張立群

（遼寧省撫順市礦務局總醫(yī)院檢驗科，遼寧 撫順 113008）

細菌感染侵襲血液系統(tǒng)是臨床常見的一種重癥感染，患者病情重，常見高熱不退、休克、疼痛不適等體征，臨床病死率高達37%。因此，及早明確病原菌對用藥方案的選擇及改善患者的預后具有十分重要的意義。CLIS血培養(yǎng)程序指南認為，標本采集后應盡量在2 h內(nèi)運送、檢查，但仍有部分實驗室無法滿足該要求，導致標本采集到病原菌檢出的時間大大延長了。血培養(yǎng)陽性報警時間（Time-to-positivity，TTP）指的是從血液標本開始培養(yǎng)至產(chǎn)生微生物生長報警信號所需的時間。有研究顯示，預培養(yǎng)可縮短TTP，對及早診斷菌血癥具有十分重要的意義。本研究旨在探討不同預培養(yǎng)條件對常見感染菌TTP值的影響，從而為菌血癥的及早診斷提供參考依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 試劑與儀器：杭州天和生物科技提供的腦心浸液培養(yǎng)基；菌株選擇銅綠假單胞菌ATCC27853，腸埃希菌ATCC 25922，金黃色葡萄球菌ATCC29213；血培養(yǎng)系統(tǒng)BacT/Alert 3D及其配套標準厭氧瓶和需氧瓶由法國生物梅里埃公司提供。

1.2 方法：分別用腦心浸液培養(yǎng)基將質(zhì)控菌銅綠假單胞菌ATCC27853，腸埃希菌ATCC 25922，金黃色葡萄球菌ATCC29213配成10C FU/mL、100C FU/mL菌液。銅綠假單胞菌僅接種于需氧瓶，大腸埃希菌菌液、金黃色葡萄球菌菌液同時接種于厭氧瓶和需氧瓶，并將其分別置于25 ℃、37 ℃環(huán)境預培養(yǎng)0 h、2 h、4 h、8 h、12 h、24 h。然后分別將10 CFU/mL、100 CFU/mL菌液置于不同血培養(yǎng)瓶類型、不同溫度環(huán)境中預培養(yǎng)不同的時間段，銅綠假單胞菌共接種24瓶需氧瓶，大腸埃希菌、金葡菌各需接種24瓶厭氧瓶和24瓶需氧瓶，共計120瓶，每瓶接種1 mL菌液，預培養(yǎng)結(jié)束后立即將其插入BacT/Alert 3D血培養(yǎng)系統(tǒng)，記錄TTP值，若7d后仍未報警，則判定結(jié)果假陰性。對比不同預培養(yǎng)溫度、不同血培養(yǎng)瓶類型、不同預培養(yǎng)時間、不同菌液濃度環(huán)境下TTP值間的差異。

2 結(jié)果

在相同培養(yǎng)瓶類型、相同濃度環(huán)境下，銅綠假單胞菌、大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌在37 ℃預培養(yǎng)的TTP值比明顯短于25 ℃預培養(yǎng)的TTP值，P＜0.05。銅綠假單胞菌在25 ℃環(huán)境預培養(yǎng)12 h，在37 ℃環(huán)境預培養(yǎng)8 h TTP值顯著縮短，大腸桿菌、金黃色葡萄球菌在25 ℃環(huán)境預培養(yǎng)8 h，在37 ℃環(huán)境預培養(yǎng)4 h TTP值均顯著縮短，均有P＜0.05。

3 討 論

銅綠假單胞菌、大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌是導致膿毒血癥的幾種常見致病菌。銅綠假單胞菌所致膿毒血癥者更易合并其他嚴重并發(fā)癥，大腸埃希菌是導致血流感染革蘭陰性桿菌中的最為常見的細菌，金黃色葡萄球菌所致膿毒血癥的癥狀十分嚴重[1]。一般情況下，菌血癥時機體血液中的細菌濃度約為1～10 CFU/mL，而本研究中，將細菌濃度分別設(shè)置為10 CFU/mL、100 CFU/mL，主要是考慮到若將模擬細菌的濃度設(shè)置得太低，容易造成假陰性的結(jié)果，因此將細菌濃度分別設(shè)置為10 CFU/mL、100 CFU/mL，這種細菌濃度可間接反映出在不同類型血培養(yǎng)瓶、不同預培養(yǎng)時間、不同溫度、不同濃度培養(yǎng)條件下細菌的生長動態(tài)[2]。

本研究結(jié)果顯示，25 ℃環(huán)境下預培養(yǎng)8h或37 ℃環(huán)境下預培養(yǎng)4 h，大腸桿菌和金黃色葡萄球菌的生長速率顯著上升，TTP值明顯降低，結(jié)果表明，預培養(yǎng)法可有效縮短大腸桿菌和金黃色葡萄球菌的TTP值。此外，本研究還顯示，與大腸桿菌、金黃色葡萄球菌相比，銅綠假單胞菌更易受延遲進入監(jiān)測系統(tǒng)的影響。結(jié)果提示，在使用BacT/Alert 3D血培養(yǎng)儀對銅綠假單胞菌進行監(jiān)測時，在標本采集后應在24 h內(nèi)完成轉(zhuǎn)運，以降低假陰性率[3]。

綜上所述，銅綠假單胞菌、大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌的陽性報警時間與預培養(yǎng)的時間和溫度密切相關(guān)，若采集的標本無法及時放入血培養(yǎng)系統(tǒng)，需要將標本放置到37 ℃的環(huán)境中進行預培養(yǎng)，培養(yǎng)時間限定在24 h內(nèi)。