趙海燕

摘 要：目的 探討蝙蝠蛾擬青霉菌絲體粉對(duì)小鼠免疫功能的作用。方法 KM雄性小鼠176只，隨機(jī)平均分為對(duì)照組、低劑量組（110mg/kg.bw）、中劑量組（220mg/kg.bw）和高劑量組（440mg/kg.bw），連續(xù)灌胃30d后，進(jìn)行碳粒廓清實(shí)驗(yàn)、二硝基氟苯誘導(dǎo)小鼠遲發(fā)性變態(tài)反應(yīng)和血清溶血素測(cè)定。結(jié)果 與對(duì)照組比較，蝙蝠蛾擬青霉菌絲體粉中、高劑量組（220mg/kg.bw、440mg/kg.bw）能顯著增加小鼠碳廓清指數(shù)K及吞噬指數(shù)α;在遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)實(shí)驗(yàn)中，中、高劑量組（220mg/kg.bw、440mg/kg.bw）能顯著增加小鼠耳腫脹度，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05，P<0.01）;但各劑量組對(duì)小鼠抗體積數(shù)均無(wú)顯著性差異。結(jié)論 蝙蝠蛾擬青霉菌絲體粉具有良好的免疫調(diào)節(jié)作用，可增強(qiáng)小鼠的免疫功能。

關(guān)鍵詞：蝙蝠蛾擬青霉菌絲體粉 小鼠 免疫功能

中圖分類(lèi)號(hào)：R-33文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A文章編號(hào)：1003-9082（2020）02-0-01

冬蟲(chóng)夏草屬于傳統(tǒng)的滋補(bǔ)中藥材，價(jià)格昂貴，且野生資源枯竭，逐漸被人工蟲(chóng)草菌粉所替代[1]。在1980年時(shí)，研究者在天然冬蟲(chóng)夏草中分離出多個(gè)菌種，包括蝙蝠蛾擬青霉菌絲體粉等，大量臨床實(shí)踐表明，蝙蝠蛾擬青霉菌絲體粉可有效提高免疫功能。本實(shí)驗(yàn)觀(guān)察了蝙蝠蛾擬青霉菌絲體粉對(duì)小鼠免疫功能的作用。

一、實(shí)驗(yàn)材料與方法

1.受試樣品

蝙蝠蛾擬青霉菌絲體粉（批號(hào)：20180912，江蘇某藥業(yè)有限公司提供）。

1.1受試動(dòng)物

KM種雄性小鼠，體重18～22g（由西安交通大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，質(zhì)量合格證號(hào)：SCXK（陜）2014-0219）

1.2主要試劑與儀器

DNFB（二硝基氟苯）、SRBC（綿陽(yáng)紅細(xì)胞）、Na2CO3、印度墨汁、UB8100B紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)、電子天平、打孔器、離心機(jī)。

2.方法

2.1劑量選擇及動(dòng)物分組

試驗(yàn)設(shè)對(duì)照組（純水）及低劑量組（110mg/kg），中劑量組（220mg/kg），高劑量組（440mg/kg）（分別相當(dāng)于人體推薦用量的5倍、10倍和20倍）。各劑量組分別取受試物1.1g、2.2g、4.4g加純水至200mL，充分混勻后灌胃。灌胃量均為20mL/kg.bw，每天一次，連續(xù)灌胃30天。

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物共分為4個(gè)指標(biāo)測(cè)定組，每個(gè)指標(biāo)測(cè)定組均分別包括對(duì)照組和受試物三個(gè)劑量組，每組11只動(dòng)物。

2.2臟器/體重比值測(cè)定

連續(xù)灌胃30天后，稱(chēng)取動(dòng)物體重，頸椎脫臼處死動(dòng)物，取出動(dòng)物的脾臟、

胸腺，分別稱(chēng)出脾臟、胸腺重量，計(jì)算臟器/體重比值（以mg/10g表示）。

2.3小鼠碳粒廓清實(shí)驗(yàn)

從小鼠尾靜脈注入4倍稀釋的墨汁，立即計(jì)時(shí)，分別于2min、10min從小鼠內(nèi)眥靜脈叢取血20μL，加到含2mL0.1% Na2CO3溶液的試管中，混勻，用UB8100B紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)，在600nm波長(zhǎng)處測(cè)定OD值（用0.1% Na2CO3溶液作空白對(duì)照）。將小鼠處死，取肝、脾臟，稱(chēng)重，計(jì)算碳廓清指數(shù)K和吞噬指數(shù)α。

2.4二硝基氟苯誘導(dǎo)的小鼠遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)實(shí)驗(yàn)

小鼠灌胃25d后，每組小鼠腹部皮膚脫毛，用50μL二硝基氟苯溶液涂抹致敏，5d后將10μL二硝基氟苯溶液涂抹小鼠右耳兩面進(jìn)行攻擊，24h后處死小鼠，用打孔器取下左右耳殼8mm直徑的耳片，稱(chēng)重，以?xún)啥亓恐钪当硎灸[脹度。

2.5血清溶血素的測(cè)定（血凝法）[2]

小鼠連續(xù)灌胃的第26d，每只小鼠腹腔注射2%SRBC 0.2mL免疫，連續(xù)灌胃4d后，進(jìn)行小鼠眼眶取血，按標(biāo)準(zhǔn)“血凝法”觀(guān)察血球凝集程度進(jìn)行血清溶血素的測(cè)定。

2.6數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)

數(shù)據(jù)處理采用 SPSSl7.0 統(tǒng)計(jì)軟件分析，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

二、結(jié)果

1.臟器/體重測(cè)定結(jié)果

在四個(gè)指標(biāo)測(cè)定組中，各劑量組與對(duì)照組相比，初始體重、中期體重、末期體重及體重增重均無(wú)顯著性差異。各劑量組與對(duì)照組小鼠相比，其脾臟/體重比值均無(wú)顯著性差異，其胸腺/體重比值均無(wú)顯著性差異，見(jiàn)表1。

2.單核-巨噬細(xì)胞功能測(cè)定結(jié)果（小鼠碳廓清實(shí)驗(yàn)）中、高劑量組與對(duì)照組小鼠相比，其碳廓清指數(shù)K及吞噬指數(shù)α均有顯著性差異（P<0.05，P<0.01），見(jiàn)表2。

3.細(xì)胞免疫功能測(cè)定結(jié)果（遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)實(shí)驗(yàn)）

各劑量組小鼠的耳廓腫脹度均高于對(duì)照組，且隨劑量的增加而增加。與對(duì)照組相比，220、440mg/kg劑量組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05，P<0.01），見(jiàn)表3。

4.體液免疫功能測(cè)定結(jié)果（血清溶血素的測(cè)定）

各劑量組與對(duì)照組小鼠相比，其抗體積數(shù)均無(wú)顯著性差異，見(jiàn)表4。

三、討論

本文通過(guò)實(shí)驗(yàn)表明，蝙蝠蛾擬青霉菌絲體粉在220、440mg/kg劑量下，明顯增強(qiáng)小鼠單核-巨噬細(xì)胞功能及DNFB誘導(dǎo)的小鼠遲發(fā)性變態(tài)反應(yīng)。結(jié)果表明，蝙蝠蛾擬青霉菌絲體粉具有明顯增強(qiáng)小鼠細(xì)胞免疫功能的作用。

參考文獻(xiàn)

[1]傅惠英，張利棕，壽旗揚(yáng)，等.中國(guó)被毛孢和蝙蝠蛾擬青霉小鼠免疫功能調(diào)節(jié)作用的比較[J].中國(guó)比較醫(yī)學(xué)雜志，2012，22（9）：16-20.

[2]衛(wèi)生部衛(wèi)生法制與監(jiān)督司.保健食品檢驗(yàn)與評(píng)價(jià)技術(shù)規(guī)范（2003版）[S].北京：人民衛(wèi)生出版社，2003：22-34.