吳非常，溫尊北，吳祥成，謝 地

(高州市人民醫(yī)院腫瘤內(nèi)一區(qū)，廣東 茂名 525200)

鼻咽癌為比較常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，在腫瘤細(xì)胞中，EB病毒屬于皰疹病毒。在人體中，其存在形式主要以潛伏感染為主。所以在全血中，EBV的基因產(chǎn)物已經(jīng)出現(xiàn)。EBV、NPC之間的關(guān)系密不可分的，可以為診斷NPC提供可行依據(jù)?，F(xiàn)階段，檢測(cè)血液中，EBV基因的方法，常規(guī)聚合酶鏈反應(yīng)、實(shí)時(shí)熒光定量PCR等得到了廣泛的應(yīng)用[1]，其中，后者具有良好的靈敏度，所以在檢測(cè)NPC患者全血中的EBV、DNA時(shí)，實(shí)時(shí)熒光定量PCR得到了充分的體現(xiàn)。

1 資料與方法

1.1一般資料：初診NPC組為30例，NPC放療組為20例，NPC伴轉(zhuǎn)移患者為13例，NPC治愈后復(fù)查組為20例，其中，男40例，女43例，年齡35～78歲，平均(56.5±10.6)歲。加強(qiáng)實(shí)時(shí)熒光定量PCR方法的應(yīng)用，對(duì)標(biāo)本中EBV、DNA含量進(jìn)行檢測(cè)。

1.2方法

1.2.1樣本采集:在檢測(cè)EBV、DNA時(shí)，乙二胺四乙酸二鈉抗凝得到了廣泛的應(yīng)用，而且各個(gè)研究對(duì)象采集的外周血應(yīng)為3ml，凍存的最佳溫度應(yīng)為-20℃。

1.2.2DNA提取與基因擴(kuò)增：使用核酸提取試劑盒，將每一個(gè)標(biāo)本中的DNA提取出來(lái)，借助nanodrop紫外分光光度計(jì)，對(duì)核算的OD260/280和OD230/260的比值進(jìn)行檢測(cè)[2]，以此來(lái)給予提取核酸的濃度和純度的評(píng)估提供一定的依據(jù)。

1.3實(shí)時(shí)熒光定量PCR測(cè)定結(jié)果判讀：在實(shí)時(shí)熒光定量PCR測(cè)定過(guò)程中，如果PCR循環(huán)次數(shù)增加，會(huì)增強(qiáng)樣本的相對(duì)熒光強(qiáng)度。在設(shè)置基線(xiàn)時(shí)，第1～15個(gè)循環(huán)中的平均相對(duì)熒光強(qiáng)度×10倍標(biāo)準(zhǔn)差，保證與此基線(xiàn)時(shí)所經(jīng)歷的循環(huán)次數(shù)相符合，稱(chēng)為循環(huán)閥值(Ct)。在實(shí)際操作過(guò)程中，獲取Ct值以后[3]，結(jié)合值大小，可以對(duì)所測(cè)標(biāo)本的陽(yáng)性與否進(jìn)行判斷，再借助標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，定量分析未知模板，從而對(duì)該樣本的DNA含量進(jìn)行計(jì)算。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)分析方法：選用SPSS15.0進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，組間比較采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料用率(%)表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)，P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

4組患者全血中EBV、DNA的檢出率和拷貝數(shù)對(duì)數(shù)值對(duì)比如表1所示，組間EBV、DNA的檢出率對(duì)比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

3 討論

現(xiàn)階段，在治療NPC患者過(guò)程中，通過(guò)對(duì)全血中EBV、DNA含量的反復(fù)檢測(cè)，旨在為監(jiān)測(cè)治療效果提供一定的幫助。一般來(lái)說(shuō)，NPC對(duì)放療具有一定的敏感性，但是治療仍然難以取得成功。這主要是因?yàn)楦畏暖熀蟮倪h(yuǎn)處轉(zhuǎn)移等所致。在本次研究中[4]，主要分為初診NPC組、NPC伴轉(zhuǎn)移組、NPC放療組、NPC治愈組[5]，旨在對(duì)NPC患者是否對(duì)放療產(chǎn)生敏感性進(jìn)行研究，而且也可以對(duì)患者的治療效果進(jìn)行有效預(yù)測(cè)。

在本文中，借助熒光定量PCR法[6]，對(duì)不同組間患者血液中的EBV、DNA進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果陽(yáng)性率分別76.67%、100%、61.54%、25%，而且不同組間的平均拷貝數(shù)的對(duì)數(shù)值分別為4.56、4.97、2.06、1.35，表明NPC組比放療組、治愈后復(fù)查組要高一些，而且放療組也比治愈后復(fù)查組要高，這與其他研究結(jié)果相一致，提示EBV極容易造成NPC的出現(xiàn)。

表14組患者全血中EBV、DNA的檢出率和拷貝數(shù)對(duì)數(shù)值對(duì)比

組別例數(shù)EBV、DNA檢出率[例(%)]EBV、DNA平均拷貝數(shù)的對(duì)數(shù)值初診NPC組3023(76.67)4.56NPC伴轉(zhuǎn)移組2020(100.00)4.97NPC放療組138(61.54)2.06NPC治愈組205(25.00)1.35P值<0.05<0.05