梁文娟 郗建宇 尹 迪 孫春吉 王洪玲

（1.云南農(nóng)業(yè)大學(xué)食品科學(xué)技術(shù)學(xué)院， 云南 昆明650201； 2.江西中醫(yī)藥大學(xué)中藥資源與民族藥研究中心， 江西 南昌330004）

芍藥科世界上僅一屬［1-2］，芍藥屬植物大多可供藥用，其中的常用藥材白芍、赤芍和牡丹皮等收錄于歷代本草和歷版《中國藥典》；對(duì)芍藥屬植物的化學(xué)成分研究主要集中在芍藥苷及其同系物等單萜苷類物質(zhì)，對(duì)其藥理活性的研究主要圍繞中樞神經(jīng)和心血管系統(tǒng)保護(hù)、抗炎保肝、抗腫瘤和止痛等作用［3-5］。為豐富對(duì)芍藥屬植物化學(xué)成分和藥用資源的認(rèn)識(shí)，本研究對(duì)采自云南巧家的美麗芍藥的根進(jìn)行化學(xué)成分研究。美麗芍藥Paeonia maireiLevl.為芍藥科芍藥屬多年生草本植物，分布于云南東北部、貴州西部、四川中南部、甘肅和陜西南部，模式標(biāo)本采自云南巧家；美麗芍藥的根可藥用，具有行瘀活血、止痛之效［6］，在云南當(dāng)?shù)赜幸欢ǖ挠盟幓A(chǔ)。目前關(guān)于美麗芍藥的化學(xué)成分和藥理活性研究較少［7-8］。迄今為止，已知成分主要包括生物堿、萜、甾體、蒽醌類的19個(gè)化合物［7-8］。本實(shí)驗(yàn)對(duì)美麗芍藥干燥根的70%乙醇部位進(jìn)行化學(xué)成分研究，共分離鑒定出9個(gè)酚酸類化合物，其中化合物1～8 為首次從該植物中分離得到。

1 材料

島津LC-MS-IT-TOF 質(zhì)譜儀（日本島津公司）；Waters AutoSpec Premier P776 離子井飛行時(shí)間質(zhì)譜儀、高效液相色譜（美國Waters 公司）；核磁共振儀Brucker DRX-500（德國布魯克公司）；薄層色譜硅膠、柱層析硅膠（200～300目，煙臺(tái)江友硅膠開發(fā)有限公司）；柱層析葡聚糖凝膠LH-20（美國Pharmacia 公司）；Milli-QAdvantageA10 超純水系統(tǒng)（美國Millipore 公司）。分析純甲醇、乙醇、二氯甲烷、丙酮（天津化學(xué)試劑有限公司）；顯色劑為自制H2SO4（10%） 乙醇溶液。

樣品于2016 年9 月采自云南巧家，由中國科學(xué)院昆明植物研究所張書東副研究員鑒定為美麗芍藥Paeonia maireiLevl.，標(biāo)本存放于云南農(nóng)業(yè)大學(xué)食品學(xué)院（20160926）。

2 提取與分離

美麗芍藥干燥根3.5 kg，經(jīng)粉碎后用70% 乙醇，回流提取3 次，每次1 h，提取液經(jīng)減壓濃縮至小體積，將濃縮液過D101 大孔樹脂，分別用水、30%乙醇、50%乙醇、70%乙醇洗脫得水部位（Fr.1：210 g）、30%乙醇部位（Fr.2：72 g）、50%乙醇部位（Fr.3：32 g）、70%乙醇部位（Fr.4：23 g）。Fr.4 經(jīng)硅膠柱色譜，以二氯甲烷-丙酮梯度洗脫，得 5個(gè)部分 Fr.4-1～ Fr.4-5。Fr.4-2 經(jīng)Sephadex LH-20（甲醇） 洗脫，再經(jīng)反復(fù)硅膠柱層析和HPLC 等方法分離純化得化合物1（5 mg）、2（4 mg）、3（6 mg）、9（5 mg）。Fr.4-3 經(jīng)反復(fù)硅膠柱色譜和Sephadex LH-20 凝膠柱層析，得化合物5（4 mg）、7（4 mg）、8（5 mg）。Fr.4-5 通過硅膠柱層析，經(jīng)甲醇-二氯甲烷體系梯度洗脫（10∶90、20∶ 80、30∶ 70、50∶ 50、100∶ 0），再 經(jīng)Sephadex LH-20 多次純化，得化合物4（6 mg）、6（5 mg）。

3 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1：白色無定型粉末，C9H8O3，ESI-MSm／z：165.2［M＋H］＋。1H-NMR（CD3OD，500 MHz）δ：7.59（1H，d，J＝15.9 Hz，H-2），7.44（2H，dd，J＝8.6，1.9 Hz，H-5，9），6.80（2H，dd，J＝8.6，1.9 Hz，H-6，8），6.27（1H，d，J＝15.9 Hz，H-3）；13C-NMR（CD3OD，125 MHz）δ：171.0（s，C-1），115.6（d，C-2），146.6（d，C-3），127.2（s，C-4），131.1（d，C-5，9），116.8（d，C-6，8），161.2（s，C-7）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［9］基本一致，故鑒定為反式對(duì)羥基肉桂酸。

化合物2：白色無定型粉末，C9H8O2，ESI-MSm／z：149.1［M ＋H］＋。1H-NMR（CD3OD，500 MHz）δ：7.67（1H，d，J＝16.0 Hz，H-3），7.59（2H，m，H-5，9），7.39（3H，m，H-6，7，8），6.47（1H，d，J＝ 16.0 Hz，H-2）；13C-NMR（CD3OD，125 MHz）δ：171.0（s，C-1），119.4（d，C-2），146.3（d，C-3），135.8（s，C-4），130.0（d，C-5，9），129.2（d，C-6，8），131.4（d，C-7）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［10］基本一致，故鑒定為反式肉桂酸。

化合物3：白色無定型粉末，C10H10O4，ESI-MSm／z：195.2［M ＋H］＋。1H-NMR（CD3OD，500 MHz）δ：7.59（1H，d，J＝15.9 Hz，H-3），7.17（1H，d，J＝2.0 Hz，H-5），7.05（1H，dd，J＝8.2，2.0 Hz，H-9），6.80（1H，d，J＝8.2 Hz，H-8），6.30（1H，d，J＝15.9 Hz，H-2），3.88（3H，s，-OCH3）；13C-NMR（CD3OD，125 MHz）δ：171.0（s，C-1），115.9（d，C-2），146.9（d，C-3），127.8（s，C-4），111.7（d，C-5），150.5（s，C-6），149.4（s，C-7），116.4（d，C-8），124.0（d，C-9），56.4（s，-OCH3）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［11］基本一致，故鑒定為阿魏酸。

化合物4：白色無定型粉末，C9H8O4，ESI-MSm／z：203.1［M ＋Na］＋。1H-NMR（CD3OD，500 MHz）δ：7.52（1H，d，J＝15.9 Hz，H-3），7.02（1H，d，J＝2.1 Hz，H-5），6.92（1H，dd，J＝8.2，2.1 Hz，H-9），6.76（1H，d，J＝8.2 Hz，H-8），6.21（1H，d，J＝15.9 Hz，H-2）；13C-NMR（CD3OD，125 MHz）δ：171.0（s，C-1），115.5（d，C-2），147.0（d，C-3），127.8（s，C-4），115.1（d，C-5），149.5（s，C-6），146.8（s，C-7），116.5（d，C-8），122.8（d，C-9）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［12］基本一致，故鑒定為咖啡酸。

化合物5：白色無定型粉末，C7H6O4，ESI-MSm／z：177.1［M ＋ Na］＋。1H-NMR（CD3OD，500 MHz）δ：7.42（2H，overlapped，H-3，H-7），6.78（1H，d，J＝8.0 Hz，H-6）；13C-NMR（CD3OD，125 MHz）δ：170.2（s，C-1），123.1（s，C-2），117.7（d，C-3），146.1（s，C-4），151.5（s，C-5），115.7（d，C-6），123.9（d，C-7）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［11］基本一致，故鑒定為原兒茶酸。

化合物6：白色無定型粉末，C8H8O3，ESI-MSm／z：153.2［M ＋ H］＋。1H-NMR（CD3OD，500 MHz）δ：9.74（1H，s，H-1），7.42（2H，overlapped，H-3，H-7），6.93（1H，d，J＝7.9 Hz，H-6），3.91（3H，s，-OCH3）；13C-NMR（CD3OD，125 MHz）δ：192.9（d，C-1），130.7（s，C-2），111.3（d，C-3），149.7（s，C-4），154.7（s，C-5），116.3（d，C-6），127.9（d，C-7），56.3（s，-OCH3）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［13］基本一致，故鑒定為香草醛。

化合物7：黃色無定型粉末，C15H14O6，ESI-MSm／z：413.2［M ＋Na］＋。1H-NMR（CD3OD，500 MHz）δ：6.85（1H，d，J＝2.0 Hz，H-2′），6.76（2H，overlapped，H-5′，6′），5.97（1H，d，J＝2.3 Hz，H-8），5.87（1H，d，J＝2.3 Hz，H-6），4.58（1H，d，J＝7.6 Hz，H-2），4.00（1H，m，H-3），2.85（1H，m，H-4a），2.53（1H，m，H-4b）；13C-NMR CD3OD，125 MHz）δ：82.7（d，C-2），68.8（d，C-3），28.5（t，C-4），157.6（s，C-5），96.3（d，C-6），157.9（s，C-7），95.5（d，C-8），156.9（s，C-9），100.8（s，C-10），132.2（s，C-1′），115.2（d，C-2′），146.2（s，C-3′），146.3（s，C-4′），116.1（d，C-5′），120.0（d，C-6′）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［14］基本一致，故鑒定為兒茶素。

化合物8：黃色無定型粉末，C15H14O6，ESI-MSm／z：389.1［M-H］-。1H-NMR（CD3OD，500 MHz）δ：6.96（1H，d，J＝2.0 Hz，H-2′），6.79（2H，overlapped，H-5′，6′），5.93（1H，d，J＝2.3 Hz，H-8），5.90（1H，d，J＝2.3 Hz，H-6），4.81（1H，s，H-2），4.16（1H，m，H-3），2.86（1H，m，H-4a），2.73（1H，m，H-4b）；13C-NMR（CD3OD，125 MHz）δ：79.9（d，C-2），67.5（d，C-3），29.3（t，C-4），157.7（s，C-5），96.4（d，C-6），158.0（s，C-7），95.9（d，C-8），157.4（s，C-9），100.0（s，C-10），132.3（s，C-1′），115.3（d，C-2′），145.8（s，C-3′），145.9（s，C-4′），115.9（d，C-5′），119.4（d，C-6′）。以上 數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［14］基本一致，故鑒定為表兒茶素。

化合物9：白色無定型粉末，C7H6O5，ESI-MSm／z：193.2［M ＋Na］＋。1H-NMR（CD3OD，500 MHz）δ：7.05（2H，s，H-3，H-7）；13C-NMR（CD3OD，125 MHz）δ：170.4（s，C-1），121.9（s，C-2），110.3（d，C-3，7），146.4（d，C-4，6），139.6（d，C-5）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［7］基本一致，故鑒定為沒食子酸。

4 討論

本研究從美麗芍藥根70%乙醇部分離鑒定出9個(gè)化合物，主要涉及小分子酚酸類成分，其中化合物1～8 為首次從該植物中分離得到。以上酚酸類成分都有不同程度活性研究報(bào)道，其中Zeni 等［15］發(fā)現(xiàn)阿魏酸具有抗抑郁作用，其逆轉(zhuǎn)CUMS 誘導(dǎo)的抑郁行為可能與影響5-羥色胺能神經(jīng)系統(tǒng)有關(guān)。尹雪等［16］發(fā)現(xiàn)原兒茶酸對(duì)1-甲基-4-苯基-1，2，3，6-四氫吡啶誘導(dǎo)的帕金森病模型小鼠有保護(hù)作用，通過提高帕金森病模型小鼠中腦和紋狀體內(nèi)多巴胺D2 受體和酪氨酸羥化酶表達(dá)，降低誘導(dǎo)型一氧化氮合酶的表達(dá)發(fā)揮作用。肉桂酸作為桂枝茯苓丸的主要起效物質(zhì)，具有活血化瘀、消炎止痛、鎮(zhèn)靜等作用［17］。前期藥理學(xué)研究指出咖啡酸具有抗氧化、抗炎、鎮(zhèn)痛、免疫調(diào)節(jié)等藥理作用，提示其在防治氧化應(yīng)激和炎癥反應(yīng)中可能的應(yīng)用前景［18］?；诖耍瑸榱素S富對(duì)美麗芍藥植物資源的認(rèn)識(shí)，有必要對(duì)分離得到的單體化合物進(jìn)行更深入的活性篩選，為該植物藥用資源的開發(fā)利用提供數(shù)據(jù)支撐。