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        長鏈非編碼RNA BCAR4在彌漫性大B細(xì)胞淋巴瘤患者中的表達(dá)及其臨床意義

        2020-02-08 05:10:12蘭雪玲
        實(shí)用癌癥雜志 2020年1期
        關(guān)鍵詞:引物病理病灶

        張 寧 蘭雪玲

        彌漫性大B 細(xì)胞淋巴瘤(diffuse large B-cell lymphoma,DLBCL)是一種侵襲性的B細(xì)胞淋巴瘤惡性疾病,是非霍奇金淋巴瘤(non-Hodgkin's lymphoma,NHL) 中最常見的發(fā)病類型,其發(fā)病率約占NHL的40%[1-2]。 DLBCL病變主要在淋巴結(jié)內(nèi),也有部分病灶在淋巴結(jié)外,結(jié)外病灶多存在于胃腸道、骨及中樞神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi),發(fā)病初期患者淋巴結(jié)快速增長,可同時出現(xiàn)發(fā)熱、盜汗等癥狀,隨著病情的發(fā)展病灶呈現(xiàn)侵襲性增長,導(dǎo)致患者出現(xiàn)相應(yīng)癥狀、治療效果不佳[3-4]。雖然隨著醫(yī)學(xué)技術(shù)的發(fā)展DLBCL的治療手段及效果等取得了較大的進(jìn)展,但是仍舊有高達(dá)40%的患者死于復(fù)發(fā)。目前DLBCL發(fā)病的分子機(jī)制尚不是很明確,嚴(yán)重阻礙了DLBCL的深入研究[4-5]。長鏈非編碼RNA (long non-coding RNAs,lncRNAs)是近年來新發(fā)現(xiàn)一類RNA,其不具有編碼蛋白的功能,但是可以通過與蛋白結(jié)合等的方式對腫瘤等多種疾病進(jìn)行調(diào)控,在疾病的發(fā)生、發(fā)展及預(yù)后中具有重要作用[6-7]。本研究通過血清LncRNA檢測發(fā)現(xiàn)DLBCL患者的LncRNA BCAR4表達(dá)較高,因此我們推測,LncRNA BCAR4可能與DLBCL的發(fā)生、發(fā)展及預(yù)后有關(guān)。現(xiàn)報(bào)告如下。

        1 材料與方法

        1.1 一般資料

        以我院2012年9月至2015年9月收治的90例DLBCL患者為觀察組,以同期90例淋巴反應(yīng)性增生(RLH)患者為對照組;收集2組患者血清,并立即保存于-80 ℃冰箱備用。收集2組患者一般資料及相關(guān)指標(biāo)(表1)。納入標(biāo)準(zhǔn):所有患者均經(jīng)過病理學(xué)檢查確診為DLBCL[2,4];患者均為首次發(fā)現(xiàn)病例,未接受過任何方式治療;CT診斷發(fā)現(xiàn)至少1個≥2 cm的病灶;預(yù)估生存期在3個月以上;患者愿意配合研究。排除標(biāo)準(zhǔn):其它類型惡性腫瘤患者;合并有其它類腫瘤患者;合并有嚴(yán)重臟器疾病患者;精神障礙患者。本研究已獲得我院醫(yī)學(xué)倫理委員會的批準(zhǔn),所有患者或其家屬均了解研究的基本過程,愿意配合完成研究并簽署知情同意書。

        1.2 方法

        采用實(shí)時熒光定量PCR(QRT-PCR)檢測2組血液LncRNA BCAR4含量,并分析其與DLBCL患者病理特征及預(yù)后的關(guān)系。取患者靜脈血液,使用TRIzol法提取總RNA,嚴(yán)格按照逆轉(zhuǎn)錄試劑盒(takara)步驟轉(zhuǎn)錄成cDNA。QRT-PCR使用2×SYBR Green PCR Master Mix進(jìn)行分析。以cDNA為模板,GAPDH作為內(nèi)參,引物濃度設(shè)定為0.4 μmol/l,每個待測樣本設(shè)置3個平行樣,15 μl體系進(jìn)行擴(kuò)增。qRT-PCR(Bio-Rad real-time PCR 儀) 反應(yīng)條件為:95 ℃預(yù)變性30 s,95 ℃保持5 s,60 ℃保持 20 s,40個循環(huán)。儀器自帶軟件分析樣本的循環(huán)閾值(cycle threshold,CT),LncRNA BCAR4的相對表達(dá)量,采用2-ΔΔCt方法計(jì)算。LncRNA BCAR4正向引物為:5'-AGACCAGCTTGTTGCTCATCA-3', 反向引物為:5'-AAGCCTTGGGGACAGTTCAC-3';GAPDH正向引物為:5'-CCTCTCTGCTCCTCCTGTCC-3'; 反向引物為:5'-AGGACCAAATCCGTTGTCTC-3'。

        1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

        采用SPSS 20.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析,計(jì)量資料以 表示,采用t檢驗(yàn)進(jìn)行對比;計(jì)數(shù)資料以%表示,采用χ2檢驗(yàn)進(jìn)行對比;2組數(shù)據(jù)的相關(guān)性采用Spearman分析,用Kaplan-Meier繪制生存曲線,Log-Rank檢驗(yàn)比較生存曲線的差異,以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

        2 結(jié)果

        2.1 DLBCL與RLH患者血清LncRNA BCAR4對比

        qPCR檢測結(jié)果顯示, DLBCL患者血清BCAR4表達(dá)水平(4.25±0.23)明顯高于RLH患者(1.12±0.07)(t=7.432,P<0.05)。如圖1所示。

        圖1 DLBCL與RLH患者血清LncRNA BCAR4對比

        2.2 DLBCL患者lncRNA BCAR4表達(dá)水平與臨床病理特征的關(guān)系

        參照研究對象DLBCL患者lncRNA BCAR4平均表達(dá)水平(4.25),將其分為lncRNA BCAR4高表達(dá)(≥4.25)48例與低表達(dá)(<4.25)組42例。分析lncRNA BCAR4表達(dá)水平與DLBCL患者臨床病理特征的關(guān)系,結(jié)果顯示,腫瘤直徑較大、分期較高、存在B癥狀、IPI較高的DLBCL患者LncRNA BCAR4表達(dá)水平明顯更高(P<0.05)。見表1。

        2.3 lncRNA BCAR4表達(dá)水平與DLBCL患者生存期的關(guān)系

        Kaplan-Meier統(tǒng)計(jì)分析顯示,高表達(dá)lncRNA BCAR4 的DLBCL患者中位無進(jìn)展生存時間(middle progression-free survival,MPFS)(16.15±2.24個月)顯著短于低表達(dá)者 (33.06±3.22個月)(t=17.824,P<0.05)。如圖2。

        2.4 DLBCL患者預(yù)后影響因素分析

        多因素Cox 回歸分析顯示,高表達(dá)的lncRNA BCAR4與高IPI指數(shù)是DLBCL患者預(yù)后不良的獨(dú)立危險(xiǎn)因素(P<0.05)。見表2。

        3 討論

        NHL具有高度異質(zhì)性且發(fā)病部位較多,在發(fā)病的早期即可出現(xiàn)遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移,是近年來發(fā)病率增長最快的惡性腫瘤,而DLBCL是BHL中最常見的病理類型,發(fā)病率高達(dá)NHL的30%~40%[7-8]。文獻(xiàn)報(bào)道,DLBCL在組織形態(tài)、臨床特征及表觀遺傳學(xué)方面表現(xiàn)差異較大,通常Ⅰ~Ⅱ DCBCL患者使用化療聯(lián)合綜合治療, Ⅲ~Ⅳ DLBCL患者以化療為主[9-10]?;熕幬镏饕?,甲基芐肼、環(huán)磷酰胺、氮芥等烷化劑,綜合治療主要目的是為了控制腫瘤的遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移,其中放療能夠有效地控制局部病灶的復(fù)發(fā),50%左右的患者能夠治愈。但是,進(jìn)展期患者治療效果并不好,且部分患者治愈后容易再次復(fù)發(fā),因此,尋找能夠早期發(fā)現(xiàn)DLBCL的標(biāo)志物及DLBCL預(yù)后的危險(xiǎn)因素是目前臨床治療DLBCL關(guān)注的重點(diǎn)[11-12]。LncRNA是一種不編碼蛋白的RNA,其總長在200 nt以上,可以通過與蛋白的結(jié)合對基因的表觀遺傳、基因轉(zhuǎn)錄及轉(zhuǎn)錄后水平進(jìn)行調(diào)控,在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展中具有重要作用[13-14]。文獻(xiàn)報(bào)道,lncRNA BCAR4與胰腺癌、肺癌、結(jié)直腸癌等腫瘤的增殖、轉(zhuǎn)移等相關(guān),高表達(dá)lncRNA BCAR4可能是腫瘤預(yù)后不良的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。此外,lncRNA BCAR4還可以作為這些腫瘤的早期診斷標(biāo)志物[12,15]。目前,尚未發(fā)現(xiàn)lncRNA BCAR4在DLBCL中的報(bào)道。因此,本研究分析了高表達(dá)lncRNA BCAR4與DLBCL病理特征及患者預(yù)后的關(guān)系。

        表1 DLBCL患者lncRNA BCAR4表達(dá)水平與臨床病理特征的關(guān)系/例

        圖2 lncRNA BCAR4表達(dá)水平與DLBCL患者生存期的關(guān)系

        本研究對我院DLBCL患者及RLH患者體內(nèi)lncRNA BCAR4的表達(dá)水平進(jìn)行了分析,并對DLBCL患者體內(nèi)lncRNA BCAR4表達(dá)水平與患者的病理特征及預(yù)后進(jìn)行了詳細(xì)的分析,結(jié)果顯示DLBCL患者體內(nèi)lncRNA BCAR4表達(dá)水平明顯高于RLH患者,提示DLBCL患者lncRNA BCAR4表達(dá)水平普遍較高,lncRNA BCAR4可作為DLNCL患者的早期診斷輔助標(biāo)志物。腫瘤較大、分期較高、存在B癥狀、IPI較高的DLBCL患者LncRNA BCAR4表達(dá)水平明顯更高,提示高lncRNA BCAR4表達(dá)可能與腫瘤增殖、腫瘤分期、B癥狀存在及高IPI指數(shù)有關(guān),這與文獻(xiàn)中[7,10,12]lncRNA BCAR4對乳腺癌、肺癌、宮頸癌細(xì)胞增殖及轉(zhuǎn)移等具有調(diào)控作用一致,原因可能與lncRNA BCAR4通過信號通路提高細(xì)胞的增殖能力有關(guān),這進(jìn)一步說明,lncRNA BCAR4不僅對其它腫瘤細(xì)胞具有調(diào)控作用,同樣也適用于DLBCL患者。高表達(dá)lncRNA BCAR4 的DLBCL患者中位無進(jìn)展生存時間顯著短于低表達(dá)者,提示高表達(dá)lncRNA BCAR4是DLNCL患者預(yù)后不良的危險(xiǎn)因素,原因可能與其促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增殖及轉(zhuǎn)移潛能等有關(guān)。進(jìn)一步通過多因素COX回歸分析發(fā)現(xiàn),高表達(dá)的lncRNA BCAR4與高IPI 指數(shù)是DLBCL患者預(yù)后不良的獨(dú)立危險(xiǎn)因素因素,提示lncRNA BCAR4可對患者的預(yù)后進(jìn)行評估,作為DLBCL患者預(yù)后不良的一個指標(biāo)。本研究系統(tǒng)分析了lncRNA BCAR4與DLBCL患者的關(guān)系,發(fā)現(xiàn)lncRNA BCAR4在DLBCL的早期診斷及預(yù)后評估中具有一定作用,為我院DLBCL的早期發(fā)現(xiàn)及疾病治療效果評估提供了可靠的評估指標(biāo),同時也促進(jìn)了我院對DLBCL的深入了解。但是本研究由于技術(shù)水平及人力資源等的限制在研究的深度及數(shù)據(jù)結(jié)果方面可能還需要進(jìn)一步的完善,研究小組將會結(jié)合文獻(xiàn)報(bào)道及我科的實(shí)際情況,進(jìn)一步深入對DLBCL的了解,并加強(qiáng)與相關(guān)研究單位的交流合作,為臨床提供更多可靠的依據(jù)。

        表2 DLBCL患者預(yù)后影響因素分析

        綜上所述,lncRNA BCAR4在DLBCL患者中表達(dá)水平較高,并與患者的腫瘤大小、分期、是否存在B癥狀、IPI指數(shù)及預(yù)后有關(guān),可以作為DLBCL患者早期診斷及治療效果評估、預(yù)后評估的一個可靠指標(biāo)。

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