張松亮，于天杰

鼻竇炎口服液是某院院內(nèi)制劑，批準(zhǔn)文號(hào)：濟(jì)制字（2016）B407042，處方由辛夷、荊芥、薄荷、桔梗、柴胡、蒼耳子、白芷、川芎、黃芩、梔子、茯苓、川木通、黃芪、龍膽草組成。方中蒼耳子、辛夷、白芷、薄荷等辛散風(fēng)邪，芳香通竅；柴胡疏肝利膽；龍膽草、梔子苦寒瀉肝膽實(shí)火，兼可燥濕；木通、茯苓可化濕滲濕；桔梗載藥上行，宣肺利氣；黃芩甘溫，能補(bǔ)肺脾之氣。諸藥合用，共奏辛散風(fēng)邪，通利鼻竅之效。此制劑收載于《中國(guó)藥典》2015年版，其標(biāo)準(zhǔn)提取工藝［1］為傳統(tǒng)的水煎煮，澄清工藝為濃縮后靜置，取上清液。中藥材水煎煮會(huì)帶來大量的多糖、植物蛋白等溶解度較低的大分子雜質(zhì)，濃縮靜置后可析出，其中一部分雜質(zhì)會(huì)形成可除去沉淀，而絕大部分雜質(zhì)在藥液中處于不穩(wěn)定的懸浮狀態(tài)，沉降的速度非常緩慢，在有限的生產(chǎn)周期內(nèi)靜置仍無法全部去除，生產(chǎn)出的成品在放置一定的時(shí)間后又會(huì)產(chǎn)生新的沉淀，影響口服液的外觀。因此，該課題旨在尋找一種新的方法來加速去除上述不穩(wěn)定懸浮雜質(zhì)，從而改善口服液的外觀質(zhì)量。參考相關(guān)文獻(xiàn)資料［2-5］，筆者在不改變標(biāo)準(zhǔn)生產(chǎn)工藝［1］的前提下，從濃縮液密度、冷沉?xí)r間、pH值、離心次數(shù)四個(gè)因素入手，以黃芩苷含量、沉渣量為考察指標(biāo)，通過均勻設(shè)計(jì)法來優(yōu)選最佳的鼻竇炎口服液的澄清工藝。

1 儀器與試劑

高效液相色譜儀 （日本島津公司）；SPDM20A二極管陣列檢測(cè)器：LC Solution色譜工作站 （日本島津公司）；AUW120D型分析天平（十萬分之一，日本島津公司）；AS3120A型超聲波清洗器（天津奧特賽恩斯儀器有限公司）；HC1016型離心機(jī) （安徽中科中佳科學(xué)儀器有限公司）；GQ-105型管式高速離心機(jī)（轉(zhuǎn)速17000 r/min，遼陽真空技術(shù)有限公司）。

黃芩苷（批號(hào)140213-140515，含量91.70%）對(duì)照品，中國(guó)食品藥品檢定研究院；黃芩、辛夷、荊芥等中藥材購(gòu)于河南省青山藥業(yè)，經(jīng)該院藥檢室按照《中國(guó)藥典》2015年版質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)鑒定合格。甲醇為色譜純，水為娃哈哈純凈水，其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1樣品制備及指標(biāo)測(cè)定方法

2.1.1 鼻竇炎口服液制備 以每份50 L的批量，按處方比例稱取藥材8份，以標(biāo)準(zhǔn)工藝提取藥材，分別濃縮至相應(yīng)的密度，按均勻設(shè)計(jì)表的配組調(diào)至相應(yīng)pH值，在溫度1℃下冷沉至相應(yīng)時(shí)間，取上清液，沉淀另器收集備用。上清液以相應(yīng)的離心次數(shù)離心，收集沉渣備用，離心后藥液加入純化水定容至50 L。

2.1.2 沉渣量計(jì)算 2.1.1項(xiàng)下每份沉淀與離心沉渣分別混合均勻，稱重，各取200 g，真空干燥后，分別稱重，計(jì)算出整體沉渣的重量除以定容體積，即得每毫升沉渣量。

2.1.3 沉淀體積分?jǐn)?shù)計(jì)算 2.1.1項(xiàng)下定容后藥液，各取1000 ml加入5只細(xì)長(zhǎng)的圓柱形玻璃瓶中，封口，滅菌，室溫下放置3個(gè)月，測(cè)量沉淀高度，根據(jù)高度計(jì)算沉淀量所占總藥液的體積分?jǐn)?shù)。

2.2黃芩苷含量測(cè)定［6，7］

2.2.1 色譜條件［1］色譜柱為WondasilTM C18柱（150 mm×4.6 mm，5 μm）；以甲醇-水-磷酸（47∶53∶0.2）為流動(dòng)相；流速 1.0 ml/min；檢測(cè)波長(zhǎng)：278 nm；柱溫：室溫；進(jìn)樣量 10 μl。

2.2.2 供試品溶液的制備 精密量取2.1.1項(xiàng)下定溶后藥液1 ml，置50 ml量瓶中，加水至刻度，搖勻，離心，取上清液，微孔濾膜（0.45 μm）濾過，即得。

2.2.3 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取黃芩苷對(duì)照品適量，加甲醇制成每1 ml含75 μg的溶液。

2.2.4 陰性干擾試驗(yàn) 按處方比例稱取缺黃芩的其他藥材，按2.1.1制備陰性樣品。取上述對(duì)照品、供試品和陰性樣品溶液，按上述色譜條件測(cè)定，結(jié)果供試品與對(duì)照品在同一保留時(shí)間處有目標(biāo)峰，陰性無干擾。

2.2.5 線性關(guān)系的考察 精密吸取對(duì)照品溶液2、6、10、14、18、20、24 μl， 按上述色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，以進(jìn)樣量（X）為橫坐標(biāo)，色譜峰面積（Y）為縱坐標(biāo)，擬合標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程為：Y=1500235.65X+56248.70，r=0.9998?？梢姳砻鼽S芩苷進(jìn)樣量在0.15～1.80μg范圍內(nèi)，其線性關(guān)系良好。

2.2.6 精密度試驗(yàn) 取黃芩苷對(duì)照品溶液，按上述色譜條件重復(fù)進(jìn)樣6次，計(jì)算峰面積的RSD為0.89%（n=6），表明儀器精密度良好。

2.2.7 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一供試品溶液，按上述色譜條件分別于 0、2、4、8、12、18、24 h 進(jìn)樣測(cè)定。記錄峰面積，結(jié)果RSD為1.02%（n=6），表明樣品在24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.2.8 重復(fù)性試驗(yàn) 平行取同一批鼻竇炎口服液（批號(hào)180406），按2.2.2項(xiàng)分別制備6份供試品溶液，按上述色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積，計(jì)算含量 分 別 為 7.03、6.98、6.92、7.06、6.93、7.04 mg/ml，RSD=0.85%（n=6），表明該方法重現(xiàn)性良好。

2.2.9 回收率試驗(yàn) 精密稱取6份已知黃芩苷含量的鼻竇炎口服液樣品1 ml，分別精密加入黃芩苷對(duì)照品貯備液各0.5 ml，按2.2.2項(xiàng)方法制備供試品溶液，依照上述色譜條件測(cè)定黃芩苷的含量，計(jì)算回收率分別為98.0%、99.8%、98.2%、100.2%、98.4%、98.1%，平均回收率=98.8%，RSD=0.97%（n=6），表明方法準(zhǔn)確度良好。

2.3均勻設(shè)計(jì)試驗(yàn)方法與結(jié)果在預(yù)試驗(yàn)基礎(chǔ)上，以濃縮液相對(duì)密度、冷沉?xí)r間、pH值、離心次數(shù)為因素，前三個(gè)因素設(shè)8個(gè)水平，后一個(gè)因素設(shè)4個(gè)水平，見表 1。 以均勻設(shè)計(jì)表 U8（83×4）安排試驗(yàn)［8］，以黃芩苷含量、沉渣回收量作為考察指標(biāo)，試驗(yàn)結(jié)果見表2。

表1 因素水平表

表2 均勻設(shè)計(jì)表和實(shí)驗(yàn)結(jié)果

采用軟件SPSS 22.0進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，對(duì)黃芩苷含量、沉渣量在α=0.05水平分別進(jìn)行多元線性逐步回歸，剔除影響不顯著的變量，分別得到回歸方程 （1）Y1=2.816X3-10.051，R=0.925，F(xiàn)=35.719，P＜0.01；（2）Y2=756.111X1+0.999X2-766.483，R=0.986，F(xiàn)=90.156，P＜0.01。

方程（1）（2）的擬合優(yōu)度良好且 P 值均＜0.01，說明回歸方程具有極顯著性。從方程（1）可知，黃芩苷含量與pH值呈正相關(guān)，其他因素對(duì)其影響不顯著，因此被剔除。從方程（2）可知，沉渣回收量與相對(duì)密度和冷沉?xí)r間呈正相關(guān)，離心次數(shù)和pH值對(duì)其影響不顯著。為了解相對(duì)密度和冷沉?xí)r間對(duì)沉渣回收量的作用大小，對(duì)其系數(shù)進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化處理，相對(duì)密度和冷沉?xí)r間標(biāo)準(zhǔn)系數(shù)分別為0.758，0.451。

可知，影響沉渣回收量的因素作用大小順序?yàn)閄1＞X2，即相對(duì)密度＞冷沉?xí)r間，綜合兩指標(biāo)結(jié)果并結(jié)合實(shí)際生產(chǎn)情況，選擇工藝為相對(duì)密度1.18，pH值6.1，冷沉72 h，離心機(jī)離心2次。

2.4最優(yōu)工藝驗(yàn)證試驗(yàn)對(duì)連續(xù)3批鼻竇炎口服液按最優(yōu)澄清工藝處理，進(jìn)行3次驗(yàn)證試驗(yàn)，結(jié)果見表3，可見結(jié)果數(shù)據(jù)要優(yōu)于以上各試驗(yàn)號(hào)，表明通過均勻設(shè)計(jì)法優(yōu)選的澄清工藝穩(wěn)定可行，可用于實(shí)際生產(chǎn)。

表3 工藝驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)果

3 討論

3.1評(píng)價(jià)指標(biāo)的選擇沉渣的量與澄清度成負(fù)相關(guān)，沉渣量越多，口服液就越澄清。由于澄清度無法定量，就以沉渣的量作為指標(biāo)來反應(yīng)澄清工藝的優(yōu)劣。而沉淀的體積分?jǐn)?shù)是為了更直觀地反映口服液的澄清程度，且與沉渣的量成正比例，因此只將其作為反應(yīng)澄清程度的指標(biāo)，而不作為工藝優(yōu)選中的定量指標(biāo)。在試驗(yàn)中為了防止工藝因素對(duì)黃芩苷產(chǎn)生影響，因此也將黃芩苷的含量作為指標(biāo)之一，來控制鼻竇炎口服液的質(zhì)量。

3.2離心次數(shù)的選擇GQ-105型管式離心機(jī)可用于分離各種難于分離的懸浮液，其容積僅有6 L，需要常停機(jī)清除沉渣并再次工作，實(shí)際操作中以藥液全部經(jīng)過一次稱為離心一次。在實(shí)際生產(chǎn)中發(fā)現(xiàn)離心機(jī)分離出沉渣的量是以容積為前提的（離心機(jī)確定后轉(zhuǎn)速等因素是不變的），每離心一次分離出的量并不呈線性，而是階梯狀的，這可能是在線性回歸方程中影響不顯著的原因之一。以本課題中鼻竇炎口服液50 L批量為例，實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)離心3次可將沉渣全部分離出來，以3次沉渣總量為100%，第1次可分離出總量的95%，第2次可分離出剩余總量5%中的99%，而第3次分離出的沉渣量可忽略不計(jì)，因此文中選擇離心2次。實(shí)際生產(chǎn)中可以按批量的倍數(shù)選擇離心次數(shù)，但具體次數(shù)應(yīng)按實(shí)際效果來確定。

3.3pH值的選擇pH值水平根據(jù)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)［1］定在4.5～6.8之間。黃芩苷水中溶解度很低，可隨著pH增大而增大［9］。文中試驗(yàn)數(shù)據(jù)也反應(yīng)了這個(gè)規(guī)律，但在單因素分析中發(fā)現(xiàn)pH＞6.1之后，黃芩苷含量不再增大，原因是黃芩苷已充分溶解完畢，因此從節(jié)省pH調(diào)節(jié)劑考慮，將pH定為6.1。pH值與去除懸浮雜質(zhì)并不相關(guān)，因考慮到冷沉?xí)r會(huì)造成黃芩苷的損失，因此將pH值也算作一個(gè)因素來考察。

3.4其他因素的選擇由經(jīng)驗(yàn)可知，鼻竇炎口服液濃縮之后相對(duì)密度越高，溶解度越低的物質(zhì)越易析出，而降低溫度可加速不溶物的析出速度。但是當(dāng)密度＞1.18時(shí)，低溫下藥液過于黏稠而不利于不溶物的沉降，且離心機(jī)也不易通過，因此將濃縮液相對(duì)密度定為1.18。

傳統(tǒng)工藝制備的鼻竇炎口服液放置后往往會(huì)產(chǎn)生大量的沉淀，占據(jù)體積分?jǐn)?shù)30%以上，極大的影響口服液的外觀和質(zhì)量。經(jīng)過大量的生產(chǎn)實(shí)踐，筆者綜合了常用的除沉淀方法，通過均勻設(shè)計(jì)試驗(yàn)選擇最佳搭配，將沉淀占有體積分?jǐn)?shù)降至1%左右，且搖之即散，極大地提升了鼻竇炎口服液的外觀，此方法值得在鼻竇炎口服液實(shí)際生產(chǎn)中加以應(yīng)用和推廣。