龍家寰 秦立新 陳明貴 廖國會 段婷婷

【摘? ?要】 構(gòu)建QuEChERS-氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用檢測辣椒當(dāng)中33種農(nóng)藥殘留的快速檢測方式。超聲提取乙腈，N-正丙基乙二胺（primary secondary amine，PSA）與C18凈化，通過測定HP-5MS色譜柱的分離。在濃度測定范圍0.4μg～20.0μg/mL內(nèi)，具有良好的線性關(guān)系，r>0.995;濃度添加是25、80、150μg/kg的時候，平均的回收率在74.31%～119.72%之間，相對的標(biāo)準(zhǔn)偏差是2.0%～15.3%（n=6），檢出限是0.02～4.6μg/kg，定量的下限是0.07～15.3μg/kg。該方法可以檢測辣椒當(dāng)中的農(nóng)藥殘留。

【關(guān)鍵詞】 辣椒;農(nóng)藥殘留;氣相色譜質(zhì)譜;QuEChERS

中圖分類號：S-3? ? ? ? ? ? ? ?文獻(xiàn)識別碼：A? ? ? ? ? ? ? ?文章編號：2096-1073（2020）01-0079-81

由于栽培方式改變，設(shè)施農(nóng)業(yè)越來越受人們青睞，但是在設(shè)施種植時密閉的時間較長，通風(fēng)少，沒有接受陽光直射，導(dǎo)致棚內(nèi)溫度和濕度都大于大棚外，適宜病蟲害的發(fā)生，所以大棚內(nèi)病蟲害的發(fā)生和危害比露地嚴(yán)重。例如大棚里蚜蟲的發(fā)生頻繁和時間均長于大棚外，并且大棚內(nèi)病蟲害的種類也比露地嚴(yán)重。由于人們認(rèn)識的偏差，為了達(dá)到迅速殺死防治病蟲害的目的，在農(nóng)藥的使用上經(jīng)常沒有按說明書指導(dǎo)，隨意加大用藥量，隨意混用農(nóng)藥，不考慮安全間隔，盲目用藥。有時兩類容易毒性疊加的農(nóng)藥也隨意混用，不間隔使用，從而大大增加了大棚蔬菜的農(nóng)藥殘留量。又因?yàn)榇笈飪?nèi)的農(nóng)藥消解速度比露地慢，這樣就直接導(dǎo)致大棚內(nèi)蔬菜農(nóng)藥的殘留量高，人們發(fā)生食物中毒的情況比露地蔬菜嚴(yán)重。

1? 材料及方法

1.1? 試劑和材料

（色譜純）乙腈：美國Fisher公司;（分析純）無水硫酸鈉、氯化鈉：國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司;（PSA：40μm～60μm，色譜純）N-正丙基乙二胺、十八烷基鍵合相硅膠（C18，色譜純）：博納艾杰爾公司。農(nóng)藥的標(biāo)準(zhǔn)品純度為99.2%～99.5%：德國Dr.Ehrenstorfer公司。

分別精準(zhǔn)稱取10mg標(biāo)準(zhǔn)品置于50mL容量瓶內(nèi)，運(yùn)用乙腈溶解之后配制成200mg/L儲備液，置于-18℃的冰箱內(nèi)進(jìn)行避光形式的保存。

1.2? 設(shè)備與儀器

GC-MS（7890A-5975C）（Agilent）;19091S-433色譜柱（30m×250μm×0.25μm）（Agilent）;FW100型微型組織粉碎機(jī)（天津泰斯特）;TG16臺式高速離心機(jī)（長沙邁佳）TG16-Ⅱ臺式高速離心機(jī)（湖南平凡）;CK2000型高通量組織研磨器（Thmorgan）SK-1漩渦混合器（江蘇中大）;RE-52AA旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器（上海亞榮生化儀器廠）;CP213電子天平（0.001g～200g）（Ohaus）;BSA224S-CW電子天平（0.1mg～220g）（Sartorius）。

1.3? 前處理?xiàng)l件

精準(zhǔn)稱出10g切碎且均勻混合的辣椒（無農(nóng)藥殘留的陰性樣品）放置于50mL具塞離心管內(nèi)，在加入20mL乙腈提取液，通過15分鐘超聲輔助進(jìn)行提取，添加6g的氯化鈉渦旋1分鐘，于6000r/分鐘離心5分鐘，移液管精準(zhǔn)的移取上清液10mL放置于梨形瓶當(dāng)中，42℃的水浴減壓將溶劑脫除，1mL的乙腈溶解類濃縮物，再轉(zhuǎn)入到盛有100mg PSA、十八烷基鍵合相硅膠的離心管（10mL），渦旋1分鐘，通過0.45μm的濾膜，以及GC-MS的檢測。

1.4? 儀器的條件

色譜的工作條件：進(jìn)樣口的溫度為280℃;進(jìn)樣的模式是不分流進(jìn)樣;進(jìn)樣量為1μL;載氣為高純度的氦氣，2mL/m分鐘的流速，2.0mL/min的柱流量;初始的柱箱升溫程序是60℃，之后以每分鐘8℃升溫到120℃，維持2分鐘，再從每分鐘7℃升溫到180℃，保持2min，再以每分鐘5℃增加到290℃，維持5分鐘，總計(jì)47.07分鐘。質(zhì)譜的工作條件：150℃的四極桿;230℃的離子源;280℃的接口;采集的方式SIM（Selected Ions Monitoring：選擇離子監(jiān)控模式，每組分母、子離子;溶劑需要延遲3.5分鐘。

2? 結(jié)果與分析

2.1? 優(yōu)化儀器條件

使用一根色譜柱完全分開33種農(nóng)藥的保留時間，具有一定的難度。所以根據(jù)出峰的時間將這部分農(nóng)藥分為兩組進(jìn)行檢測，降低離子的串?dāng)_[1]?？疾椴煌倪M(jìn)樣口溫度，由250℃至300℃，算出在280℃的時候，各組分的氣化較為充分，響應(yīng)的最大，而且各類農(nóng)藥沒有進(jìn)行分解，因?yàn)檫M(jìn)樣口溫度選擇的是280℃。在1.0～2.1mL/min范圍之內(nèi)，基于分離度與檢測率，對載氣的流量進(jìn)行檢查。通過對比發(fā)現(xiàn)，載氣流量的選擇是每分鐘2.0mL。從而優(yōu)化程序升溫，將分離狀況與分析的周期當(dāng)作是考察的因素，最后明確程序的升溫模式是初始時候的60℃，之后以每分鐘8℃增加到120℃，維持2分鐘，再從每分鐘7℃升溫到180℃，保持2min，再以每分鐘5℃增加到290℃。這個時候，色譜的整體情形非常好?？瞻着c加標(biāo)的樣品分離狀況，如以下組圖。

2.2? 優(yōu)化試驗(yàn)方法

因?yàn)槌曁崛】梢暂^為容易的分離乙腈與水，在實(shí)際的檢測過程當(dāng)中，也反應(yīng)出其可以大幅度的減少源于基質(zhì)效應(yīng)形成的干擾，是一種很好的提取方式，因此本次研究選擇的是超聲提取;當(dāng)使用乙腈進(jìn)行提取的時候，有著較高的效率，可以充分滿足試驗(yàn)的相關(guān)要求。因此該研究將純乙腈當(dāng)做主要提取劑;制備出含有0.1mg/kg農(nóng)藥與1mg/kg加標(biāo)樣品，同時通過對比分析，本次研究選擇使用20mL乙腈，通過1次超聲提取[2]。

與此同時，為將基質(zhì)效應(yīng)干擾消除，本次研究做出標(biāo)準(zhǔn)曲線（基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)溶液）。根據(jù)上文中處理空白樣品的流程，將混合后的標(biāo)準(zhǔn)溶液加入，濃度配制范圍（0.4～20.0μg/mL）的標(biāo)準(zhǔn)溶液，通過上機(jī)測定，繪制出標(biāo)準(zhǔn)曲線，顯示出各農(nóng)藥濃度范圍與面積線性關(guān)系較好[3]。稱出18份空白樣品實(shí)施加標(biāo)回收類試驗(yàn)，分別依據(jù)25、80、150μg/kg逐次添加濃度，每個濃度具有6類平行樣品，最終結(jié)果表明，平均回收率與精密度，分別是74.31%～119.72%與2.0%～15.3%。

2.3? 實(shí)驗(yàn)樣品檢測

應(yīng)用本次研究所構(gòu)建的研究方法體系，檢測貴陽花溪1個綜合超市采購的4類辣椒（美人椒、紅辣椒、黃皮大尖椒、朝天椒）的樣品。檢測結(jié)果：檢出黃皮大尖椒含有甲霜靈、抗蚜威，紅辣椒有腐霉利，朝天椒有甲霜靈，都不高于國家的標(biāo)準(zhǔn)[4]。所以，現(xiàn)階段市場上銷售的辣椒農(nóng)藥殘留含量，處于相對安全狀態(tài)。

3? 結(jié)論

通過摸索QuEChERS-氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用檢測辣椒中33種農(nóng)藥殘留的方法，構(gòu)建出較為完整且可靠性強(qiáng)的分析方法。結(jié)果表明這一方法有著較高的靈敏度高與精確性，能夠有效彌補(bǔ)基質(zhì)效應(yīng)消除對于精確度所產(chǎn)生的影響，進(jìn)而能夠滿足檢測分析的相關(guān)要求。

參考文獻(xiàn)：

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（編輯：李曉琳）