魯明騫 陸海燕 馮雪松 高嫣 周東奎 張蓉 李莉娥

(1三峽大學第一臨床醫(yī)學院腫瘤防治中心 宜昌市中心人民醫(yī)院腫瘤科，湖北 宜昌 443000；2宜昌人福藥業(yè)有限責任公司)

胃癌是最常見的惡性腫瘤之一，據(jù)世界衛(wèi)生組織(WHO)最新報道，在全球范圍內(nèi)胃癌發(fā)病率占惡性腫瘤的第5位，死亡率僅次于肺癌和肝癌，占惡性腫瘤的第3位〔1〕。我國胃癌新發(fā)病例占世界新發(fā)病例的40%，因早期無特異性癥狀和體征，80%的患者在確診時已達進展期，早期診斷率遠遠低于歐美及日韓等國家〔2〕。研究表明，胸苷酸磷酸合成酶(TS)是生物合成的關(guān)鍵酶，在DNA的合成和修復過程中具有十分重要的作用，通過抑制TS可使生物合成受阻，進一步抑制細胞的生長和增殖過程〔3〕。氟尿嘧啶(5-Fu)是胃癌化療的重要藥物之一，5-Fu本身無生物活性，在體內(nèi)經(jīng)胸苷酸磷酸化酶(TP)的催化下轉(zhuǎn)化為具有抗腫瘤活性的脫氧氟尿苷單磷酸鹽(FdUMP)，F(xiàn)dUMP與TS的巰基、亞甲基四氫葉酸(5,10-CH2-FH4)的甲基結(jié)合，形成共價的三重復合物，從而抑制TS的合成，阻礙尿苷酸(dUMP)向胸苷酸(dTMP)的轉(zhuǎn)變，影響DNA的合成〔4〕。因此，研究TS在胃癌中的作用具有十分重要的意義。本研究探討TS在胃癌組織和癌旁組織中的表達變化，并分析其與胃癌組織臨床病理特征、治療效果、不良反應和預后的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1臨床資料 收集三峽大學第一臨床醫(yī)學院2010年1月至2015年12月有完整的臨床病理和隨訪資料的胃癌患者140例，具有充足的石蠟組織標本，其中男107例，女33例，年齡32～75歲，平均年齡(57.4±3.8)歲；腫塊>5 cm 82例，腫塊≤5 cm 58例；分化程度：高分化16例，中分化65例，低分化59例；浸潤黏膜及黏膜下層者6例，肌層12例，全層122例；淋巴結(jié)有轉(zhuǎn)移98例，淋巴結(jié)無轉(zhuǎn)移42例；Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ期和Ⅳ期分別為18例、19例、58例和45例。所有患者接受“奧沙利鉑(LOHP)+亞葉酸鈣(CF)/5-Fu”方案化療(中位4程)。

1.2免疫組化SP染色法 140例胃癌組織標本經(jīng)4%甲醛固定，石蠟包埋，4 μm厚連續(xù)切片。經(jīng)高壓抗原熱修復，冷卻后，磷酸鹽緩沖液(PBS)沖洗3次，加入3%過氧化氫孵育10 min，再次沖洗，加入Ⅰ抗即小鼠抗TS單克隆抗體，抗生物素化羊抗小鼠IgG。具體實驗步驟按試劑盒說明書進行，采用免疫組化SP Envision兩步法進行檢測。

1.3結(jié)果判斷 以已知陽性的胃癌組織切片作陽性對照，PBS代替一抗作陰性對照。依照綜合計分法，將細胞著色強度與陽性著色細胞所占百分數(shù)結(jié)合進行判定。細胞著色強度：不著色、淡黃色、棕黃色和棕褐色分別計0、1、2和3分。陽性細胞百分數(shù)：10個視野陽性細胞的平均數(shù)占其10個視野中細胞數(shù)的百分比：<5%、5%～25%、26%～50%、51%～75%和>75%分別計0、1、2、3和4分。

1.4療效評價 近期療效按實體瘤標準評價(RECIST)進行療效評價：完全緩解(CR)、部分緩解(PR)、穩(wěn)定(SD)和疾病進展(PD)，其中總有效率(RR)=CR+PR?；煻靖狈磻鶕?jù)WHO毒性分級標準進行分級。

1.5統(tǒng)計學方法 采用SPSS18.0統(tǒng)計軟件進行χ2檢驗。

2 結(jié) 果

2.1TS在胃癌組織中的表達情況 140例胃癌患者中，95例胃癌組織中TS表達陽性，TS陽性表達率為67.86%(95/140)；90例癌旁胃黏膜正常組織中，TS陽性表達率22.22%(20/90)，TS在胃癌組織中的陽性表達率明顯高于癌旁正常胃黏膜組織(P<0.05)。

2.2TS陽性表達與臨床病理特征的關(guān)系 TS表達與分化程度相關(guān)，但與患者性別、年齡、腫瘤大小、T分期、浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、臨床分期等無關(guān)(P>0.05)。見表1。

表1 胃癌組織中TS的表達與臨床病理特征的關(guān)系(n)

2.3TS陽性表達與化療效果的關(guān)系 在可評價的84例胃癌患者中，TS陽性表達組化療有效率為28.07%(16/57)，TS陰性表達組化療有效率為74.07%(20/27)，差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。

2.4TS陽性表達與不良反應的關(guān)系 TS陽性表達患者惡心嘔吐、口腔黏膜炎、腹瀉等不良反應發(fā)生率分別為56.1%(32/57)、22.8%(13/57)和19.3%(11/57)，TS陰性表達患者不良反應發(fā)生率分別為55.6%(15/27)、25.9%(7/27)和18.5%(5/27)，兩者比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。

2.5TS陽性表達與預后的關(guān)系 TS陽性表達組的1年生存率為52.63%(30/57)，陰性表達組1年生存率為48.15%(13/27)，差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。

3 討 論

TS酶是一種葉酸依賴性酶，由兩個相同的亞基構(gòu)成,，分子量約62 kD，能催化生物體內(nèi)的四氫葉酸與dUMP結(jié)合，通過甲基化合成胸苷酸重要的限速酶dTMP，dTMP是氟尿嘧啶類藥物在體內(nèi)代謝的關(guān)鍵性酶之一，5-Fu通過抑制TS的生成，使DNA合成受阻，從而達到抑制細胞生長和增殖的作用〔5〕。5-Fu是除手術(shù)外胃癌最主要的內(nèi)科治療藥物，但不同個體間治療效果和不良反應有較大差異，醫(yī)務工作者長期以來致力于研究產(chǎn)生其差異的主要原因，但目前仍缺乏特異性的指標，因此尋求能預測化療療效和毒副反應的指標對胃癌的個體化治療具有重要的理論和現(xiàn)實意義。

李淑璟等〔6〕采用免疫組化法檢測了77例胃癌患者病例組織和25例癌旁正常組織病理切片，發(fā)現(xiàn)TS在胃癌組織中的陽性表達率為70.1%，癌旁正常組織中的陽性表達率為24.0%，胃癌組織中的TS表達明顯高于癌旁組織，差異有統(tǒng)計學意義，而且TS表達與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)。本研究TS陽性表達率結(jié)果與其他研究結(jié)果一致〔7，8〕。徐振宇等〔9〕研究發(fā)現(xiàn)，TS在胃印戒細胞癌的表達明顯高于腺癌等其他病理類型，與胃癌分化程度呈顯著的負相關(guān)，與本實驗結(jié)果一致。

5-Fu在體內(nèi)通過影響核酸合成發(fā)揮抗腫瘤效果，屬于TS抑制劑，與多種惡性腫瘤化療敏感性相關(guān)〔10，11〕。當TS的表達水平增高或活性增強時，一方面可使尿苷酸向胸苷酸轉(zhuǎn)變增加，加速了腫瘤細胞DNA的合成。同時還可抑制體內(nèi)二氫嘧啶脫氫酶(DPD)合成，DPD是5-Fu分解代謝的關(guān)鍵酶，與5-Fu的療效、不良反應、耐藥和預后等密切相關(guān)〔12〕，當DPD表達水平下降時，其活性也隨著降低，5-Fu在體內(nèi)分解代謝減少，導致血漿中濃度增加，體外排除減少，從而使治療效果降低，毒副作用增加〔13〕。

有研究發(fā)現(xiàn)TS表達與氟尿嘧啶類藥物療效無明顯相關(guān)性〔14〕。但也有相反的結(jié)果，認為TS低表達患者其療效和預后更好，因此，TS可作為評價胃癌化療療效和預后的指標〔15，16〕。Farina-Sarasqueta等〔17〕研究發(fā)現(xiàn)TS基因多態(tài)性與5-Fu化療毒性反應有關(guān)，可以作為5-Fu化療不良反應的預測指標，指導臨床醫(yī)生個體化用藥。本實驗結(jié)果顯示，TS陽性表達患者惡心嘔吐、口腔黏膜炎、腹瀉等不良反應與TS陰性表達患者無明顯變化，與國外研究結(jié)果一致〔18〕。TS陽性表達組的1年生存率與陰性表達組差異無統(tǒng)計學意義，與Sonnenblick等〔19〕研究結(jié)果一致，但Lu等〔20〕在薈萃分析中發(fā)現(xiàn)，進展期胃癌TS表達對總生存有預測價值。

綜上，在惡性腫瘤細胞增殖、分化過程中，當TS活性受到抑制，腫瘤細胞DNA合成障礙，腫瘤細胞生長抑制。因此，通過研究TS表達與胃癌的關(guān)系，對胃癌化療療效、不良反應和預后具有重要的臨床意義，為選擇性TS抑制劑的研究提供了新的思路，TS可作為腫瘤化學治療預測的重要靶點之一。