劉 成，張書玉，袁艷麗，蔡英杰，李新麗

(江蘇省理化測試中心，江蘇 南京 210042)

消旋卡多曲作為一種新作用機制的抗腹瀉藥，直接抑制腸道過度分泌，快速改善腹瀉癥狀，能明顯縮短病程、減少患兒的痛苦，適用于成人及1月以上嬰兒和兒童的急性腹瀉[1]。消旋卡多曲生產(chǎn)工藝線路長，在藥物生產(chǎn)過程中使用了對甲苯磺酸鹽、甲醇、乙醇和異丙醇等有毒有害試劑，產(chǎn)品中容易有對甲苯磺酸甲酯、對甲苯磺酸乙酯、對甲苯磺酸異丙酯等雜質(zhì)的殘留。由于對甲苯磺酸酯類被視為潛在基因毒性雜質(zhì)，可與DNA發(fā)生烷基化反應(yīng)[2-3]，從而可能成為引發(fā)癌癥的誘因[4-5]，因此要嚴(yán)格控制消旋卡多曲中對甲苯磺酸酯類的含量。本試驗采用氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)檢測消旋卡多曲中對甲苯磺酸甲酯、對甲苯磺酸乙酯和對甲苯磺酸異丙酯的含量，為消旋卡多曲藥物生產(chǎn)中雜質(zhì)的檢測提供技術(shù)依據(jù)。

1 實 驗

1.1 儀器與試劑

Agilent 7890B-5977A GC/MS氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀，美國安捷倫；BT25S電子天平，德國賽多利斯。

消旋卡多曲，對甲苯磺酸甲酯(分析純，純度≥99%)，對甲苯磺酸乙酯(分析純，純度≥99%)，對甲苯磺酸異丙酯(分析純，純度≥99%)。

1.2 色譜質(zhì)譜條件

色譜柱：HP-5ms，固定相為5%苯基-甲基聚硅氧烷氣相毛細(xì)管柱(長：30 m，內(nèi)徑：0.25 mm，膜厚：0.5 μm)。

載氣：氦氣。流速：0.8 mL/min。進樣口溫度：300 ℃。

程序升溫：初始柱溫80 ℃，保持2 min，以20 ℃/min的速度升到160 ℃，以3 ℃/min的速度升到180 ℃，再以20 ℃/min的速度升到320 ℃，保持15 min。

質(zhì)譜檢測參數(shù)：電子轟擊(EI)離子源，電離能量70 eV，離子源溫度230 ℃，SIM掃描模式，分別選擇質(zhì)荷比(m/z)為65、91、92、107、155、172、186的離子進行檢測。

1.3 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制

稀釋劑：乙腈。供試品溶液：取本品適量，精密稱定溶于乙腈中。標(biāo)準(zhǔn)儲備液：分別精密稱取對甲苯磺酸甲酯、對甲苯磺酸乙酯和對甲苯磺酸異丙酯標(biāo)準(zhǔn)樣品，用乙腈稀釋至濃度為10 μg/mL。分別精密量取對照品貯備液50、100、200、300、400、500 μL于10 mL容量瓶中，用稀釋劑稀釋至刻度，搖勻，得線性溶液，濃度為0.05、0.10、0.20、0.30、0.40、0.50 μg/mL。取上述線性溶液各 1 μL進樣，記錄色譜圖。

2 結(jié)果與討論

2.1 專屬性驗證

配制對甲苯磺酸甲酯、對甲苯磺酸乙酯、對甲苯磺酸異丙酯混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，進樣。專屬性考察結(jié)果表明，各目標(biāo)峰(見圖1)之間分離度良好，無其他分子量相同的雜質(zhì)干擾測定，該方法專屬性強。

圖1 對甲苯磺酸酯類雜質(zhì)混合標(biāo)準(zhǔn)溶液的總離子流譜圖

2.2 檢出限

表1 檢測限試驗結(jié)果

取標(biāo)準(zhǔn)溶液適量逐級稀釋成0.005 μg/mL的溶液并進樣，連續(xù)進樣3針，記錄離子流圖，計算得信噪比(S/N)(見表1)。試驗數(shù)據(jù)顯示：對甲苯磺酸甲酯、對甲苯磺酸乙酯和對甲苯磺酸異丙酯檢出限濃度分別為0.05 mg/kg、0.067 mg/kg和0.070 mg/kg。

2.3 線性范圍

分別配置不同濃度的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，與樣品空白溶液同時進行測定，以各組分的峰面積與其對應(yīng)的質(zhì)量濃度繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，試驗結(jié)果表明，對甲苯磺酸甲酯在0.050～0.50 μg/mL濃度范圍內(nèi)線性方程：y=6.366×105x+9159，相關(guān)系數(shù)：r=0.9992；對甲苯磺酸乙酯在0.05～0.50 μg/mL濃度范圍內(nèi)線性方程：y=2.915×105x-405.3，相關(guān)系數(shù)：r=0.9991；對甲苯磺酸異丙酯在0.05～0.50 μg/mL濃度范圍內(nèi)線性方程：y=9.753×104x+200.9，相關(guān)系數(shù)：r=0.9995。

2.4 方法精密度和準(zhǔn)確度

分別配制相當(dāng)于進樣濃度0.10 μg/mL、0.40 μg/mL的加標(biāo)供試品溶液，平行進樣6次檢測，計算各目標(biāo)化合物的含量，回收率及回收率的RSD。確定該色譜方法的測定結(jié)果與真實值(加入量)的差異，從而確認(rèn)該方法是否可以獲得準(zhǔn)確的測試結(jié)果。三種化合物的準(zhǔn)確度測試結(jié)果見表2。對甲苯磺酸甲酯、對甲苯磺酸乙酯和對甲苯磺酸異丙酯平均回收率分別為93.0%、94.0%、94.3%。各基因毒性雜質(zhì)的精密度結(jié)果分別為對甲苯磺酸甲酯3.5%，對甲苯磺酸乙酯2.7%，對甲苯磺酸異丙酯2.6%，測定結(jié)果的RSD 均≤10.0%。各雜質(zhì)的加標(biāo)回收試驗結(jié)果良好。該方法準(zhǔn)確度和精密度良好。

表2 對甲苯磺酸酯類準(zhǔn)確度測試結(jié)果

2.5 樣品檢測

消旋卡多曲供試品溶液：精密稱定供試品各1 g(精確到0.0001 g)，置于10 mL的量瓶中，搖勻，進樣測試。結(jié)果見表3。

表3 樣品檢測結(jié)果

3 結(jié) 論

本試驗用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法測定消旋卡多曲中的對甲苯磺酸甲酯、對甲苯磺酸乙酯、對甲苯磺酸異丙酯，本方法前處理簡單、所得數(shù)據(jù)準(zhǔn)確,可用于消旋卡多曲中基因毒性雜質(zhì)的定量。