田懷 劉曉宏

隨著科學的進步和社會的不斷發(fā)展，細胞組培技術(shù)的廣泛應(yīng)用于農(nóng)業(yè)生產(chǎn)。鐵皮石斛作為珍貴的中醫(yī)藥材和觀賞植物，社會需求量不斷增加。鐵皮石斛主要分布在我國南方地區(qū)，包括云南、貴州、江西、廣西等地，作為名貴盆栽和珍貴中藥，鐵皮石斛的組培應(yīng)用能夠大大提高和滿足社會的需求，而且據(jù)古書記載，鐵皮石斛藥用價值也很高，是日常生活中一種保健佳品，在自然環(huán)境中，鐵皮石斛主要生長在陡坡和懸崖峭壁間，自我繁殖能力差，再加上近年來環(huán)境污染和過度采摘，導(dǎo)致鐵皮石斛的自然狀態(tài)下的資源嚴重緊缺，已經(jīng)到了瀕危滅絕的境地。

組培快速繁殖技術(shù)的發(fā)展廣泛應(yīng)用在很多植物上，從九十年代的初期就有關(guān)于鐵皮石斛的組培技術(shù)出現(xiàn)，它主要是采用優(yōu)秀單一植株進行組織培養(yǎng)和誘導(dǎo)的方式，工廠化育苗主要是進行組織培養(yǎng)基的配方、壯苗生根、過程管理等方面進行研究和優(yōu)化。本文研究的主要目的在于探討鐵皮石斛組培繁殖過程中技術(shù)環(huán)節(jié)主要受哪些因素影響，篩選組培快繁技術(shù)的最優(yōu)條件，促進鐵皮石斛的快速繁殖與規(guī)?；a(chǎn)。

一、選擇材料

1.實驗材料。實驗材料采自貴州荔波自然保護區(qū)的野生鐵皮石斛。

2.組培條件。環(huán)境溫度控制在20～26℃，環(huán)境濕度控制在70～80%之間，生根培養(yǎng)光照2500lx，其它光照在1300lx。

二、培養(yǎng)操作方法

1.培養(yǎng)基質(zhì)和外植體的選用。選取生長健康旺盛的鐵皮石斛實生無菌苗，在莖節(jié)部位的中央位置橫向切開，節(jié)部的上下方分別留出6mm的莖段，取4個培養(yǎng)基質(zhì)樣本進行實驗，分別放入組培器皿中，每個器皿接種10個莖段，以MS為基本培養(yǎng)基質(zhì)，外加入糖粉3.2%、瓊脂0.7%、控制pH值在5.0～6.0之間，附加芐基氨基嘌呤、萘乙酸的培養(yǎng)基。將4個培養(yǎng)器皿放置于培養(yǎng)室內(nèi)進行培養(yǎng)。

2.叢生芽的激素濃度配比。選擇不同濃度配比的營養(yǎng)基質(zhì)，分別放入?yún)采?，每個器皿放入10個幼芽，5瓶為一組，每組重復(fù)實驗4次，每天觀察，在組培室內(nèi)培養(yǎng)一個月后進行統(tǒng)計，檢查出芽率，并在此期間觀察生長情況和記錄數(shù)據(jù)。

3.植入密度間的對比。把鐵皮石斛的組培幼苗叢生芽生長最好的培養(yǎng)基質(zhì)中，接種莖段為5個每瓶、10個每瓶和20個每瓶，觀察增加倍數(shù)和幼苗的生長狀況，觀察1個月，統(tǒng)計增殖數(shù)據(jù)。

4.不同部位選擇的莖段腋芽誘導(dǎo)。分別取健康無菌苗的上部、中部和下部三部分莖段，在叢生芽的最佳培養(yǎng)基質(zhì)中進行接種，每個器皿中5個莖段，一個月后統(tǒng)計不同部位的莖段腋芽誘導(dǎo)率，對比觀察不同部位對其腋芽的生長狀況的影響。

5.室外移苗訓(xùn)化實驗。在移栽前將培養(yǎng)器皿移出培養(yǎng)室，讓其適應(yīng)外部自然環(huán)境，一般情況下訓(xùn)化需要時間8-10d，讓其充分適應(yīng)環(huán)境，等器皿內(nèi)幼苗長到7cm左右時進行移栽，移栽過程中需輕拿輕放，防止傷到幼苗，取出后用水清洗掉附著在根部表面的營養(yǎng)基質(zhì)，在背光處進行自然通風，去除表面附著的水分，然后栽入有機基質(zhì)的盆中，在栽種過程中注意幼苗的舒展程度，防止擠壓。分別將移栽的幼苗移栽松樹皮、水苔蘚和草炭土三種不同的有機介質(zhì)中，兩個月后觀察成活數(shù)量，計算出成數(shù)活率（成活數(shù)率=成活數(shù)量/移栽數(shù)量）

三、結(jié)果分析

1.培養(yǎng)基質(zhì)的選擇。在實驗過程中4種基質(zhì)都能誘導(dǎo)產(chǎn)生叢生芽，但誘導(dǎo)的效果有很大不同，根據(jù)實驗數(shù)據(jù)可以看出不同培養(yǎng)基質(zhì)對幼芽長勢有著明顯的不同。MS培養(yǎng)基質(zhì)平均再生芽數(shù)10個，芽長1.37cm，誘導(dǎo)率100%。其它三種培養(yǎng)基質(zhì)0.5MS、B5、N6的平均再生芽數(shù)都明顯低于MS，并且葉的顏色和健康程度都沒有MS好，最差的是N6培養(yǎng)基質(zhì)。

2.激素濃度對腋芽誘導(dǎo)和增殖的影響

根據(jù)圖表一數(shù)據(jù)可以看出6BA2.0+NNA0.1接種后處理的效果最好?？梢缘贸鲎詈线m的激素組合。

3.接種密度對鐵皮石斛增殖的影響。根據(jù)具體數(shù)據(jù)分析隨著接種密度的增加，5個每瓶時增殖倍數(shù)為2.42，苗的健壯程度為苗粗壯，葉色偏綠。10個每瓶時增殖倍數(shù)為3.15，健壯程度與5個每瓶狀態(tài)相似。15個每瓶時增殖倍數(shù)為3.31，苗的健壯程度為苗健壯，葉色發(fā)綠。20個每瓶時增殖倍數(shù)為2.98，苗的健壯程度為苗莖細，葉色發(fā)黃和矮小。所以，從數(shù)據(jù)上來看，當密度達到15個每瓶時，鐵皮石斛的增殖和苗的健康程度是最好的。

4.不同部位莖段腋芽誘導(dǎo)產(chǎn)生的影響

根據(jù)表二的數(shù)據(jù)可以得出，成分不變，中部的出芽狀況和芽長是最佳的，所以采用鐵皮石斛中段進行組織培養(yǎng)是最佳之選。

5.不同基質(zhì)對鐵皮石斛的組培苗生長及其影響

由表三可以看到，使用樹皮移栽組培苗的成活率遠高于其它兩種基質(zhì)，成活率高達91.5%，其次是草炭土從成活率為51.7%，水苔蘚最差，成活率僅有21%，所有的得出結(jié)論，最佳基質(zhì)是純樹皮。進一步分析，可能引起成活率高低的原因與含水量有關(guān)，鐵皮石斛的根系是氣生根類，保水量過大容易造成根系腐爛，在試驗中，水苔蘚的保水量最大，所以導(dǎo)致成活率低的主要原因。

四、結(jié)論與探討

綜上所述，鐵皮石斛的再生植株主要采用組培快繁技術(shù)培養(yǎng)石斛原球使其進行出芽、增殖、培養(yǎng)、壯苗生根等過程。在無菌條件下供給營養(yǎng)，適宜環(huán)境光照和濕度下進行生長。但在后期馴化時，環(huán)境發(fā)生改變，如果沒有控制好相應(yīng)的措施，都會帶來大量的植株死亡，造成經(jīng)濟損失。把握好每個環(huán)節(jié)，提高成活率是我們需要進一步提高的目標。選出最適合的移栽基質(zhì)，根據(jù)本地區(qū)的環(huán)境，進行綜合調(diào)節(jié)，將作為以后研究的重要內(nèi)容。