

氟喹諾酮類藥物的抗菌特性比較獨(dú)特，如今已經(jīng)成為醫(yī)學(xué)領(lǐng)域當(dāng)中效果最好的一類抗菌藥物。然而在氟喹諾酮類藥物大量使用的過程中，藥物引發(fā)的不良反應(yīng)越來越突出。

有關(guān)專家借助高效液相色譜對(duì)蜂王漿內(nèi)多達(dá)5種的氟喹諾酮類藥物進(jìn)行檢測，其中包括恩諾沙星、氧氟沙星、丹諾沙星、諾氟沙星以及鹽酸環(huán)丙沙星。在此過程中，采用酸和乙腈相結(jié)合的方式對(duì)氟喹諾酮類藥物進(jìn)行提取，并借助熒光檢測器進(jìn)行檢測，檢測限分別是1 μg/kg 的丹諾沙星、5 μg/kg 的氧氟沙星以及2.5 μg/kg 的諾氟沙星、恩諾沙星、鹽酸環(huán)丙沙星，其平均的回收率為82%～98%。

2.2 對(duì)蜂王漿中氯霉素殘留的檢測

在國際上，許多國家都禁止將氯霉素應(yīng)用于食用性動(dòng)物，也要求不可從動(dòng)物源性食品里檢出氯霉素。氣相色譜-質(zhì)譜和氣相色譜在檢測蜂王漿中氯霉素時(shí)存在諸多難題，因此有關(guān)專家借助高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜對(duì)蜂王漿里殘留氯霉素進(jìn)行測定和凈化，隨后運(yùn)用高效液相色譜-噴霧電離質(zhì)譜對(duì)完成凈化的樣品進(jìn)行分離，經(jīng)過實(shí)踐可知，此方法能夠使樣品回收率得到極大提升。

例如在檢測過程中，提取樣品1.5 μg/kg，最終其回收率能達(dá)到92%，采用固相萃取的方法對(duì)樣品進(jìn)行凈化后，運(yùn)用噴霧電離對(duì)樣品進(jìn)行分離，可以使回收率高達(dá)90%～110%，提升效果十分顯著。

2.3 對(duì)蜂王漿中硝基呋喃類藥物殘留的檢測

硝基呋喃類藥物屬于合成廣譜抗生素，包含了呋喃妥因、呋喃唑酮、呋喃西林以及呋喃它酮等。然而此類藥物致癌性極高，副作用大。

有關(guān)專家使用高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜聯(lián)對(duì)以上4 類藥物代謝物殘留進(jìn)行測定：將用三氯乙酸當(dāng)作蜂王漿蛋白質(zhì)的沉淀劑，并且為衍生反應(yīng)提供必備酸環(huán)境，運(yùn)用4 種同位素進(jìn)行內(nèi)標(biāo)，對(duì)后續(xù)諸多影響進(jìn)行了補(bǔ)償，使定量準(zhǔn)確性得以被有效提升。經(jīng)過檢測，呋喃它酮檢測下限為0.03 μg/kg，而其余幾種藥物檢測下限達(dá)到了0.05 μg/kg，最終加標(biāo)的回收率高達(dá)98%～105%。

2.4 對(duì)蜂王漿中鏈霉素殘留的檢測

蜂王漿產(chǎn)品當(dāng)中的鏈霉素殘留問題長期困擾著有關(guān)部門。部分專家借助高效液相色譜對(duì)鏈霉素殘留進(jìn)行檢查的方式主要為：

1）借助烷磺酸鈉酸溶液對(duì)樣品進(jìn)行提取，在凈化后使用高效液相色譜對(duì)鏈霉素殘留進(jìn)行測定，最終測得回收率達(dá)到了84%～104%。

2）借助熒光檢測儀對(duì)樣品進(jìn)行檢測，檢測每一個(gè)樣品的時(shí)間都較短，卻需要添加檢測樣品數(shù)量。

3）在進(jìn)行檢測前對(duì)蜂王漿樣品進(jìn)行溶解，使用的溶解液為磷酸提取液，進(jìn)而聯(lián)合使用熒光檢測和柱后衍生高效液相色譜的梯度洗脫對(duì)鏈霉素殘留藥物加以分析，可以讓有關(guān)藥物于短期內(nèi)被有效分離，其回收率可以達(dá)到約70%，這基本與相應(yīng)檢測標(biāo)準(zhǔn)相符。

2.5 對(duì)蜂王漿中大環(huán)內(nèi)酯類抗生素殘留的檢測

如果人體長時(shí)間攝入有大環(huán)內(nèi)酯類抗生素殘留的食物，將會(huì)導(dǎo)致人體內(nèi)腸道細(xì)菌菌群出現(xiàn)失調(diào)的不良現(xiàn)象。有關(guān)專家借助高效液相色譜質(zhì)譜/質(zhì)譜的方法對(duì)蜂王漿產(chǎn)品內(nèi)5 類大環(huán)內(nèi)酯類抗生素殘留進(jìn)行檢測，主要包括了交沙霉素、螺旋霉素、羅紅霉素、竹桃霉素以及泰樂菌素。在檢測過程中，專家借助三氯乙酸使樣品的蛋白質(zhì)被沉淀，隨后用乙腈對(duì)上層的清液進(jìn)行提取，并且運(yùn)用C18SPE 小柱進(jìn)行凈化處理，進(jìn)而使每一種抗生素選用2 個(gè)子離子、1 個(gè)母離子開始檢測。經(jīng)過檢測可知，5 類抗生素檢測下限都是20 μg/kg，且在3 個(gè)加標(biāo)水平中，加標(biāo)的回收率能夠達(dá)到73%～90%。

3 結(jié)語

總體而言，為了確保蜂王漿得以順利出口，有關(guān)部門應(yīng)當(dāng)致力于創(chuàng)新檢測方法。如今許多專家對(duì)高效液相色譜檢測效果進(jìn)行深入研究，并將其逐漸應(yīng)用于檢測蜂王漿藥物殘留。此方法檢測質(zhì)量高、效率高且成本較低，然而實(shí)際應(yīng)用依然存在問題，有關(guān)人員應(yīng)當(dāng)對(duì)其進(jìn)行深入研究，以推動(dòng)蜂王漿產(chǎn)業(yè)更好發(fā)展。