袁紹莉，徐寧寧

(徐州生物工程職業(yè)技術(shù)學(xué)院 生物工程系，江蘇 徐州 221006)

1 儀器與試藥

紫外分析儀(島津紫外分光光度儀UV-2450)，甲醇、石油醚、環(huán)己烷、醋酸乙酯、三氯化鐵、亞硝酸鈉、氫氧化鈉、硝酸鋁均為分析純，水為重蒸餾水；蘆丁(供含量測(cè)定用)購自中國藥品生物制品檢定所；杏香兔兒風(fēng)口服液及不含白術(shù)的陰性對(duì)照品由江蘇頤海藥業(yè)有限責(zé)任公司提供。

2 含量測(cè)定

2.1 方法學(xué)考察

2.1.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備

精密稱取105℃干燥至恒重的蘆丁對(duì)照品0.0101g，用甲醇溶解，定容至25mL，搖勻，配成濃度為0.404mg/mL的蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品溶液，作為儲(chǔ)備液備用。

精密量取對(duì)照品溶液0mL、0.5mL、1.0mL、1.5mL、2.0mL、2.5mL、3.0mL，分別置25mL量瓶中，各加水至6mL，精密加入5%亞硝酸鈉溶液1 mL，搖勻，靜置6 min，精密加入10%硝酸鋁1 mL，搖勻，靜置6 min，精密加入4%氫氧化鈉溶液10 mL，再加水至刻度，搖勻，放置15min，照分光光度法(《中國藥典》2015年版四部0401)，在500nm的波長處測(cè)定吸收度，以吸收度為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線?；貧w方程為A=0.0024+0.011c，r=0.9998.表明蘆丁濃度在8.56-51.36μg/mL 之間與吸收值兩者線性關(guān)系良好。在此濃度范圍內(nèi)，所測(cè)得的吸收度值與蘆丁的濃度成正比。

表1 標(biāo)準(zhǔn)曲線測(cè)定值

2.1.2 中間精密度試驗(yàn)

精密量取供試品溶液，不同分析人員，分別于五日內(nèi)在不同儀器上對(duì)樣品進(jìn)行含量測(cè)定，考察中間精密度。結(jié)果見表2。

表2 中間精密度試驗(yàn)

結(jié)果表明：中間精密度良好，符合規(guī)定。

2.1.3 重復(fù)性試驗(yàn)

精密量取供試品溶液平行6份，每份 1.0mL，各精密加甲醇9mL ，搖勻，離心30min，取上清液1.0 mL 于25 mL容量瓶中，加水至6mL精密加入5%亞硝酸鈉溶液1 mL，搖勻，靜置6 min，精密加入10%硝酸鋁1 mL，搖勻，靜置6 min，精密加入4%氫氧化鈉溶液10 mL，再加水至刻度，搖勻，放置15min，照分光光度法(《中國藥典》2015年版四部0401)，在500nm的波長處測(cè)定吸收度，結(jié)果見表3，結(jié)果表明該測(cè)定方法的重復(fù)性良好。

表3 重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果 批號(hào)：20190301

2.1.4 加樣回收率試驗(yàn)

采用加樣回收測(cè)定方法，取樣品(批號(hào)：20190301)，精密量取供試品溶液6份，每份各1mL，測(cè)定含量，分別加入蘆丁對(duì)照品適量。精密加甲醇9 mL ，搖勻，離心30min，取上清液1.0 mL 于25 mL容量瓶中，加水至6mL精密加入5%亞硝酸鈉溶液1 mL，搖勻，靜置6 min，精密加入10%硝酸鋁1 mL，搖勻，靜置6 min，精密加入4%氫氧化鈉溶液10 mL，再加水至刻度，搖勻，放置15min，照分光光度法(0401)，在500nm的波長處測(cè)定吸收度，結(jié)果見表4。平均回收率為98.18%，結(jié)果表明回收率高，方法可行。

結(jié)果見表4。

表4 加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果 批號(hào)：20190301

2.1.5 穩(wěn)定性試驗(yàn)

將樣品溶液在陰晾避光處放置，分別于0，10，15，30，45，60min時(shí)在 500nm波長測(cè)定吸收度，結(jié)果見表4，表明樣品溶液顯色隨時(shí)間有所變化，會(huì)逐漸減弱，但至少在1小時(shí)內(nèi)穩(wěn)定。

表5 穩(wěn)定性試驗(yàn) 批號(hào):20190301

2.2 樣品含量測(cè)定

依據(jù)上述建立的測(cè)定方法，對(duì)十批成品進(jìn)行了含量測(cè)定，結(jié)果見表5。

表6 十批中試樣品含量測(cè)定

表6(續(xù))

3 分析與總結(jié)

根據(jù)部頒標(biāo)準(zhǔn)《中藥成方制劑》第十四冊(cè)(WS3-B-2751-97)收載的品種復(fù)方杏香兔耳風(fēng)顆粒的制備工藝特點(diǎn)，復(fù)方杏香兔耳風(fēng)口服液制備工藝穩(wěn)定。但原標(biāo)準(zhǔn)中并沒有對(duì)方中主藥杏香兔耳風(fēng)進(jìn)行含量測(cè)定。查閱文獻(xiàn)，杏香兔耳風(fēng)中主要成分為總黃酮，可用蘆丁為對(duì)照品對(duì)其進(jìn)行測(cè)定。經(jīng)過對(duì)實(shí)際十批中試樣品的測(cè)定，確定方法確實(shí)可行，總黃酮的最高含量7.466mg，最低含量為4.590mg，并根據(jù)市售復(fù)方杏香兔耳風(fēng)顆粒含量測(cè)定，確定總黃酮最低含量應(yīng)不4.0mg/mL，符合理論和實(shí)際含量，數(shù)據(jù)合理、可信。