李 玲，趙 猛，王秋實

（江蘇省連云港市食品藥品檢驗檢測中心，江蘇 連云港 222006）

五味子糖漿處方收載于2015 年版《中國藥典（一部）》[1]，由五味子單味藥材經(jīng)加工并添加防腐劑及香精等輔料制成。五味子醇甲為其中主要活性成分[2]，苯甲酸鈉為其中的防腐劑。過量攝入防腐劑對人體有一定的毒性，在某些國家已限制或禁止使用[3]。本研究中參考文獻(xiàn)[4-5]，建立高效液相色譜法同時對五味子糖漿中的五味子醇甲和苯甲酸鈉進(jìn)行含量測定，為提高制劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供參考。現(xiàn)報道如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

e2695 型高效液相色譜儀，包括2998 二極管陣列檢測器、Empower 色譜工作站（美國Waters 公司）；BP211D 型十萬分之一電子分析天平（德國Sartorius 公司）；Seven Multi 型酸度計（瑞士Mettler Toledo 公司）；KH-700DE 型數(shù)控超聲波清洗器（昆山禾創(chuàng)超聲儀器有限公司）。

1.2 試藥

五味子糖漿（廣西邦琪藥業(yè)集團(tuán)有限公司，批號為171010；太極集團(tuán)四川南充制藥有限公司，批號為2017006；三門峽廣宇生物制藥有限公司，批號為170901；上海海虹實業(yè)集團(tuán)巢湖今辰藥業(yè)有限公司，批號為180506，180915）；五味子醇甲對照品（批號為110857-201815，含量99.7%），苯甲酸鈉對照品（批號為100433-201702，含量99.7%），均購自中國食品藥品檢定研究院；甲醇為色譜純，其余試劑均為分析純，水為超純水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：Phenomenex Gemini C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相：1%三乙胺溶液（用磷酸調(diào)pH 至3.0，A）-甲醇（B），梯度洗脫（0 ～10 min 時55%A，10 ～12 min 時55%A→40%，12 ～35 min 時40%A）；流速：1.0 mL / min；檢測波長：250 nm；柱溫：30 ℃；進(jìn)樣量：10 μL。

2.2 溶液制備

分別稱取待測成分對照品各適量，精密稱定，置同一100 mL 容量瓶中，加甲醇超聲（功率250 W，頻率40 kHz，下同）處理，放冷至室溫，加甲醇定容，搖勻，即得五味子醇甲和苯甲酸鈉質(zhì)量濃度分別為0.196 2 mg/mL 和1.190 0 mg/mL 的混合對照品貯備液；精密量取5 mL，置25 mL 容量瓶中，加甲醇定容，搖勻，即得混合對照品溶液。精密量取樣品5 mL，置25 mL 容量瓶中，加甲醇20 mL，超聲處理20 min，放冷至室溫，加甲醇定容，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得供試品溶液。按處方和工藝制備缺五味子和苯甲酸鈉的陰性樣品，依法制成陰性對照品溶液。

圖1 高效液相色譜圖

2.3 方法學(xué)考察

系統(tǒng)適用性試驗：取混合對照品溶液、供試品溶液各適量，按擬訂色譜條件進(jìn)樣測定，記錄色譜圖，見圖1。理論板數(shù)按五味子醇甲峰和苯甲酸鈉峰計均不低于3 000；分離度均大于1.5，基線分離良好。

專屬性試驗：取混合對照品溶液、陰性對照品溶液各適量，按擬訂色譜條件進(jìn)樣測定，記錄色譜圖，見圖1。陰性對照品溶液在與混合對照品溶液相同保留時間處無干擾峰，表明方法專屬性良好。

線性關(guān)系考察：精密吸取混合對照品貯備液1，2，5，10，15 mL，分別置25 mL 容量瓶中，加甲醇定容，搖勻，即得系列混合對照品溶液；精密吸取10 μL，按擬訂色譜條件進(jìn)樣測定，記錄峰面積。以峰面積（Y）為縱坐標(biāo)、待測成分質(zhì)量濃度（X，μg/mL）為橫坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得五味子醇甲和苯甲酸鈉回歸方程分別為Y1=22 157X1-16 685（r1=0.999 9）和Y2=3 713X2-14 993（r2=0.999 9）。結(jié)果表明，五味子醇甲和苯甲酸鈉質(zhì)量濃度分別在7.85 ～117.70μg/mL 和47.58 ～713.80μg/mL范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好。

精密度試驗：取同一混合對照品溶液適量，按擬訂色譜條件連續(xù)進(jìn)樣測定6 次，記錄峰面積。結(jié)果五味子醇甲和苯甲酸鈉峰面積的RSD分別為0.48% 和0.26%（n=6），表明儀器精密度良好。

穩(wěn)定性試驗：取同一供試品溶液（批號為180915）適量，分別于室溫下放置0，2，6，12，18 h 時按擬訂色譜條件進(jìn)樣測定，記錄峰面積。結(jié)果五味子醇甲和苯甲酸鈉峰面積的RSD分別為1.45%和0.78%（n=5），表明供試品溶液在室溫放置18 h 內(nèi)基本穩(wěn)定。

重復(fù)性試驗：精密稱取樣品（批號為180915）6 份，依法制備供試品溶液，按擬訂色譜條件進(jìn)樣測定，記錄峰面積并計算含量。結(jié)果五味子醇甲和苯甲酸鈉含量的RSD分別為0.56%和0.84%（n=6），表明方法重復(fù)性良好。

加樣回收試驗：取已知含量的樣品（批號為180915）5 mL，共6 份，分別加入低、中、高質(zhì)量濃度的混合對照品貯備液，依法制備供試品溶液，再按擬訂色譜條件進(jìn)樣測定，記錄峰面積并計算回收率。結(jié)果見表1。

表1 加樣回收試驗結(jié)果（n=9）

2.4 樣品含量測定

取樣品各適量，分別依法制備供試品溶液，按擬訂色譜條件進(jìn)樣測定，平行測定3 次，記錄峰面積并計算樣品含量。結(jié)果見表2。

表2 樣品含量測定結(jié)果（mg/mL）

3 討論

對五味子醇甲和苯甲酸鈉進(jìn)行全波長掃描，結(jié)果顯示，五味子醇甲在250 nm 波長處均有最大吸收，苯甲酸鈉在229 nm 和274 nm 波長處有最大吸收，苯甲酸鈉在274 nm 波長處的吸收值與250 nm 相近，故選擇250 nm作為2 種成分的共同檢測波長。

參考藥典方法處理樣品，采用甲醇作為提取溶劑，同時五味子醇甲和苯甲酸鈉均溶于甲醇，結(jié)果能提取完全；另外，對比超聲時間10，20，30 min 對提取效率的影響，發(fā)現(xiàn)超聲20 min 后有效成分即能溶出。

國家標(biāo)準(zhǔn)相關(guān)規(guī)定明確了防腐劑在糖漿劑中的使用限量[6]，但并未規(guī)定含量測定方法。由于防腐劑苯甲酸鈉有一定毒性[3]，目前有些品種口服液已將其作為檢查項加入質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中，因此同時檢測五味子糖漿中的活性成分及防腐劑的含量，不僅簡化了檢驗過程，而且還可為提高糖漿劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供參考。