車路萍，鄧杰，衛(wèi)春會(huì)，任志強(qiáng)，郭燕，鄧波，杜禮泉，黃治國(guó)*

1(四川輕化工大學(xué)，釀酒生物技術(shù)及應(yīng)用四川省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，四川 宜賓, 644000)2(瀘州老窖有限公司，四川 瀘州, 646000)3(四川省綿陽(yáng)市豐谷酒業(yè)有限責(zé)任公司，四川 綿陽(yáng), 621000)

中國(guó)白酒按香型主要分為13種，每種香型都有著其獨(dú)特的風(fēng)味。濃香型白酒窖香濃郁、綿甜醇厚、香味協(xié)調(diào)、尾凈余長(zhǎng)，是最受消費(fèi)者喜愛的白酒之一，市場(chǎng)占有率長(zhǎng)期保持在70%以上[1]。濃香型白酒以谷物為原料，大曲為糖化發(fā)酵劑，經(jīng)窖池密封自然發(fā)酵后蒸餾而得。其白酒風(fēng)味形成與大曲質(zhì)量息息相關(guān)，在釀造過程中，大曲為白酒發(fā)酵提供大量的細(xì)菌、酵母菌和霉菌等原核、真核微生物，這些菌群是白酒發(fā)酵過程中降解大分子物質(zhì)和生成發(fā)酵產(chǎn)物的重要生力軍[2-3]。大曲制作發(fā)酵采用自然發(fā)酵，所含微生物很大部分取決于自然環(huán)境，不同地域環(huán)境微生物不同，最終生產(chǎn)的大曲質(zhì)量也不同。

譚崇堯等利用高通量測(cè)序法對(duì)不同地域濃香型大曲微生物的結(jié)構(gòu)進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)不同區(qū)域濃香型大曲優(yōu)勢(shì)菌群存有差別[4]；施思等利用高通量測(cè)序法對(duì)濃香型大曲貯藏過程中糖化力發(fā)酵力變化及真菌多樣性分析，發(fā)現(xiàn)大曲在儲(chǔ)藏過程真菌群落結(jié)構(gòu)不斷調(diào)整，且隨著時(shí)間的推移，大曲發(fā)酵力逐漸升高，糖化力由高變低再升高[5]，羅惠波等采用PCR-SSCP技術(shù)對(duì)濃香型大曲不同發(fā)酵階段原核微生物群落變化進(jìn)行研究，發(fā)現(xiàn)不同階段大曲原核微生物群落相似，不同菌群間具有復(fù)雜的協(xié)調(diào)和制約作用[2]。目前對(duì)于濃香型大曲的研究多集中在大曲的工藝、微生物群落結(jié)構(gòu)變化等研究[6-9]，而對(duì)不同區(qū)域大曲生產(chǎn)的環(huán)境微生態(tài)研究依然較少。

PLFA圖譜分析法是近幾年來發(fā)展的研究微生物群落結(jié)構(gòu)的一種新方法，它可定量分析微生物群落的生物量和群落結(jié)構(gòu)。PLFA作為活體微生物質(zhì)膜重要的組成成分，具有很高的生物學(xué)特異性[10-14]，其數(shù)量和種類隨微生物的改變而變化，并且在自然生理?xiàng)l件下相對(duì)恒定；但在微生物細(xì)胞死亡后磷脂脂肪酸會(huì)迅速代謝降解[14-15]。因此相對(duì)于目前流行的高通量測(cè)序技術(shù)，PLFA圖譜分析法檢測(cè)微生物群落結(jié)構(gòu)變化不僅操作簡(jiǎn)單快捷，同時(shí)還能對(duì)樣品中微生物群落結(jié)構(gòu)變化進(jìn)行很好的跟蹤[16-18]，具有時(shí)效性的優(yōu)勢(shì)；此外，采用PLFA分析法研究微生物群落能避免植物DNA的干擾和微量微生物DNA的丟失。

本文采用Corolis μ空氣生物采樣器采集曲房空氣微生物，采用PLFA圖譜分析法，以四川綿陽(yáng)市和瀘州市兩不同區(qū)域的濃香型大曲及其對(duì)應(yīng)曲房空氣為研究對(duì)象，探索不同地域濃香型大曲及曲房空氣微生物群落的相關(guān)性，同時(shí)也為研究不同地域同種香型白酒風(fēng)味差異提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

試驗(yàn)材料：分別采自四川綿陽(yáng)和四川瀘州兩家濃香型酒廠不同發(fā)酵階段的大曲及其對(duì)應(yīng)曲房空氣為樣品。同一生產(chǎn)階段大曲及對(duì)應(yīng)曲房空氣采取3個(gè)平行，利用Corolis μ空氣生物采樣器采集曲房空氣，再將其轉(zhuǎn)入裝有無菌水的玻璃瓶中；無菌采集大曲后裝入無菌的自封袋中，置于冰盒中迅速運(yùn)回，粉碎后混勻，用于PLFA分析。各階段樣品取樣環(huán)境參數(shù)如表1、表2所示。

表1 綿陽(yáng)濃香型大曲樣品編號(hào)Table 1 Sample lable of Luzhou-flavour Daqu in Mianyang

表2 瀘州濃香型大曲樣品編號(hào)Table 2 Sample lable of Luzhou-flavour Daqu in Luzhou

實(shí)驗(yàn)試劑：甲基叔丁基醚(色譜純)，Telia Company；正己烷(色譜純)，F(xiàn)isher Scientific Company；甲醇(色譜純)，Darmstadt Germany；三氯甲烷、甲苯、醋酸和丙酮(均為分析純)，成都市科龍化工試劑廠。

1.2 儀器與設(shè)備

恒溫培養(yǎng)振蕩器，中國(guó)上海智城公司；GC6890氣相色譜儀，美國(guó)Agilent公司；微生物鑒定系統(tǒng)，美國(guó)MIDI公司；高速離心機(jī)，德國(guó)Eppendorf公司；空氣生物采樣器，法國(guó)Bertin公司；超低溫冰箱，美國(guó)Thermo公司；氮?dú)獯蹈蓛x，中國(guó)北京八方公司。

1.3 方法

1.3.1 PLFA提取及甲基化

將空氣濾膜或稱取8 g的大曲樣品于50 mL的離心管中，參照文獻(xiàn)[18]進(jìn)行PLFA的提取及甲基化。

1.3.2 PLFA命名及微生物群落的表征[18-19]

磷脂脂肪酸分析主要檢測(cè)碳鏈長(zhǎng)度C9～C24的PLFA，一般將這些PLFA分為直鏈脂肪酸(straight)、支鏈飽和脂肪酸(branched)、單不飽和脂肪酸(PUFA)、多不飽和脂肪酸(MUFA)、環(huán)化脂肪酸(cyclo)、羥基脂肪酸(hydroxy)、10-甲基脂肪酸(10-methyl)以及二甲縮醛化脂肪酸(DMA)。不同磷脂脂肪酸所表征微生物見表3。

表3 微生物種群PLFA標(biāo)記物Table 3 The PLFA biomarkers of microbial populations

1.3.3 PLFA氣相色譜分析

氣相色譜儀,配備分流進(jìn)樣口，Agilent GC6890氣相色譜化學(xué)工作站和氫火焰離子化檢測(cè)器(FID);進(jìn)樣口溫度為250 ℃；分流比為10∶1；進(jìn)樣量為1 μL；初始柱溫40 ℃，保持2 min，再以5 ℃/min升至220 ℃，保持9 min。

1.4 數(shù)據(jù)分析

2 結(jié)果與分析

2.1 大曲及曲房空氣細(xì)菌群落PLFA種類變化規(guī)律

采用PLFA圖譜分析法分對(duì)四川綿陽(yáng)、瀘州兩地區(qū)酒廠不同發(fā)酵時(shí)間的濃香型大曲及其曲房空氣細(xì)菌群落的PLFA種類進(jìn)行研究。結(jié)果表明，在整個(gè)發(fā)酵過程中，大曲與對(duì)應(yīng)曲房空氣細(xì)菌群落PLFA種類數(shù)變化相反，且大曲PLFA種類數(shù)高于對(duì)應(yīng)曲房空氣(圖1)。這可能是由于大曲營(yíng)養(yǎng)豐富且菌種來源廣泛，使得大曲富集的細(xì)菌微生物種類多于曲房空氣，且隨著發(fā)酵時(shí)間的延長(zhǎng)，大曲營(yíng)養(yǎng)成分、理化性質(zhì)發(fā)生改變，部分微生物種類可能無法適應(yīng)大曲當(dāng)前環(huán)境而遷移至曲房空氣中，當(dāng)大曲環(huán)境適合于微生物生長(zhǎng)時(shí)，空氣微生物再次被富集于大曲中，導(dǎo)致大曲與其曲房空氣微生物種類存在一種此消彼長(zhǎng)的變化趨勢(shì)。

圖1 不同區(qū)域大曲及其曲房空氣細(xì)菌PLFA種類數(shù)變化Fig.1 Changes in the number of bacteria PLFA species in Daqu and its air of stacking workshop in different regions注：圖中不同字母代表差異顯著。下同。

兩地大曲細(xì)菌種類數(shù)在23～39，低溫前期變化較大且變化趨勢(shì)相反，發(fā)酵后期細(xì)菌PLFA種類趨于穩(wěn)定。綿陽(yáng)大曲細(xì)菌群落PLFA種類數(shù)在低溫期增至最大值37，顯著高于發(fā)酵0天(P<0.05)，后期趨于穩(wěn)定。瀘州大曲在低溫期細(xì)菌PLFA種類數(shù)顯著降低(P<0.05)，高溫期迅速增至最大值(39)，顯著高于低溫期(P<0.05)，后期趨于穩(wěn)定。這可能是由于兩地制曲所用的原料、水、母曲以及制曲工藝、環(huán)境因素等的不同，使得兩地大曲微生物消長(zhǎng)有其特殊性[20]。兩地曲房空氣細(xì)菌PLFA種類數(shù)在9～22，綿陽(yáng)曲房空氣細(xì)菌PLFA種類在發(fā)酵前期持續(xù)上升，高溫期達(dá)到最大值(20種)，后期迅速降低，且顯著低于高溫期(P<0.05)；瀘州曲房空氣細(xì)菌PLFA種類數(shù)在高溫期前趨于穩(wěn)定，高溫期后顯著上升(P<0.05)，后火期達(dá)到最大值(22種)，貯存期開始下降。這可能與曲房空氣溫度有關(guān)，綿陽(yáng)地區(qū)曲房溫度在高溫期達(dá)到最大值，瀘州地區(qū)曲房溫度在低溫期就已經(jīng)達(dá)到最大值，發(fā)酵前期大曲營(yíng)養(yǎng)豐富，生長(zhǎng)溫度適宜，多種微生物種類生長(zhǎng)繁殖使曲房微生物種類增加，曲房空氣溫度升高后，不適合高溫的微生物被淘汰導(dǎo)致曲房細(xì)菌群落種類降低[21]。

2.2 不同地區(qū)大曲及曲房空氣細(xì)菌群落PLFA種類組成分析

采用PLFA圖譜分析法對(duì)綿陽(yáng)和瀘州兩地區(qū)酒廠濃香型大曲及其廠房空氣細(xì)菌群落的磷脂脂肪酸種類組成進(jìn)行分析(圖2～圖4)。結(jié)果表明，兩地大曲及曲房空氣以革蘭氏陽(yáng)性菌和革蘭氏陰性菌為主要菌群，且曲房空氣中檢測(cè)到的PLFA種類在對(duì)應(yīng)大曲中大致都能被檢測(cè)。此外，不同區(qū)域大曲及曲房空氣的PLFA種類具有差異性，皆含有其特有微生物種類。瀘州大曲特有PLFA種類包括表征革蘭氏陰性菌的13∶1ω4、22∶1ω9和表征革蘭氏陽(yáng)性菌的a17∶1ω7；綿陽(yáng)大曲特有PLFA種類為表征革蘭氏陰性菌的14∶0 20H、15∶1ω8、21∶1ω5、22∶1ω3和表征厭氧菌的18∶1ω9DMA。瀘州曲房空氣特有PLFA種類為表征革蘭氏陰性菌的10∶0 20H、18∶1ω8、18∶1ω9，綿陽(yáng)曲房空氣特有PLFA為表征革蘭氏陰性菌的17∶1ω4和表征革蘭氏陽(yáng)性菌的a12∶0以及表征厭氧菌的18∶1ω7 DMA、18∶1ω9 DMA。此外，磷脂脂肪酸c17∶0ω9、17∶1ω8、c20∶0ω6、20∶1ω9、22∶1ω5、16∶1ω7(均表征革蘭氏陰性菌)；a13∶0、a14∶0、a15∶0、a17∶0、i15∶0、i16∶0、i17∶0、i18∶0(表征革蘭氏陽(yáng)性菌)；18∶0DMA、20∶1ω9(表征厭氧菌)、18∶0(表征嗜熱芽孢桿菌)代表的微生物種類為兩地大曲及曲房空氣共有微生物種類，這些微生物種類可能是影響濃香型大曲風(fēng)格的重要菌種，其結(jié)果與趙金松等[22]的研究結(jié)果相似。

圖2 不同區(qū)域大曲和曲房空氣革蘭氏陰性菌PLFA組成Fig.2 PLFA composition of Gram-negative bacteria in the Daqu and the air of stacking room in different regions

圖3 不同區(qū)域大曲和曲房空氣革蘭氏陽(yáng)性菌PLFA組成Fig.3 PLFA composition of Gram-positive bacteria in the Daqu and the air of stacking room in different regions

圖4 不同區(qū)域大曲和曲房空氣厭氧菌及嗜熱芽孢桿菌PLFA組成Fig.4 PLFA composition of anaerobic bacteria and Bacillus thermophilus in the Daqu and the air of stacking room in different regions

2.3 大曲及曲房空氣細(xì)菌群落生物量變化趨勢(shì)

采用PLFA法分別對(duì)綿陽(yáng)、瀘州地區(qū)不同發(fā)酵階段的濃香型大曲及廠房空氣細(xì)菌群落生物量變化趨勢(shì)進(jìn)行研究。結(jié)果表明,在發(fā)酵過程中，綿陽(yáng)、瀘州大曲及其曲房空氣細(xì)菌生物量均呈先上升、后降低的趨勢(shì)變化，且大曲生物量高于對(duì)應(yīng)曲房空氣生物量(圖5)，這說明大曲與曲房微生物具有一定的相關(guān)性，曲房環(huán)境對(duì)大曲細(xì)菌群落影響巨大。綿陽(yáng)、瀘州兩地大曲及曲房空氣細(xì)菌生物量均在后火期達(dá)到最大值，其綿陽(yáng)大曲為94.18 nmol/m3、瀘州大曲為78.09 nmol/m3、綿陽(yáng)曲房空氣為54.58 nmol/m3以及瀘州曲房空氣為6.24 nmol/m3。綿陽(yáng)大曲細(xì)菌生物量在發(fā)酵前期保持穩(wěn)定(P>0.05)，后火期迅速增加，顯著高于其他發(fā)酵階段(P<0.05)，貯存期開始下降；曲房空氣細(xì)菌生物量在發(fā)酵前期持續(xù)上升，后火期達(dá)到最大值(P<0.05)，貯存期生物量有所降低。瀘州大曲細(xì)菌生物量變化趨勢(shì)與綿陽(yáng)曲房空氣變化一致，后火期顯著高于其他發(fā)酵階段；曲房空氣細(xì)菌生物量在高溫期前緩慢降低，高溫期達(dá)到最低值，后火期迅速上升達(dá)到最大值(P<0.05)，顯著高于其他各階段，貯存期生物量降低。兩地大曲及曲房細(xì)菌微生物群落均在后火期達(dá)到最大值，這可能是由于濃香型大曲及其曲房空氣在發(fā)酵過程中升溫速度較緩慢，未被淘汰的耐高溫微生物能快速適應(yīng)高溫環(huán)境成為優(yōu)勢(shì)菌群，在高溫階段也能生長(zhǎng)繁殖[23]，直至后火期生物量達(dá)到頂峰，進(jìn)入貯藏期后大曲及曲房空氣中微生物生長(zhǎng)所需的水、營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)等降低導(dǎo)致細(xì)菌生物量降低。

a-綿陽(yáng)和瀘州大曲細(xì)菌生物量；b-綿陽(yáng)和瀘州曲房空氣細(xì)菌生物量圖5 大曲及曲房空氣細(xì)菌生物量隨發(fā)酵時(shí)間的變化趨勢(shì)圖Fig.5 The trend of bacterial biomass in Daqu and air as a function of fermentation time

2.4 大曲及曲房空氣細(xì)菌群落變化趨勢(shì)

對(duì)綿陽(yáng)、瀘州不同地區(qū)的濃香型大曲及其廠房空氣的細(xì)菌群落結(jié)構(gòu)進(jìn)行研究分析(如圖6)。結(jié)果表明，兩地大曲優(yōu)勢(shì)菌群主要為嗜熱解氫桿菌、革蘭氏陰性菌和革蘭氏陽(yáng)性菌，曲房空氣優(yōu)勢(shì)菌群主要為革蘭氏陽(yáng)性菌和革蘭氏陰性菌，其結(jié)果與譚崇堯等、陳玲等利用高通量測(cè)序法測(cè)得的川派濃香型大曲結(jié)果較為相同[4，24]。瀘州大曲在退火期前以革蘭氏陰性菌為優(yōu)勢(shì)菌群，革蘭氏陽(yáng)性菌群豐富度總體呈遞增趨勢(shì)，嗜熱芽孢桿菌和厭氧菌豐富度保持相對(duì)穩(wěn)定，進(jìn)入貯藏期，以嗜熱芽孢桿菌為優(yōu)勢(shì)菌群；其曲房空氣在發(fā)酵0 d以革蘭氏陽(yáng)性菌為優(yōu)勢(shì)菌群，低溫期和后火期相對(duì)豐度降低以厭氧菌為優(yōu)勢(shì)菌群，進(jìn)入貯藏期，革蘭氏陰性菌豐度增加成為優(yōu)勢(shì)菌群。綿陽(yáng)大曲發(fā)酵初期以革蘭氏陰性菌為優(yōu)勢(shì)菌群，低溫期轉(zhuǎn)為革蘭氏陽(yáng)性菌，中后期嗜熱解氫桿菌、革蘭氏陰性菌豐富度增加，貯藏期后以革蘭氏陰性菌為優(yōu)勢(shì)菌群；其曲房空氣在發(fā)酵0 d以革蘭氏陽(yáng)性菌為優(yōu)勢(shì)菌群，后期以革蘭氏陰性菌為優(yōu)勢(shì)菌群，在整個(gè)發(fā)酵過程中只有在低溫期檢測(cè)到少量厭氧菌。這可能是由于綿陽(yáng)豐谷大曲的并曲工藝使曲房空氣的含氧量增加，使得厭氧菌無法生長(zhǎng)[18]。

在發(fā)酵前期，綿陽(yáng)大曲和其曲房空氣中革蘭氏陽(yáng)性菌、革蘭氏陰性菌以及嗜熱解氫桿菌的相對(duì)豐度呈相反的趨勢(shì)變化；瀘州大曲中厭氧菌和革蘭氏陽(yáng)性菌的相對(duì)豐度變化趨勢(shì)與曲房空氣相反。這可能是因?yàn)榇笄颓靠諝庵械奈⑸锵嗷ミw移所造成的，微生物在空氣中因?yàn)闋I(yíng)養(yǎng)物質(zhì)和水分的缺乏不能較好地繁殖，但卻棲息著大量的孢子，大曲剛放入曲房、并曲、翻曲以及移庫(kù)均會(huì)增加空氣中的流動(dòng)性，此時(shí)孢子會(huì)隨著空氣的流動(dòng)四處傳播，在適宜的條件下生長(zhǎng)繁殖，隨后又被卷入空氣中，如此循環(huán)、交替[25]。

a-瀘州大曲與曲房空氣細(xì)菌群落；b-綿陽(yáng)大曲與曲房空氣細(xì)菌群落圖6 大曲及曲房空氣中細(xì)菌群落的分布Fig.6 Distribution of bacterial community in Daqu and air

2.5 大曲及曲房空氣細(xì)菌群落結(jié)構(gòu)的主成分分析

采用主成分分析法(PCA)對(duì)綿陽(yáng)、瀘州兩區(qū)域濃香型大曲及其曲房空氣不同發(fā)酵階段的微生物PLFA種類進(jìn)行分析。結(jié)果表明，綿陽(yáng)地區(qū)各階段大曲及其曲房空氣細(xì)菌群落在發(fā)酵0 d、低溫期和退火期組成相似，與高溫期和儲(chǔ)藏期大曲細(xì)菌群落組成差異較大(圖7)，這表明綿陽(yáng)大曲與曲房空氣細(xì)菌群落存在相互影響，且高溫期的高溫和儲(chǔ)存期的低水分對(duì)細(xì)菌群落結(jié)構(gòu)組成可能有較大影響。瀘州地區(qū)濃香型大曲及其曲房空氣細(xì)菌群落組成在整個(gè)發(fā)酵過程中對(duì)應(yīng)組成相似，其中L1-K、L1-D、L2-K、L2-D、L3-K、L3-D在PC1上距離接近，L4-K、L4-D、L5-K、L5-D在PC2上距離接近(圖8)，表明瀘州大曲與曲房空氣在整個(gè)發(fā)酵過程中存在重要相互作用。兩地大曲及其曲房空氣細(xì)菌群落微生物皆在發(fā)酵0 d、低溫期組成相似，大曲前期是大曲經(jīng)過微生物自然接種后進(jìn)行培菌的重要時(shí)期之一，這說明曲房空氣細(xì)菌的群落對(duì)大曲的發(fā)酵有著重要的影響，與羅惠波等[26]研究的結(jié)果基本一致。

圖7 綿陽(yáng)大曲及其曲房空氣PLFA的主成分分析Fig.7 Principal component analysis of PLFA in the Daqu and air of stacking room of Mianyang

圖8 瀘州大曲及其曲房空氣PLFA的主成分分析Fig.8 Principal component analysis of PLFA in the Daqu and the air of stacking room of Luzhou

3 結(jié)論

利用磷脂脂肪酸(PLFA)技術(shù)對(duì)綿陽(yáng)、瀘州兩地大曲及曲房空氣在發(fā)酵過程中的微生物群落進(jìn)行研究，并對(duì)兩者之間細(xì)菌群落結(jié)構(gòu)的差異進(jìn)行分析，結(jié)果如下：(1)兩地大曲及其曲房空氣微生物PLFA種類呈現(xiàn)此消彼長(zhǎng)的變化趨勢(shì)，且大曲各階段的微生物PLFA種類數(shù)高于對(duì)應(yīng)空氣中PLFA種類數(shù)，在曲房中能檢測(cè)到PLFA種類在對(duì)應(yīng)階段大曲中大致都能檢測(cè)到。(2)兩地大曲及其曲房空氣的細(xì)菌生物量均呈先升高后降低的趨勢(shì)變化，在后火期達(dá)到最高值，綿陽(yáng)大曲曲房空氣細(xì)菌生物量在整個(gè)發(fā)酵過程中均高于瀘州曲房空氣。(3)通過相對(duì)豐度比較和主成分分析發(fā)現(xiàn)，兩地大曲的優(yōu)勢(shì)菌群表現(xiàn)為嗜熱解氫桿菌、革蘭氏陰性菌和革蘭氏陽(yáng)性菌，曲房空氣優(yōu)勢(shì)菌群表現(xiàn)為革蘭氏陽(yáng)性菌和革蘭氏陰性菌，且瀘州地區(qū)曲房空氣在發(fā)酵過程中厭氧菌相對(duì)含量較高；綿陽(yáng)地區(qū)濃香型大曲及曲房空氣細(xì)菌群落在發(fā)酵前期對(duì)應(yīng)組成相似，瀘州地區(qū)濃香型大曲及其曲房空氣在整個(gè)發(fā)酵階段對(duì)應(yīng)組成相似，表明濃香型大曲及其曲房空氣細(xì)菌群落存在重要相互影響，且主要發(fā)生在發(fā)酵前期。

綜合研究結(jié)果可得，曲房空氣微生物與大曲微生物在整個(gè)發(fā)酵過程中處于一種相互轉(zhuǎn)移的狀態(tài)，且可能主要發(fā)生在大曲發(fā)酵前期，轉(zhuǎn)移微生物主要表現(xiàn)為革蘭氏陽(yáng)性菌和革蘭氏陰性菌。此外，不同區(qū)域濃香型大曲曲房空氣微生物群落組成變化具有其特殊性，這可能是兩地濃香型白酒口感差異的原因之一。曲房空氣微生物對(duì)大曲微生物的多樣性具有重要影響，深入研究曲房空氣微生物和對(duì)提升大曲質(zhì)量具有重大意義。