李海寧，龔愛紅，郭珊珊，李 妍

宮頸上皮內瘤變(CIN)為宮頸癌前病變，及時和精準診治對其轉歸和預防發(fā)展為宮頸癌具有重要意義。只有盡早對CIN進行準確分級，且提出合理化管理，才能真正降低宮頸癌的發(fā)病率和病死率[1-3]。病理診斷是CIN診斷和分級的金標準[4]，有關研究報道表明在不同的病理學醫(yī)師之間高級別CIN診斷的可重復性較好，低級別CIN的可重復性較差[4-6]。因此，尋找一種鑒別不同級別宮頸鱗狀上皮內病變的方法用于分級診斷是十分重要的。目前，通過分子標志物檢測對腫瘤進行診斷是國內外的研究熱點，有關文獻報道[7-8]p16基因在宮頸病變進展過程中是一個較有價值的標志物。本研究旨在通過檢測p16蛋白表達以探討其在宮頸病變中的輔助診斷價值。

1 資料與方法

1.1 一般資料：收集2017年5月-2019年7月期間寧夏醫(yī)科大學總醫(yī)院經(jīng)宮頸活檢、宮頸錐切確診為SIL的宮頸上皮組織石蠟包埋標本共118例，其中CIN Ⅰ 43例，年齡19～69(45.67±11.22)歲；CIN Ⅱ 27例，年齡24～63(41.78±11.95)歲；CIN Ⅲ 48例，年齡21～65(45.29±11.30)歲。因婦科良性疾病行全子宮切除的正常宮頸組織25例，年齡45～69(53.68±6.61)歲。所有患者術前均未接受激素治療，經(jīng)兩位中級以上職稱病理學專科醫(yī)生確診。

1.2 試驗方法

1.2.1 p16蛋白檢測方法：采用免疫組化SP法檢測p16蛋白的表達。具體步驟：宮頸組織石蠟標本切片→65℃烘烤、脫蠟、水化→3%去離子水去除內源性過氧化物酶→檸檬酸高壓熱修復抗原→用兔抗人p16免疫組化試劑盒，SP法行免疫組化染色，嚴格按照試劑盒說明進行實驗操作。采用光學顯微鏡觀察不同宮頸病變組織中p16蛋白的表達情況，采用雙盲法對試驗結果進行半定量評分。PBS代替一抗作為陰性對照。該檢測由本院病理科免疫組織化學檢測實驗室完成。

1.2.2 試驗指標：p16蛋白在不同程度宮頸鱗狀上皮內病變宮頸組織中的表達情況。

2 結果

在不同子宮頸鱗狀上皮內病變宮頸組織中，p16蛋白陽性表達率明顯不同(χ2=110.758，P<0.05)。p16蛋白在正常宮頸組織中不表達，在CIN Ⅰ級中p16蛋白的表達率為13.95%(6/43)，CIN Ⅱ級為92.59%(25/27),CIN Ⅲ級為97.92%(47/48)，CIN Ⅱ和CIN Ⅲ組中p16蛋白陽性表達率明顯高于CIN I組和對照組(P<0.05)。由此可以看出，p16蛋白的陽性表達率隨著宮頸病變嚴重程度的增加而升高，見表1。

表1 不同宮頸病變組織中p16陽性、p16陰性表達[n(%)]

3 討論

宮頸上皮內瘤變是一組與宮頸浸潤癌密切相關的子宮頸病變，大部分CIN I級為自限性疾病，但高級別鱗狀上皮內病變(CIN Ⅱ和CIN Ⅲ)具有癌變潛能，早期篩查和診斷能夠預防其發(fā)展至宮頸癌[7-9]。眾所周知，癌變的機制是多種癌基因和抑癌基因參與的多因素、多階段過程[10-11]。p16是一種腫瘤抑制基因，可阻止細胞從G1期發(fā)展至S期而抑制細胞增殖。文獻報道[10]已發(fā)現(xiàn)p16在腫瘤中呈強陽性表達，F(xiàn)inegan等[12]研究認為p16常在宮頸鱗狀細胞癌組織中表達，在良性病變和低級別病變時陰性，p16可能是從低級別到高級別病變轉化的標志物。另有研究表明[13-14]，p16組織學檢測可增加宮頸病變病理學診斷的準確性，對指導宮頸病變的臨床診療具有重要意義。

本研究顯示，p16陽性表達率在不同宮頸組織分布不同，隨著宮頸病變嚴重程度的增加，p16蛋白陽性表達率逐漸升高，這與國內文獻報道一致[13,15]。在CIN Ⅲ和CIN Ⅱ組織中p16蛋白陽性表達率明顯高于CIN Ⅰ和正常宮頸組織，說明p16的異常表達對宮頸高級別鱗狀上皮內病變更敏感，是宮頸病變發(fā)生過程中的早期事件，通過檢測p16蛋白可提高診斷的敏感性和特異性，彌補宮頸病理診斷的不足。本研究還發(fā)現(xiàn)，高級別病變CIN Ⅱ～Ⅲ組中，仍有少部分患者宮頸組織中p16蛋白呈陰性表達，與宮頸高級別病變臨床表現(xiàn)不符合，宮頸組織活檢診斷為宮頸癌，可能和p16基因突變有關，因此筆者認為單純檢測p16蛋白并不能全部獲得滿意診斷，故要聯(lián)合其他相關檢查提高診斷的敏感性和特異性。