薛柯，許霞，薛銀剛,,*，穆云松，劉菲，江曉棟，施昕瀾，顧銘

1. 常州大學(xué)環(huán)境與安全工程學(xué)院，常州 213164 2. 江蘇省環(huán)境保護(hù)水環(huán)境生物監(jiān)測(cè)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，江蘇省常州環(huán)境監(jiān)測(cè)中心，常州 213001 3. 中國(guó)環(huán)境科學(xué)研究院，環(huán)境基準(zhǔn)與風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，北京 100012 4. 江蘇理工學(xué)院化學(xué)與環(huán)境工程學(xué)院，常州 213001

斑馬魚(zebrafish,Daniorerio)是一種原產(chǎn)于印度和南亞河流的小型熱帶魚[1]，自1994年起作為一種全新的脊椎動(dòng)物模型被學(xué)術(shù)界接受[2-3]，它的器官、細(xì)胞類型、心血管系統(tǒng)、消化系統(tǒng)與哺乳動(dòng)物相似[4-5]。另外，斑馬魚與人類的遺傳和生理同源性顯著[6]，大約70%的人類基因至少有一個(gè)明顯的斑馬魚直系同源物[7]，神經(jīng)系統(tǒng)組織和代謝與人類類似[8-9]，生物學(xué)特性接近于人類生長(zhǎng)全過程[10]，它還有易于獲得、價(jià)格低廉、容易飼養(yǎng)、符合“3R”原則、測(cè)試周期短并且在適當(dāng)?shù)墓庵芷跅l件下能產(chǎn)出大量粘附性低、可浸泡、透明的魚卵等優(yōu)點(diǎn)[11-13]，在生態(tài)毒理學(xué)和發(fā)育遺傳學(xué)等領(lǐng)域中得到了廣泛的研究[14]，相對(duì)于小鼠、果蠅和線蟲等模式生物，近年來斑馬魚的應(yīng)用地位顯著[15]。

斑馬魚的生命階段主要包括胚胎(卵裂期、囊胚期、原腸胚期、分裂期、成形期和孵化期)、仔魚和成魚3個(gè)階段，72 hpf(hour post fertilization, hpf)進(jìn)入早期仔魚階段且主要器官發(fā)育完成，96 hpf時(shí)大多數(shù)器官發(fā)育完成，120 hpf時(shí)仔魚發(fā)育完成[16-17]。生命周期試驗(yàn)主要分為2類：整個(gè)生命周期試驗(yàn)(full life cycle test)和部分生命周期試驗(yàn)(partial life cycle test)[18]，毒性主要包括一般毒性(急性毒性、亞慢性毒性、慢性毒性、蓄積毒性和局部毒性等)和特殊毒性(致癌作用、致突變作用、生殖和發(fā)育毒性等)[19]。利用PubMed數(shù)據(jù)庫(kù)，以zebrafish embryo, zebrafish larvae, zebrafish adult和zebrafish life cycle為限定條件，以toxicology為限定區(qū)域統(tǒng)計(jì)發(fā)現(xiàn)，近10年來，斑馬魚生命周期的毒理學(xué)研究所占比重不斷上升并呈穩(wěn)定增長(zhǎng)的趨勢(shì)(圖1)。本文綜述了斑馬魚全生命周期毒性的研究進(jìn)展，為深入研究毒性物質(zhì)對(duì)魚類以及其他高等脊椎動(dòng)物生長(zhǎng)發(fā)育的影響提供一定的參考依據(jù)。

1 斑馬魚各生命階段在毒理學(xué)中的研究進(jìn)展(Research progress on partial life cycle test of zebrafish in toxicology)

1.1 斑馬魚胚胎在毒理學(xué)中的研究進(jìn)展

1.1.1 急性毒性及發(fā)育毒性的研究進(jìn)展

急性毒性是指機(jī)體(人或?qū)嶒?yàn)動(dòng)物)一次或短期內(nèi)(一般指24～96 h)多次接觸外源化合物之后所引起的中毒效應(yīng)，這種毒性效應(yīng)可以反映在不同的組織水平上，并伴隨著不同的癥狀，甚至死亡[19]。20世紀(jì)70年代，Laale[20]對(duì)斑馬魚胚胎在生態(tài)毒理學(xué)領(lǐng)域的應(yīng)用進(jìn)行了報(bào)道，后來Lange等[21]使用斑馬魚及其胚胎和RTG-2細(xì)胞進(jìn)行毒性試驗(yàn)，結(jié)果證明，胚胎測(cè)試對(duì)毒性反應(yīng)最敏感，并且認(rèn)為胚胎毒性測(cè)試是替代魚類急性毒性測(cè)試的最佳方法。

圖1 斑馬魚生命周期相關(guān)的論文及占比Fig. 1 Statistical analysis of scientific papers related to zebrafish life cycle

2002年Nagel[22]進(jìn)一步證明斑馬魚胚胎可以替代魚類96 h的急性毒性試驗(yàn)，同年，德國(guó)率先使用斑馬魚胚胎48 h毒性試驗(yàn)(fish embryo toxicity, FET)代替魚類急性毒性試驗(yàn)，自2005年以來，F(xiàn)ET已成為德國(guó)全廢水毒性試驗(yàn)(whole effluent test, WET)的重要組成部分[23]。在進(jìn)行斑馬魚胚胎急性毒性測(cè)試的同時(shí)，也可以篩選發(fā)育不正常的胚胎作為致畸作用指標(biāo)，相關(guān)研究人員總結(jié)斑馬魚胚胎形態(tài)學(xué)、亞致死等毒性終點(diǎn)(表1)，如心跳變化、運(yùn)動(dòng)行為和孵化率等，這些終點(diǎn)豐富了毒性內(nèi)容，且表明了化學(xué)物質(zhì)可能存在的發(fā)育毒性和慢性毒性效應(yīng)[24]。

1.1.2 內(nèi)分泌干擾毒性的研究進(jìn)展

內(nèi)分泌干擾毒性的主要原因在于天然激素水平的失衡，而引起激素水平失衡的物質(zhì)大多數(shù)來源于人類的生產(chǎn)和生活過程中產(chǎn)生和排放的污染物，由于這類物質(zhì)具有與生物體內(nèi)激素相同的活性，會(huì)影響生物內(nèi)分泌系統(tǒng)的正常工作，因此稱之為“環(huán)境內(nèi)分泌干擾物(environmental endocrine disrupters, EEDs)”[25-26]。目前，大多數(shù)報(bào)道以特定的終點(diǎn)如性別分化或誘導(dǎo)卵黃蛋白原(vitellogenin, VTG)來研究對(duì)雌激素、雄激素和甲狀腺受體起作用的EEDs的影響[27]。斑馬魚胚胎模型在內(nèi)分泌干擾毒性研究中的應(yīng)用是通過觀察EEDs暴露對(duì)激素應(yīng)答基因的影響進(jìn)行檢測(cè)篩選，VTG作為敏感型的分子生物標(biāo)記物，已被廣泛應(yīng)用于斑馬魚胚胎模型中[28]。然而，在斑馬魚胚胎模型中尚未有雄激素和糖皮質(zhì)激素的報(bào)道，對(duì)于這些終點(diǎn)的檢測(cè)原則上可以通過轉(zhuǎn)基因報(bào)告菌株分析其應(yīng)答基因，但是現(xiàn)有的菌株，如pERE tata-Luc，只被成功地運(yùn)用到仔魚或成魚階段[29]。對(duì)內(nèi)分泌干擾毒性的分析，特別是對(duì)不直接干擾受體調(diào)控基因(如性別分化)，需要在仔魚敏感的發(fā)展階段進(jìn)行。因此，斑馬魚胚胎可以作為簡(jiǎn)單的篩選工具，但在研究更復(fù)雜的激素調(diào)節(jié)過程中的應(yīng)用尚待開發(fā)。

表1 斑馬魚胚胎急性毒性和致畸性的終點(diǎn)[22]Table 1 Lethal and sublethal endpoints for evaluating the acute toxicity and teratogenicity of chemicals on zebrafish embryos [22]

注：*在致畸毒性試驗(yàn)中，只有卵凝結(jié)判定為死亡；** 暴露48 h后將胚胎轉(zhuǎn)移到?jīng)]有試驗(yàn)化合物的水中；120 hpf仔魚變直，可以精確地測(cè)量尾長(zhǎng)。

Note: *Within the teratogenicity test for a better comparison with mammalian data only the endpoint "coagulated" is used as a lethal effect. ** In this case the eggs are transfered into water without the test compound after 48 h. After natural hatching the larvae is straightened and the tail length can be determined.

對(duì)斑馬魚胚胎的毒理研究還涉及神經(jīng)毒性、遺傳毒性和基因技術(shù)等領(lǐng)域[30]。MacRae和Peterson[31]還報(bào)道了斑馬魚及其胚胎在藥物開發(fā)中的應(yīng)用，并提出斑馬魚模型與傳統(tǒng)藥物開發(fā)方法的結(jié)合有助于平衡藥物毒性和療效。斑馬魚胚胎在毒理學(xué)研究中的前景主要是：(1)確定更合適的分子標(biāo)記物作為毒性測(cè)試指標(biāo)(如內(nèi)分泌干擾毒性)；(2)建立短期毒性測(cè)試(如急性毒性)和長(zhǎng)期毒性測(cè)試(如慢性毒性和發(fā)育毒性)之間的關(guān)系；(3)斑馬魚胚胎模型的開發(fā)及應(yīng)用可以為環(huán)境管理決策服務(wù)；(4)斑馬魚及其胚胎在醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的研究可以擴(kuò)大其在毒理學(xué)的應(yīng)用。

1.2 斑馬魚仔魚及成魚在毒理學(xué)中的研究進(jìn)展

一般在完成孵化后48～72 h的斑馬魚可以自由運(yùn)動(dòng)并且能夠自主取食，標(biāo)志著正式進(jìn)入了仔魚期，斑馬魚仔魚發(fā)育要持續(xù)數(shù)周，因此，目前針對(duì)仔魚的毒性試驗(yàn)除短期暴露外，還有長(zhǎng)期暴露試驗(yàn)。由于斑馬魚仔魚具備自主游動(dòng)能力，因此，一些工作以仔魚行為作為評(píng)價(jià)指標(biāo)，進(jìn)行毒性試驗(yàn)。斑馬魚成魚四月齡進(jìn)入性成熟期，一般5～6月齡的斑馬魚開始被用于成魚毒性試驗(yàn)中。由于斑馬魚成魚體內(nèi)的各種生理生化系統(tǒng)和內(nèi)分泌系統(tǒng)己經(jīng)發(fā)育完畢，所以能用于毒性評(píng)價(jià)的指標(biāo)非常豐富，成年斑馬魚相比于胚胎和仔魚，最大的優(yōu)勢(shì)在于可以取出處理后斑馬魚體內(nèi)的不同器官，來具體評(píng)價(jià)污染物對(duì)不同器官或組織的影響[32]。斑馬魚相對(duì)于其他模式生物應(yīng)用于毒性檢測(cè)而言，節(jié)省了時(shí)間和人力成本，具有快速、簡(jiǎn)便和高效的優(yōu)勢(shì)，降低了人和生態(tài)系統(tǒng)面臨的毒性風(fēng)險(xiǎn)，是一種應(yīng)用潛力更大的環(huán)境污染應(yīng)急預(yù)警方法，被國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)化組織(International Organization for Standardization, ISO)、經(jīng)濟(jì)合作與發(fā)展組織(Organization for Economic Co-Operation and Development, OECD)和歐盟等組織認(rèn)定為標(biāo)準(zhǔn)毒性測(cè)試生物(表2)。

野生型斑馬魚在毒理學(xué)中得到了廣泛的應(yīng)用，但這種方法仍有不足之處，如檢測(cè)靈敏度度相對(duì)較低，實(shí)驗(yàn)過程及結(jié)果統(tǒng)計(jì)相對(duì)繁瑣等。隨著轉(zhuǎn)基因技術(shù)的日益成熟，將具有特異性調(diào)控作用的基因?qū)氚唏R魚體內(nèi)，從而產(chǎn)生針對(duì)不同種類污染物可產(chǎn)生特異性表型的轉(zhuǎn)基因斑馬魚，使針對(duì)不同污染物的分子生物標(biāo)志物數(shù)據(jù)庫(kù)不斷擴(kuò)展，為污染物環(huán)境監(jiān)測(cè)與預(yù)警提供更多的數(shù)據(jù)支持[33]，為環(huán)境樣品中關(guān)鍵致毒物質(zhì)篩查提供新的解決思路[34]。

目前，應(yīng)用于環(huán)境監(jiān)測(cè)的轉(zhuǎn)基因斑馬魚主要有以下5種類型：芳香烴反應(yīng)元件(aromatic hydrocarbon response element, AHRE)、親電反應(yīng)元件(electrophile response element, EPRE)、金屬離子反應(yīng)元件(metal response element, MRE)、雌激素反應(yīng)元件(estrogen response element, ERE)和維甲酸和類維生素X反應(yīng)元件(retinoic acid and retinoid X response elements, RAREs, RXREs)(表3)。隨著科學(xué)技術(shù)手段的不斷進(jìn)步，將來會(huì)有更多的轉(zhuǎn)基因(反應(yīng)元件)斑馬魚品系建立。各種帶有不同反應(yīng)元件的轉(zhuǎn)基因斑馬魚胚胎可以像基因芯片一樣排列在微孔板中，可以準(zhǔn)確地檢測(cè)出水環(huán)境中各種污染物的種類，并根據(jù)熒光強(qiáng)度來推算污染物的濃度[48-49]。Petersen等[44]通過暴露轉(zhuǎn)基因斑馬魚tg(cyp19a1b-GFP)胚胎監(jiān)測(cè)5種不同的環(huán)境雌激素，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，所潛在的和弱的類雌激素都能夠監(jiān)測(cè)到。此外，Pawar等[38]將轉(zhuǎn)基因斑馬魚(pTol2-MT-Ia1-DsRed2)的胚胎暴露至Cd2+、Cu2+、Hg2+、Pb2+和Zn2+溶液中，通過觀察熒光強(qiáng)度確定毒性強(qiáng)弱。

2 斑馬魚多階段毒性評(píng)價(jià)及整個(gè)生命周期的毒理學(xué)研究進(jìn)展(Research progress on multi-stage and complete life cycle toxicity evaluation)

2.1 斑馬魚多階段毒性評(píng)價(jià)及整個(gè)生命周期在毒性測(cè)試中的應(yīng)用

隨著對(duì)魚類毒性試驗(yàn)了解的不斷深入，人們逐漸發(fā)現(xiàn)傳統(tǒng)的單一生命階段毒性試驗(yàn)提供的數(shù)據(jù)較為片面，不能客觀全面地反映有毒化合物對(duì)生物的毒性，大量研究已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，對(duì)于同一有毒污染物，不同生命階段的魚會(huì)表現(xiàn)出不同的敏感性和中毒反應(yīng)，多階段毒性評(píng)價(jià)能夠避免由生命階段不同而導(dǎo)致的敏感性差異[50-51]。通過整個(gè)生命周期毒性試驗(yàn)可以發(fā)現(xiàn)低劑量有毒化合物暴露的影響，并有助于建立長(zhǎng)期化學(xué)品的安全濃度，提供可能的延遲毒性的詳細(xì)信息[52]。在毒理學(xué)評(píng)價(jià)中，單個(gè)生命階段的毒理學(xué)試驗(yàn)結(jié)果較為片面，而整個(gè)生命周期的毒性試驗(yàn)時(shí)間跨度較大，對(duì)外界環(huán)境要求較高，實(shí)際操作起來難度較大。因此，許多毒性試驗(yàn)選擇3個(gè)單獨(dú)的斑馬魚生命階段(胚胎、仔魚和成魚)[53]。斑馬魚不同的生命階段有著不同的毒性測(cè)試標(biāo)準(zhǔn)體系，在多階段毒性評(píng)價(jià)中可以參照對(duì)應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)(表3)進(jìn)行試驗(yàn)。筆者查閱OECD、ISO、美國(guó)環(huán)境保護(hù)局(United States Environmental Protcction Agency, US EPA)和日本環(huán)境省等標(biāo)準(zhǔn)資源庫(kù)發(fā)現(xiàn)，目前US EPA(Fish Life Cycle Toxicity, 1996)和日本環(huán)境省(the Medaka (OryziasLatipes) Full Life-Cycle Test Guideline, 2002)制定了魚類整個(gè)生命周期毒性試驗(yàn)。

表2 利用斑馬魚生命周期開展毒性測(cè)試的標(biāo)準(zhǔn)Table 2 Standard for zebrafish life-cycle toxicity test

注：LC50表示半數(shù)致死濃度，EC50表示半數(shù)效應(yīng)濃度，NOEC表示無可觀察效應(yīng)濃度。OECD表示經(jīng)濟(jì)合作與發(fā)展組織，ISO表示國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)化組織。

Note: LC50stands for median lethal concentration; EC50stands for median effect concentration; NOEC stands for no observed effect concentration; OECD stands for Organization for Economic Co-Operation and Development; ISO stands for International Organization for Standardization.

表3 不同反應(yīng)元件的轉(zhuǎn)基因斑馬魚在環(huán)境監(jiān)測(cè)中的應(yīng)用Table 3 Application of transgenic zebrafish with different response elements in environmental monitoring

注：AHRE表示芳香烴反應(yīng)元件，MRE表示金屬離子反應(yīng)元件，ERE表示雌激素反應(yīng)元件，EPRE表示親電反應(yīng)元件，RAREs表示維甲酸反應(yīng)元件，RXREs表示類維生素X反應(yīng)元件。共有序列中，N=A, T, G或C；R=A或G；W=A或T。

Note: AHRE stands for aromatic hydrocarbon response element; MRE stands for metal response element; EPRE stands for electrophile response element; RAREs stands for retinoic acid response element; RXREs stands for retinoid X response elements. Within each consensus sequence, N = A, T, G, or C; R = A or G; W = A or T.

在魚類毒性檢測(cè)的環(huán)境污染物中主要分為重金屬、內(nèi)分泌干擾物和有機(jī)物[54]。最早提出魚類生命周期毒性試驗(yàn)的Mount和Stephan[55]將黑頭呆魚的整個(gè)生命周期暴露于馬拉硫磷和丁氧基乙醇酯中定量分析黑頭呆魚的生長(zhǎng)繁殖所受的影響。隨著斑馬魚模型的開發(fā)和應(yīng)用，越來越多的研究針對(duì)這3類物質(zhì)開展斑馬魚多階段毒性評(píng)價(jià)和整個(gè)生命周期毒性試驗(yàn)。通過不同的評(píng)價(jià)方法，不同的暴露時(shí)長(zhǎng)，以形態(tài)變化、基因表達(dá)、行為和生理學(xué)特征等指標(biāo)來評(píng)價(jià)污染物的毒性(表4)。

2.2 國(guó)內(nèi)斑馬魚及其毒性試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)的發(fā)展

斑馬魚在我國(guó)生物科學(xué)中的研究始于1998年，孟安明院士在清華大學(xué)建立國(guó)內(nèi)第一家以斑馬魚為模式動(dòng)物的發(fā)育生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室[49]。2000年后，斑馬魚研究團(tuán)體飛速增長(zhǎng)，截至2017年，中國(guó)斑馬魚學(xué)者在國(guó)際斑馬魚信息中心(the Zebrafish Information Network, ZFIN)網(wǎng)站注冊(cè)的獨(dú)立實(shí)驗(yàn)室已達(dá)100個(gè)[56]。國(guó)家斑馬魚資源中心隸屬于中國(guó)科學(xué)院水生生物研究所，其斑馬魚資源保藏庫(kù)現(xiàn)擁有1 200多個(gè)斑馬魚品系和10 000余份凍存精子，可提供斑馬魚品系等資源服務(wù)、轉(zhuǎn)基因和基因敲除等技術(shù)服務(wù)、養(yǎng)殖和健康等咨詢服務(wù)，以及技術(shù)培訓(xùn)和學(xué)術(shù)會(huì)議服務(wù)等[15]。此外，國(guó)際也有著相當(dāng)數(shù)量且實(shí)力雄厚的斑馬魚生物信息學(xué)數(shù)據(jù)庫(kù)(表5)。通過Web of ScienceTMCore Collection (v5.29)數(shù)據(jù)庫(kù)以斑馬魚為主題同時(shí)限定區(qū)域分析(不含港澳臺(tái)) 可知，2000—2001年中國(guó)斑馬魚相關(guān)研究論文在世界中的占比僅為1.6%，之后中國(guó)斑馬魚論文占比持續(xù)增長(zhǎng)，到了2010年首次突破10%，而到了2017年，更是達(dá)到22.9%(圖2)，另搜索中國(guó)知網(wǎng)數(shù)據(jù)庫(kù)發(fā)現(xiàn)，以“斑馬魚”為主題的中文文獻(xiàn)已有4 010篇(1990—2017年)。

圖2 Web of ScienceTM Core Collection數(shù)據(jù)庫(kù)中1997—2017年中國(guó)斑馬魚論文數(shù)量及占比Fig. 2 The proportion of Chinese zebrafish papers from 1997 to 2017 from Web of ScienceTM Core Collection datebase

表4 斑馬魚多階段毒性評(píng)價(jià)和整個(gè)生命周期毒性評(píng)價(jià)的應(yīng)用Table 4 Application of multi-stage and complete life cycle toxicity evaluation

表5 斑馬魚生物信息學(xué)資源庫(kù)Table 5 Zebrafish bioinformatics resource library

表6 國(guó)內(nèi)斑馬魚相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)制定進(jìn)展Table 6 Progress in the development of domestic zebrafish related standards

在國(guó)內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)制定上，1992年出臺(tái)的《水質(zhì) 物質(zhì)對(duì)淡水魚(斑馬魚)急性毒性測(cè)定方法》(GB/T 13267—91)中首次將斑馬魚用于水質(zhì)檢測(cè)，經(jīng)過20余年的發(fā)展，已有13個(gè)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)將斑馬魚作為推薦物種用于測(cè)試水質(zhì)、農(nóng)藥、廢水和化學(xué)品的毒性(表6)。2015年11月原環(huán)境保護(hù)部發(fā)布《關(guān)于征求國(guó)家環(huán)境保護(hù)標(biāo)準(zhǔn)<城鎮(zhèn)污水處理廠污染物排放標(biāo)準(zhǔn)>(征求意見稿)意見的函》(環(huán)辦函〔2015〕1782號(hào))，并發(fā)布《城鎮(zhèn)污水處理廠污染物排放標(biāo)準(zhǔn)》征求意見稿和征求意見稿編制說明向社會(huì)征求意見，首次增加綜合毒性指標(biāo)來反映排放廢水的綜合毒性，包括發(fā)光細(xì)菌、大型溞、水藻和斑馬魚胚胎急性毒性。

3 展望(Outlook)

斑馬魚以其卓越的生物學(xué)特性成為毒理學(xué)研究中最重要的模式生物之一，是毒性測(cè)試和其他生物研究的哺乳動(dòng)物模型的一種可替代方案，其全生命周期毒性檢測(cè)技術(shù)已在重金屬、有機(jī)污染物及內(nèi)分泌干擾物質(zhì)等方面有了較為廣泛的研究，相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)正在推進(jìn)和完善。本文通過綜述斑馬魚全生命周期毒性測(cè)試的研究進(jìn)展，對(duì)未來開展相關(guān)研究提出以下幾點(diǎn)建議：

(1)斑馬魚不同的生命階段有不同的應(yīng)用，能滿足不同的需求，以特定的毒性終點(diǎn)來表征化合物的毒性。在胚胎階段確定更合適的分子標(biāo)記物作為毒性測(cè)試指標(biāo)及建立短期毒性測(cè)試和長(zhǎng)期毒性測(cè)試之間的關(guān)系，可初步判斷有毒化合物的毒性類型及潛在危害程度，從而使斑馬魚胚胎模型更好地為環(huán)境管理決策服務(wù)。

(2)近年來基因組學(xué)等組學(xué)技術(shù)興起，轉(zhuǎn)基因斑馬魚進(jìn)行環(huán)境污染物毒理學(xué)研究成為生態(tài)毒理學(xué)研究新熱點(diǎn)。隨著各種轉(zhuǎn)基因斑馬魚的開發(fā)和利用，其靈敏度和效率也不斷提高，利用斑馬魚的基因表達(dá)來研究毒性機(jī)制將更有利于以斑馬魚為模型研究環(huán)境污染物對(duì)人類健康的影響。

(3)目前國(guó)內(nèi)尚沒有一份針對(duì)某一化學(xué)品的斑馬魚整個(gè)生命周期和多階段毒性試驗(yàn)的標(biāo)準(zhǔn)規(guī)范，建立一套斑馬魚整個(gè)生命周期和多階段毒性試驗(yàn)的標(biāo)準(zhǔn)規(guī)范并對(duì)重金屬、內(nèi)分泌干擾物和有機(jī)污染物進(jìn)行毒性評(píng)價(jià)具有較大的研究?jī)r(jià)值，對(duì)有毒化合物的生態(tài)風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估以及水體污染的生物監(jiān)測(cè)具有一定的指導(dǎo)意義，這將在以后的生態(tài)毒理學(xué)領(lǐng)域中具有較大的研究?jī)r(jià)值。

致謝：感謝中國(guó)環(huán)境監(jiān)測(cè)總站金小偉高工在文章修改中給予的幫助。