李琳

（黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)，黑龍江 哈爾濱150000）

中藥包括大量的中草藥和中成藥, 每一種中成藥都可能含有許多假性活性成分[1]。由于中藥是來源復(fù)雜的多成分系統(tǒng),中藥中含有大量的其他成分, 使得生物活性成分的篩選和分析極為困難[2]。一直以來,傳統(tǒng)指紋圖譜經(jīng)常應(yīng)用。本文主要闡釋超臨界流體色譜(SFC)、高速逆流色譜(HSCCC)、X- 射線衍射(XRD)等新型技術(shù)的研究現(xiàn)狀。

新型技術(shù)研究進(jìn)展:

傳統(tǒng)技術(shù)多需采用儀器進(jìn)行分析,分析成本過高,分析時間較長,對環(huán)境不夠友好?，F(xiàn)在產(chǎn)生了一些技術(shù)對目前技術(shù)進(jìn)行了改進(jìn)。下面按不同的技術(shù)原理可將指紋圖譜分為以下種,既分配系數(shù)不同產(chǎn)生的遷移、基因探針雜交產(chǎn)生的帶圖紋、電荷的移動排列產(chǎn)生的反映。

上述方法通過查閱PubMed 數(shù)據(jù)庫發(fā)現(xiàn),在中藥研究中應(yīng)用SFC 技術(shù)有118 篇,HSCCC 技術(shù)86 篇,DFP 技術(shù)15 篇, NMR技術(shù)2093 篇,CE 技術(shù)717 篇, XRD 技術(shù)58 篇。研究還發(fā)現(xiàn)許多新型技術(shù)產(chǎn)生許多衍生技術(shù)例如DNA 分析技術(shù)包含RAPD、ISSR、AFLP 等,HSCCC 衍生技術(shù)有離線二維高速逆流色譜(2DHSCCC)、DPPH-HPLC、PH 區(qū)帶精制逆流色譜法等。

1 分配系數(shù)不同產(chǎn)生的遷移

SFC 法檢測方法多樣, 能分離大多數(shù)GC、HPLC 不能分離的低揮發(fā)性、無紫外吸收的物質(zhì),可以對大部分物質(zhì)進(jìn)行高效率的分離[3]。多用在中藥有效成分分離、手性藥物成分分析、藥物代謝成分分析等方面[4]。Huang Y 等[5]詳述了采用SFC 分離中藥中不同化合物的圖譜條件(檢測器、改性劑、溫度等)。HSCCC 樣品在螺旋管高速旋轉(zhuǎn)下達(dá)到的分離效果[6]。

2 基因探針雜交產(chǎn)生的帶圖紋

DFP 在分子水平上對中藥材表征,不受環(huán)境因素、形態(tài)、來源等影響,直接對原藥材進(jìn)行鑒定[7]。多用于中藥制劑前期原料藥的篩選階段。Zhipeng Zhang 等[8]采用psbA-trnH 序列對黃柏種類進(jìn)行追蹤并對關(guān)黃柏和黃柏進(jìn)行區(qū)分。通過HPLC 驗證實驗結(jié)果并發(fā)現(xiàn)DFP 在鑒定基因相似物種時比HPLC 更優(yōu)異。

3 電荷的移動和排列產(chǎn)生的反映

NMR 在鑒別異構(gòu)體上比傳統(tǒng)技術(shù)有優(yōu)勢,樣品可進(jìn)行回收、普適性強、速度快、環(huán)保[9]。Li AP 等[10]采用NMR 與多元統(tǒng)計相結(jié)合檢測野生和栽培的黃芪的代謝產(chǎn)物,發(fā)現(xiàn)區(qū)分二者的指標(biāo)。該方法可用于區(qū)分年份和栽培方式。

現(xiàn)在CE 上產(chǎn)生了毛細(xì)管篩分電泳(CSE)或毛細(xì)管凝膠電泳(CGE),具有操作自動化、靈敏度更高、分析更準(zhǔn)確等優(yōu)點,多用于復(fù)雜藥物的定性定量分析、藥性識別、幫助建立指紋圖譜[11]。Sun G, Yin R[12]對12 批柏子養(yǎng)心丸采用毛細(xì)管區(qū)帶電泳(CZE)技術(shù),建立指紋圖譜。XRD 是一種研究晶型的新技數(shù),可篩選優(yōu)勢藥物晶型。XRD 多在礦物藥和動物藥中應(yīng)用[13]。

現(xiàn)在產(chǎn)生的新型技術(shù)較傳統(tǒng)技術(shù)來說, 因流動相和流動相的特殊性, 更能針對物質(zhì)的性質(zhì)進(jìn)行分離, 分離度更高如SFC、HSCCC、HPCE 等技術(shù)。因大部分新型分析技術(shù)在分子或結(jié)構(gòu)上進(jìn)行研究在分析水平更深入, 相較于傳統(tǒng)技術(shù)在分析藥物時不易受外界因素的干擾,分析結(jié)果較為準(zhǔn)確?，F(xiàn)在人們對環(huán)保問題較為重視,新型技術(shù)的固定相與流動相較為特殊,因此還具有綠色環(huán)保的優(yōu)勢。