馬文鋒 ， 朱艷芝， 陳曉晨， 孫利鵬， 張永欽， 郭 亮

（1.河南科技大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院，河南洛陽(yáng)471023；2.河南仰韶生化工程有限公司，河南三門(mén)峽472400；3.天津農(nóng)學(xué)院動(dòng)物科學(xué)與動(dòng)物醫(yī)學(xué)學(xué)院，天津300384）

仔豬斷奶后，營(yíng)養(yǎng)素的攝入由母乳向植物飼糧轉(zhuǎn)變，極易引起斷奶仔豬消化吸收紊亂、生長(zhǎng)停滯等問(wèn)題， 嚴(yán)重時(shí)甚至造成仔豬死亡 （Skinner 等，2014；Herfel 等，2013）。 研究表明，啤酒酵母菌、蛋白酶和枯草芽孢桿菌作為斷奶仔豬常用的功能性添加劑，可以提高仔豬機(jī)體免疫力，緩解斷奶應(yīng)激對(duì)生長(zhǎng)的不良影響 （Lee 等，2014；Lemieux 等，2010）。 本試驗(yàn)旨在比較此三種添加劑對(duì)斷奶仔豬生長(zhǎng)性能、血清生化指標(biāo)和免疫功能的影響，為篩選適宜于斷奶仔豬階段的功能性添加劑提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料 堿性蛋白酶（AP）由河南仰韶生化工程有限公司提供，酶活性為25000 U/g，其余添加劑由市場(chǎng)上購(gòu)買(mǎi)獲得。 枯草芽孢桿菌（BS）有效含量≥1×109cfu/g， 啤酒酵母菌 （SC） 有效含量≥1×109cfu/g。

1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì) 選取23 日齡斷奶仔豬240 頭，隨機(jī)分為4 組，每組5 個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)12 頭（公母各占1/2）。 對(duì)照組飼糧參照美國(guó)NRC（2012）營(yíng)養(yǎng)推薦配制，飼糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平見(jiàn)表1。 試驗(yàn)組在飼糧基礎(chǔ)上分別補(bǔ)充啤酒酵母菌、 堿性蛋白酶和枯草芽孢桿菌，添加比例均為200 mg/kg。 試驗(yàn)期為24 d。

1.3 飼養(yǎng)管理 試驗(yàn)仔豬自由采食和飲水，飼養(yǎng)管理按照豬場(chǎng)常規(guī)程序進(jìn)行。

1.4 檢測(cè)指標(biāo)

1.4.1 生長(zhǎng)性能測(cè)定 測(cè)定各組斷奶仔豬的采食量和體增重，計(jì)算平均日采食量（g/d）、平均日增重（g/d）和飼料增重比。

1.4.2 血清生化和免疫指標(biāo)測(cè)定 試驗(yàn)第24 天，每個(gè)重復(fù)隨機(jī)選取1 頭仔豬于前腔靜脈采血10 mL，3000 r/min 離心5 min， 分離血清，-20 ℃保存， 使用全自動(dòng)生化儀測(cè)定血清總蛋白（TP）、球蛋白（GLB）、葡萄糖（GLU）、鈣（Ca）、磷（P）、尿素氮（UN）、肌酐（Cr）含量、谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）、谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST）、堿性磷酸酶（ALP）活性；免疫球蛋白 （IgA、IgG、IgM） 采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）法測(cè)定，試劑盒均購(gòu)于南京建成生物工程研究所。

表1 飼糧組成及營(yíng)養(yǎng)水平（飼喂基礎(chǔ)）

1.5 統(tǒng)計(jì)方法 試驗(yàn)所得數(shù)據(jù)采用SAS 8.0 統(tǒng)計(jì)軟件Oneway-ANOVA 進(jìn)行分析， 差異顯著性則用Duncan 氏法進(jìn)行多重比較， 以P ＜0.05 作為差異顯著性判定標(biāo)準(zhǔn)。

2 結(jié)果

2.1 補(bǔ)充添加劑對(duì)斷奶仔豬生長(zhǎng)性能的影響由表2 可知，與對(duì)照組相比，飼糧中添加蛋白酶組斷奶仔豬飼料增重比下降了4.94%（P ＜0.05）。在試驗(yàn)期間，飼料中添加啤酒酵母菌、蛋白酶和枯草芽孢桿菌對(duì)平均日增重和平均日采食量均無(wú)顯著影響（P ＞0.05）。 蛋白酶組仔豬的平均日增重最高， 相比啤酒酵母菌組和枯草芽孢桿菌組分別提高了6.5%和9.1%。 與對(duì)照組相比，添加蛋白酶組平均日增重和平均日采食量分別提高11.9%和6.9%。

表2 三種添加劑對(duì)斷奶仔豬生長(zhǎng)性能的影響

2.2 補(bǔ)充添加劑對(duì)斷奶仔豬血清生化指標(biāo)的影響 由表3 可知，與對(duì)照組相比，飼糧中添加啤酒酵母菌、 蛋白酶和枯草芽孢桿菌組斷奶仔豬血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶的活性分別提高39.76%、47.91%、43.54%（P ＜0.05）； 飼糧中添加枯草芽孢桿菌組斷奶仔豬的血清尿素氮水平降低了22.02%（P ＜0.05）；飼糧中添加蛋白酶組斷奶仔豬的血清球蛋白含量提高了15.15%（P ＜0.05）； 其余血清生化指標(biāo)如總蛋白、肌酐含量及堿性磷酸酶、谷草轉(zhuǎn)氨酶活性均差異不顯著（P ＞0.05）。

表3 三種添加劑對(duì)斷奶仔豬血清生化指標(biāo)的影響

2.3 補(bǔ)充添加劑對(duì)斷奶仔豬血清葡萄糖和鈣、磷含量的影響 由表4 可知，與對(duì)照組相比，飼糧中補(bǔ)充蛋白酶組斷奶仔豬的血清葡萄糖水平提高了10.43%（P ＜0.05）；飼糧中添加啤酒酵母菌、蛋白酶或枯草芽孢桿菌對(duì)斷奶仔豬血清鈣和磷的含量無(wú)顯著影響（P ＞0.05）。

表4 三種添加劑對(duì)斷奶仔豬血清葡萄糖和鈣磷代謝的影響mg/100 mL

2.4 補(bǔ)充添加劑對(duì)斷奶仔豬血清免疫功能的影響 由表5 可知，與對(duì)照組相比，飼糧中補(bǔ)充蛋白酶組斷奶仔豬IgG 含量提高了17.00%（P ＜0.05）；飼糧中添加啤酒酵母菌或枯草芽孢桿菌對(duì)血清免疫球蛋白無(wú)顯著影響（P ＞0.05）。

表5 三種添加劑對(duì)斷奶仔豬血清免疫球蛋白的影響g/L

3 討論

3.1 補(bǔ)充添加劑對(duì)斷奶仔豬生長(zhǎng)性能的影響 啤酒酵母含有大量的B 族維生素和礦物質(zhì)（Trevisi等，2016；Weedman 等，2011；Lemieux 等，2010），本研究表明， 飼糧中添加啤酒酵母菌可在一定程度上提高斷奶仔豬的采食量， 對(duì)平均日增重?zé)o明顯影響；枯草芽孢桿菌是一種革蘭氏陰性菌（Jorgensen 等，2016； 周盟等，2014；Giang 等，2010），通過(guò)消耗腸道的游離氧可促進(jìn)有益菌的生長(zhǎng)，其產(chǎn)生的有機(jī)酸可以降低腸道pH （Maneewan 等，2011），間接抑制致病菌的生長(zhǎng)（Giang 等，2012）。在本試驗(yàn)中， 飼糧中添加枯草芽孢桿菌對(duì)斷奶仔豬的生長(zhǎng)性能無(wú)顯著影響， 可能由于添加單一益生菌的作用效果并不穩(wěn)定，需要補(bǔ)充復(fù)合益生菌，才能更好的改善斷奶仔豬生長(zhǎng)性能（肖華，2013；辛娜等，2012；虞澤鵬等，2002）；蛋白酶作為一種綠色環(huán)保的飼料添加劑， 已在養(yǎng)豬生產(chǎn)中得到廣泛應(yīng)用。本試驗(yàn)中選用的堿性蛋白酶，其屬于絲氨酸蛋白酶的一類(lèi)， 具有催化水解蛋白質(zhì)肽鍵的能力，可以將大分子蛋白質(zhì)分解為蛋白胨、多肽及游離氨基酸（Miyazawa，1999）。飼用蛋白酶的添加對(duì)畜禽的生長(zhǎng)具有重要作用， 可以緩解幼齡動(dòng)物機(jī)體蛋白酶分泌量的不足， 減少幼齡動(dòng)物的過(guò)敏反應(yīng)（Adebiyi 和Olukosi，2015）。 本試驗(yàn)結(jié)果表明，日糧中添加堿性蛋白酶可以顯著改善斷奶仔豬生長(zhǎng)性能，此與Zuo 等（2015）的研究結(jié)果一致。本試驗(yàn)中， 添加蛋白酶對(duì)斷奶仔豬生長(zhǎng)性能的改善程度優(yōu)于枯草芽孢桿菌和啤酒酵母菌。

3.2 補(bǔ)充添加劑對(duì)斷奶仔豬血清生化指標(biāo)的影響 血清生化指標(biāo)是反映機(jī)體營(yíng)養(yǎng)代謝和機(jī)體免疫能力的重要指標(biāo)，可在一定程度上反映動(dòng)物的健康程度和生理狀態(tài)（劉輝等，2013）。 依據(jù)血清中TP 含量的變化， 可以判斷機(jī)體蛋白質(zhì)代謝的旺盛程度，同時(shí)可反映肝臟蛋白質(zhì)代謝及機(jī)體蛋白質(zhì)的沉積狀態(tài)。 另外，血清GLB 的含量主要反映了機(jī)體防御抗原的能力，其含量越高，顯示機(jī)體的免疫能力越強(qiáng)。 本試驗(yàn)結(jié)果顯示，飼糧中添加蛋白酶可顯著提高斷奶仔豬血清GLB 含量（P ＜0.05）， 表明蛋白酶的添加可以改善仔豬的機(jī)體免疫狀態(tài)。

血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶和尿素氮的水平可以反映機(jī)體氨基和氮素的代謝狀態(tài) （董曉麗等，2013）。谷丙轉(zhuǎn)氨酶是影響機(jī)體轉(zhuǎn)氨基作用的關(guān)鍵酶，而尿素氮的含量與機(jī)體蛋白質(zhì)的利用效率呈負(fù)相關(guān)。 本試驗(yàn)結(jié)果顯示，在斷奶仔豬飼糧中補(bǔ)充啤酒酵母菌、蛋白酶和枯草芽孢桿菌，均可以顯著提高血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶的水平（P ＜0.05），說(shuō)明三種添加劑均可以促進(jìn)仔豬肝臟蛋白質(zhì)代謝，提高仔豬對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的吸收。 另外，枯草芽孢桿菌組斷奶仔豬血清尿素氮水平顯著低于其余各組（P ＜0.05）， 表明飼糧中補(bǔ)充枯草芽孢桿菌可以提高仔豬的氮素利用效率。

血糖是動(dòng)物組織及細(xì)胞活動(dòng)的主要能量來(lái)源， 血糖的含量變化可以反映機(jī)體能量的攝入及代謝狀態(tài)， 具有重要的臨床和生產(chǎn)意義（石秋鋒等，2013）。 研究表明，在一定范圍內(nèi)的血糖升高，可以提升動(dòng)物對(duì)外界的免疫防御能力。 本試驗(yàn)檢測(cè)了三種添加劑對(duì)斷奶仔豬采食狀態(tài)下血糖水平的影響， 結(jié)果表明飼糧中補(bǔ)充蛋白酶可以一定程度上提高仔豬的血糖水平（P ＜0.05），這可能與蛋白酶組仔豬采食量最高， 能量攝入量較其余各組有所增加有關(guān)。

3.3 補(bǔ)充添加劑對(duì)斷奶仔豬血清免疫指標(biāo)的影響 血清免疫球蛋白是反映機(jī)體體液免疫能力的重要指標(biāo)，一般由IgM、IgG 和IgA 三類(lèi)球蛋白組成（石秋峰等，2013）。 其中，IgM 是機(jī)體抵御外界抗原初期產(chǎn)生的免疫球蛋白；IgA 主要是在非特異性免疫下發(fā)揮作用， 是黏膜免疫的重要組成部分；IgG是血清中含量較高的球蛋白，也是機(jī)體抵御和清除抗原最重要的免疫球蛋白。 本試驗(yàn)的結(jié)果表明，飼糧中補(bǔ)充蛋白酶可以顯著提高斷奶仔豬的血清IgG 水平（P ＜0.05），改善仔豬的免疫功能。

4 結(jié)論

飼糧中添加適宜劑量的蛋白酶可以改善斷奶仔豬生長(zhǎng)性能， 其作用效果優(yōu)于啤酒酵母菌和枯草芽孢桿菌； 添加蛋白酶可顯著提高斷奶仔豬血清葡萄糖、球蛋白和IgG 的含量；飼糧中分別添加蛋白酶、啤酒酵母菌或枯草芽孢桿菌，均可顯著提高仔豬的血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶活性； 飼糧中添加枯草芽孢桿菌可顯著降低血清尿素氮含量。