楊州帆 吳鵬波 劉其林 劉澤峰 李福建 張 國(guó)

肝細(xì)胞癌(HCC)是世界范圍內(nèi)第五大常見的癌癥，也是全球癌癥死亡的第二大原因[1]。我國(guó)每年的新發(fā)肝癌占全世界50%以上,而且呈現(xiàn)逐年遞增的趨勢(shì)[2]。在我國(guó)，HCC的主要危險(xiǎn)因素是慢性乙型肝炎病毒(HBV)感染和隨后的肝硬化[3]。識(shí)別與HCC發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)相關(guān)的更敏感的特異性基因?qū)τ贖CC的預(yù)防及治療均至關(guān)重要。

細(xì)胞周期蛋白D1(CCND1)是1種重要的調(diào)節(jié)蛋白，由CCND1基因編碼，在調(diào)控細(xì)胞周期G1/S期轉(zhuǎn)換過程中發(fā)揮著正性調(diào)節(jié)作用[4]。CCND1基因過度表達(dá)可縮短G1/S期，使細(xì)胞生長(zhǎng)較少依賴細(xì)胞因子，因此經(jīng)常在癌癥中過度表達(dá)[5]。CCND1基因有兩個(gè)多態(tài)位點(diǎn)，其中研究最多的是CCND1 GA位點(diǎn)基因多態(tài)性[6]，其多態(tài)性已被證明與鼻咽癌[7]、子宮內(nèi)膜癌[8]、肺癌[9]、直腸癌[10]、乳腺癌[11]等多種腫瘤的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)及預(yù)后相關(guān)，但關(guān)于CCND1表達(dá)與HCC風(fēng)險(xiǎn)的研究結(jié)果仍存在一些差異，因此我們做了1個(gè)Meta分析來更好地評(píng)估CCND1 G/A位點(diǎn)基因多態(tài)性與HCC發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)的關(guān)系。

1 材料與方法

1.1 資料收集

利用計(jì)算機(jī)系統(tǒng)檢索PubMed、CNKI和EMbase數(shù)據(jù)庫中相關(guān)研究，各系統(tǒng)均檢索至2018年6月。英文檢索式為：“CCND1 or Cyclin D1 or rs9344”and“Hepatocellular carcinoma or liver cancer or HCC”；中文檢索式為：“細(xì)胞周期蛋白或CCND1或Cyclin D1或rs9344”和“肝癌或肝細(xì)胞癌或原發(fā)性肝癌”；只有發(fā)表了全文文章的研究才被納入，所有研究的文種限中、英文，同時(shí)手動(dòng)檢索所獲文獻(xiàn)的相關(guān)參考文獻(xiàn)以及雜志。

1.2 納入和排除標(biāo)準(zhǔn)

納入標(biāo)準(zhǔn)①文獻(xiàn)為涉及CCND1基因多態(tài)性與HCC發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)相關(guān)性的病例對(duì)照研究；②病例組為病理證明為HCC的患者；③提供了完整數(shù)據(jù)的比值比(OR)、95%的可信區(qū)間(95%CI)以及基因型頻率。排除標(biāo)準(zhǔn):①未通過病理證明為HCC的患者；②未設(shè)置對(duì)照組;③動(dòng)物實(shí)驗(yàn)、摘要、綜述或重復(fù)文獻(xiàn)；④無法獲取原始樣本量或者基因型頻率等數(shù)據(jù)。

1.3 數(shù)據(jù)提取

從符合納入標(biāo)準(zhǔn)的每篇文章中記錄了以下數(shù)據(jù):第一作者、出版年份、患者的人種、病例數(shù)量、基因型分布和頻率。這些數(shù)據(jù)均由兩位作者分別記錄、提取。兩位作者之間的數(shù)據(jù)差異，通過討論達(dá)成一致意見。

1.4 質(zhì)量評(píng)價(jià)

選用NOS(newcastle-ottawa scale)標(biāo)準(zhǔn)評(píng)價(jià)納入研究的質(zhì)量。該評(píng)分系統(tǒng)通過以下方面進(jìn)行評(píng)價(jià):①病例組和對(duì)照組的代表性；②病例組和對(duì)照組的可比性;③病例組和對(duì)照組的研究方法;④相關(guān)危險(xiǎn)因素的暴露情況，得分≥7分提示研究質(zhì)量較高[12]。

1.5 統(tǒng)計(jì)分析

通過計(jì)算比值比(OR)和95% CI來評(píng)估關(guān)聯(lián)強(qiáng)度。分別計(jì)算4種遺傳模型：純合子模型(AA vs GG)、雜合子模型(GA vs GG)、顯性遺傳模型(GA+AA vs GG)、隱性遺傳模型(AA vs GG+GA)的效應(yīng)值。用卡方檢驗(yàn)評(píng)價(jià)對(duì)照組基因型是否偏離了哈迪-溫伯格平衡(Hardy-Weinberg equilibrium，HWE)，其中P<0.05認(rèn)為不符合H-W平衡。各研究結(jié)果間的異質(zhì)性檢驗(yàn)選用Q檢驗(yàn)，I2用來評(píng)估異質(zhì)性大小程度，Q檢驗(yàn)的P>0.10表明各研究之間無異質(zhì)性。若各研究結(jié)果間無異質(zhì)性，選用固定效應(yīng)模型計(jì)算OR值;反之選用隨機(jī)效應(yīng)模型，應(yīng)用Begg檢驗(yàn)和Egger檢驗(yàn)判斷納入研究的潛在發(fā)表偏倚。P<0.05認(rèn)為存在發(fā)表偏倚。所有統(tǒng)計(jì)測(cè)試均選擇Stata12.0軟件進(jìn)行分析。

2 結(jié)果

2.1 文獻(xiàn)檢索結(jié)果

7項(xiàng)研究符合納入標(biāo)準(zhǔn)，納入最終分析。其中一項(xiàng)研究報(bào)告了三項(xiàng)病例對(duì)照研究。因此，本研究共納入1108例肝癌患者和1477例對(duì)照。四項(xiàng)研究在亞洲人口中進(jìn)行;三項(xiàng)研究在白種人中進(jìn)行。所有研究的對(duì)照組基因型分布都符合H-W平衡(P>0.05)。納入7項(xiàng)研究[13-19]的特點(diǎn)總結(jié)見表1。

表1 納入研究的一般情況及基因分布情況

2.2 Meta分析結(jié)果

當(dāng)7個(gè)研究合并分析時(shí)顯示：CCND1基因多態(tài)性與HCC發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)的相關(guān)性無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。各基因遺傳模型分析結(jié)果如下：AA vs GG:OR=1.33，95%CI:0.98～1.82，P=0.07;GA vs GG:OR=1.07，95%CI:0.92～1.24，P=0.37;GA+AA vs GG:OR=0.93，95%CI:0.82～1.05，P=0.23;AA vs GG+GA:OR=1.08，95%CI:0.95～1.22，P=0.24，見表2、圖1。

表2 CCND1 GA位點(diǎn)基因多態(tài)性與HCC風(fēng)險(xiǎn)相關(guān)性meta分析結(jié)果

圖1 CCND1 GA位點(diǎn)基因多態(tài)性雜合子模型(GA vs GG)森林圖

2.3 敏感性分析

依次單獨(dú)剔除其中一篇文獻(xiàn)后,對(duì)剩余研究重新進(jìn)行Meta分析，各基因遺傳模型合并效應(yīng)值均未發(fā)生明顯改變，提示本Meta分析結(jié)果較穩(wěn)定。

2.4 發(fā)表偏倚分析

Begg'S檢驗(yàn)、Egger'S檢驗(yàn)提示：4種基因模型均未見明顯發(fā)表偏倚(P>0.05)，見表2、圖2。

圖2 CCND1 GA位點(diǎn)基因多態(tài)性顯性遺傳模型(GA+AA vs GG)發(fā)表偏倚的漏斗圖

3 討論

細(xì)胞周期蛋白D1由CCND1基因編碼，是細(xì)胞進(jìn)入增殖周期合成的第一個(gè)周期蛋白，可與細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶4/6(CDK4/6)形成蛋白復(fù)合體，在調(diào)控細(xì)胞周期從G1期向S期過渡的過程中發(fā)揮著至關(guān)重要的作用[4]。 CCND1基因可以通過擴(kuò)增，染色體易位，突變和活化等形式調(diào)控細(xì)胞周期蛋白D1表達(dá)，從而影響正常的細(xì)胞生長(zhǎng)，使腫瘤的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)性增加[20]。當(dāng)CCND1表達(dá)被沉默后，也可以通過抑制耐藥基因的表達(dá)、誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡等方式，增加腫瘤細(xì)胞對(duì)5-氟尿嘧啶(5-Fu)[21]和順鉑[22]等化療藥物的敏感性，已經(jīng)成為腫瘤治療的潛在靶點(diǎn)及研究熱點(diǎn)[5]。

目前，在預(yù)測(cè)腫瘤易感性及發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)方面，CCND1基因多態(tài)性同樣扮演著重要的角色。Catarino等[23]有關(guān)宮頸鱗癌患者的研究表明：GG基因型會(huì)增加宮頸鱗癌的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)。Xu等[24]報(bào)道，對(duì)于肺腺癌患者，尤其是臨床早期患者，細(xì)胞核中CCND1表達(dá)的增加是一個(gè)潛在的不利預(yù)后因素。Zhang等[25]關(guān)于食管癌、胃癌患者的病例對(duì)照研究中顯示，對(duì)于AA基因型患者，食管癌和胃癌的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)明顯增加。

對(duì)于CCND1 G/A位點(diǎn)基因多態(tài)性與HCC發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)的關(guān)系，已經(jīng)有一些研究進(jìn)行過調(diào)查。但其結(jié)果仍存在一些差異。本研究采用Meta分析方法，對(duì)CCND1 G/A位點(diǎn)基因多態(tài)性與HCC發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)的相關(guān)性進(jìn)行系統(tǒng)評(píng)價(jià)，Meta分析結(jié)果提示：CCND1 G/A位點(diǎn)基因多態(tài)性與HCC發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)無顯著相關(guān)性。

本研究采用數(shù)據(jù)庫系統(tǒng)檢索的方法，制定了嚴(yán)格的納入標(biāo)準(zhǔn)，設(shè)計(jì)了科學(xué)的實(shí)驗(yàn)方法并提供了可靠的統(tǒng)計(jì)學(xué)數(shù)據(jù)，所有研究均符合HWE平衡。同時(shí)發(fā)表偏倚檢測(cè)也顯示納入的7項(xiàng)研究均不存在明顯發(fā)表偏倚，說明了文獻(xiàn)來源的可靠性。異質(zhì)性檢驗(yàn)中，除了AA vs GG模型，其他模型均未見明顯異質(zhì)性，說明本Meta分析結(jié)果較可靠、穩(wěn)定。

但本文仍然有一些局限性：①本meta分析只檢索了國(guó)內(nèi)外幾個(gè)有代表性的數(shù)據(jù)庫，檢索語言只限于英文和中文，并且只有發(fā)表了全文的文獻(xiàn)才被納入了本研究，影響了納入文獻(xiàn)的全面性。②HCC的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)可能與多因素共同作用相關(guān)，而本研究并未對(duì)基因、環(huán)境、年齡、飲食習(xí)慣等因素的交互作用進(jìn)行評(píng)估。③并未依據(jù)相關(guān)遺傳背景進(jìn)行亞組分析。

目前研究結(jié)果尚不能認(rèn)為CCND1 G/A位點(diǎn)基因多態(tài)性與肝細(xì)胞癌發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)有顯著相關(guān)性。受納入研究數(shù)量等因素限制，上述結(jié)論有待進(jìn)一步驗(yàn)證。