呂純陽 羅晶晶 石華 李明遠 江詠梅

根據(jù)WHO[1]最新公布的全球結核病報告，2018年全球14歲以下新發(fā)結核病患者約112萬例，占全年齡段新發(fā)患者例數(shù)的11.2%；全球17.3萬例患兒因結核病而死亡。我國作為結核病高發(fā)國家，據(jù)2018年最新報告顯示，新發(fā)結核病患者80萬例，其中兒童僅占1%，與估算結果相差較大[1]，主要原因是診斷和報告嚴重不足。兒童結核病常與其他常見兒童疾病有重疊，臨床表現(xiàn)和影像學特征常為非特異，且容易變化，因此實驗室檢查常是兒童結核病診斷的重要部分。與成人相比，兒童患者的標本采集較困難，且通常菌量較少，使得成人實驗室結核檢測方法在小兒患者的應用中缺乏敏感度。其次，兒童結核分枝桿菌感染易進展為活動性結核病，甚至是全身播散性結核病等嚴重感染，預后不佳。另外，兒童耐藥結核病的防治也是近年來關注的話題，早期規(guī)范的治療可以取得較好的療效和預后。所以及時準確的實驗室診斷結果對兒童結核病治療、改善兒童結核病的預后具有重要的意義?；趦和Y核病上述特點，其實驗室檢測選用的標本、方法和策略與成人不盡相同，筆者對兒童結核病實驗室診斷現(xiàn)有方法和新的進展進行綜述。

病原學方法

一、標本采集與處理

細菌病原學檢查被認為是結核病的確診依據(jù)，如組織活檢、涂片檢查和分枝桿菌培養(yǎng)?！禬S 288—2017肺結核診斷》規(guī)定，病原學確診肺結核需至少2份標本(涂片、組織學或培養(yǎng))陽性，兒童結核病診斷應重視胃液病原學檢查[2]，WHO則推薦2份病原學標本應在就診的同一天留取[3]。由于兒童標本中細菌負荷低且難以收集，上述方法在兒童中效果不佳，呼吸道標本涂片檢查的敏感度僅為17.1%～26.3%，其他體液標本涂片檢查結果幾乎為陰性[4-6]。若要提高細菌學檢查的敏感度，有研究者建議可使用多重取樣方法進行微生物診斷，包括連續(xù)收集生物樣本，如胃吸出物(GA)、鼻咽吸出物、痰液、支氣管肺泡灌洗液(BAL)，以及淋巴結吸出物、活組織檢查標本、腦脊液和尿液等[7]，并已有研究表明GA和BAL檢測相結合可以提高肺結核患兒的細菌學檢出率[8]。對于結核性腦膜炎等需要抽取腦脊液、漿膜腔積液的兒童常見肺外結核，呂翠環(huán)等[9]通過甩片離心法進行細菌的富集，可明顯提高涂片鏡檢的檢出率。

二、結核分枝桿菌培養(yǎng)

糞便、呼吸道標本、胃液等是兒童結核病實驗室診斷中常用的標本，但培養(yǎng)的陽性率也僅為24%、20%、25%～60%[6, 10-11]。結核分枝桿菌培養(yǎng)中，改良羅氏培養(yǎng)法耗時過長，一般需要4～8周，不利于早期發(fā)現(xiàn)結核病患者。美國研制的BACTEC MGIT 960分枝桿菌全自動液體培養(yǎng)系統(tǒng)，操作簡單，費用較低，與改良羅氏培養(yǎng)法符合率高，適合標本負載量大的實驗室或基層結核病防治機構應用[12]?？傮w來說，培養(yǎng)法的特異度非常高，但仍需要做好實驗室質量控制，提高檢測水平尤其是敏感度[13]。Parashar等[14]使用兒童胃液標本進行液體培養(yǎng)，其陽性率為21.5%，并建議在培養(yǎng)時不中和胃液，還可提高檢出率。白永鳳等[15]用該技術在涂片陰性的肺結核標本中進行檢測，其痰液培養(yǎng)結果與GeneXpert MTB/RIF(GeneXpert)敏感度差異無統(tǒng)計學意義，液體培養(yǎng)報陽平均耗時13.7 d，與傳統(tǒng)方法相比已大大縮短檢查時間。

分子生物學方法

一、結核分枝桿菌核酸檢測

最早用于兒童結核病核酸檢測方法的是聚合酶鏈式反應(PCR)，一般通過擴增結核分枝桿菌插入元件IS6110進行診斷。結核分枝桿菌RNA恒溫擴增實時檢測技術(SAT-TB)則以結核分枝桿菌16S rRNA為靶標，經恒溫RNA擴增技術和熒光探針雜交，對熒光信號進行實時監(jiān)測。Nicol等[16]使用口腔拭子進行PCR檢測，其敏感度為43%，特異度為93%，比采用痰標本進行GeneXpert檢測的敏感度(64%)低；在疑似結核病的兒童中，PCR檢測的敏感度為31%，特異度為93%，比采用痰標本進行GeneXpert檢測的敏感度(21%)高。SAT-TB較少用于兒童結核病診斷，但在少痰肺結核標本中，此方法的敏感度、特異度分別為50.75%和94.73%[17]。此外，PCR對于骨關節(jié)結核、脊柱結核的早期快速診斷方面明顯優(yōu)于鏡檢法和培養(yǎng)法，標本可來源于竇道分泌物、活檢組織等[18]。《WS 288—2017 肺結核診斷》[2]指出，分子生物學方法診斷結核病，在結核分枝桿菌核酸檢測結果為陽性的同時，具有任一影像學改變特征才可確診。核酸檢測在兒童胃液(81.51%)、誘導痰(47.62%)等載菌量較高的標本中敏感度均高于自然排痰的涂片及培養(yǎng)結果，且獲取結果快(2 d以內)，在兒童結核病檢測中具有較大的優(yōu)勢[19]。由此可見，在涂片、培養(yǎng)等結果陰性或結果等待時，可用該法對胃液等載菌量較高標本進行快速檢測，對提示診斷有一定作用。

二、GeneXpert檢測

GeneXpert是利用分子信標技術建立的檢測方法，自動、封閉擴增結核分枝桿菌rpoB基因的81 bp核心區(qū)域，可直接檢測結核分枝桿菌及其利福平耐藥性，2 h內即可得到檢測結果。GeneXpert被WHO推薦用于使用腦脊液、淋巴結或其他組織學標本診斷肺外結核，并建議在懷疑患有肺結核的兒童中，將呼吸道標本的GeneXpert結果用作初始診斷[20]。2018年，印度進行了一項比較研究，GeneXpert在所有臨床診斷的結核病患兒中敏感度為58.5%(呼吸道標本)，對培養(yǎng)陽性的患兒檢測的敏感度為81.8%[21]。Rachow 等[22]報道，在未取得培養(yǎng)證實的臨床結核病兒童中，GeneXpert的陽性率僅8.5%，于是對于兒童患者需進行多次取樣(不計標本類型)來提高檢出率。GeneXpert在糞便標本中檢測的敏感度和特異度分別為67%和99%[23]，以胃液為標本敏感度則能達到80%以上，在涂片培養(yǎng)均陽性的標本中甚至達到96.7%[24]。另外，以培養(yǎng)為金標準，GeneXpert檢測淋巴結活檢標本和腦脊液標本的敏感度均在80%以上，相比于培養(yǎng)PCR檢測有明顯優(yōu)勢，這對于兒童較為常見的肺外結核，如結核性淋巴結炎、結核性腦膜炎等的診斷是有益的[25]。GeneXpert的另一個作用是檢測利福平耐藥基因，而利福平耐藥通?？商崾井悷熾禄蚱渌€藥品的耐藥情況。與成人不同，兒童耐藥結核病若得到及時規(guī)范的治療，大多可以獲得較好的效果。在印度的一項兒童研究中[26]，GeneXpert檢測出利福平耐藥的敏感度為72.7%，避免了經驗用藥導致的更多耐藥菌的出現(xiàn)。GeneXpert檢測費用較表型藥敏試驗低，且報告時間快，生物安全要求低，特別適合在我國兒童醫(yī)院中推廣使用。

Xpert MTB/RIF Ultra 是在8個中、低收入國家中進行多中心研究后，于2017年推出的第二代檢測方法。與第一代相比其檢測盒用于DNA擴增的腔室增大，且增加了兩種結核分枝桿菌檢測分子靶點，其檢測下限為第一代的1/8(<15 CFU/ml vs 100～120 CFU/ml)，報陽、報陰時間也分別由原來的110 min縮短到77 min、66 min。Nicol等[27]對兒童痰標本的研究結果顯示，在76例細菌學證實的結核病患兒中，GeneXpert檢測的敏感度為63%，而Xpert MTB/RIF Ultra檢測的敏感度為74%。2019年的另一項兒童研究結果表明，與培養(yǎng)相比Xpert MTB/RIF Ultra檢測鼻咽抽吸物的敏感度和特異度分別為46%和98%，誘導痰的敏感度和特異度分別為74.3%和96.9%。而將鼻咽抽吸物和誘導痰組合可將敏感度提高至80%[28]。Xpert MTB/RIF Ultra對肺外結核標本、無創(chuàng)標本、糞便標本等的檢測具有積極意義。目前，WHO推薦的GeneXpert臨床應用范圍也適用于Xpert MTB/RIF Ultra，可在所有具有結核癥狀的成年人和兒童中作初始診斷，以及特殊的肺外標本(腦脊液、淋巴結和組織活檢標本)中檢測結核分枝桿菌[29]；但Xpert MTB/RIF Ultra 未被WHO推薦在尿液、糞便、血液等標本中應用[30]。在利福平耐藥檢測方面，Meta分析結果顯示[31]，Xpert MTB/RIF Ultra具有與GeneXpert相近的敏感度。

另外，仍需要研究評估GeneXpert對兒童結核病診斷、經驗治療、預后的影響程度。Rachow等[22]在研究中指出，若等待培養(yǎng)結果，有56.25%的感染兒童會因最初涂片陰性，在就診15～59 d后才能得到治療；若將GeneXpert陽性結果納入診斷標準，有25%的GeneXpert陽性兒童可以提前31 d接受抗結核藥物治療，有50%的GeneXpert陽性兒童至少可提前6 d開始接受抗結核藥物治療。

三、基因組測序與線性探針技術

全基因組測序(WGS)以及二代測序(NGS)等測序技術在快速準確鑒定菌種、檢測遺傳多態(tài)性和耐藥基因方面具有很大的臨床應用潛力[32]。兒童結核分枝桿菌感染者由于在社區(qū)與結核病患者的接觸史較成人單一，利用菌株分子生物學信息反向追蹤接觸史、傳播途徑等，對處理源頭病例、防止感染進一步擴散有積極意義?；谂囵B(yǎng)的結核分枝桿菌表型藥敏試驗較為困難，而菌株基因測序分析能檢測出更多未被報道的耐藥基因位點。2018年，Allam等[33]報道1例由WGS技術鑒定的南非患兒胃液、肺泡灌洗液標本中的古地分枝桿菌。Colman等[34]利用擴增子測序技術對176份痰液標本進行7種一、二線藥品的耐藥基因檢測，與表型藥敏試驗的檢測結果符合率達97%。WGS可直接利用痰液標本檢測，免去了培養(yǎng)步驟，可極大地縮短臨床等待時間。雖然WGS應用潛力較大，測序技術服務于臨床還需要在流程標準化、數(shù)據(jù)分析和注釋上達成更多共識。

線性探針技術(LPAs)是利用反向雜交的原理，將特定的寡核苷酸固定在膜條上的已知位置，與生物素標記的PCR產物雜交，形成的雜交體用比色方法檢測。這種方法不僅可檢測異煙肼、利福平耐藥基因，還可測定氟喹諾酮類、注射類二線藥品的耐藥性。LPAs可直接用標本進行檢測，但使用培養(yǎng)物可增加其檢測敏感度。雖然LPAs檢測利福平耐藥基因的準確性很高，但其會遺漏10%～15%的異煙肼耐藥陽性結果，若LPAs上顯示對利福平耐藥而對異煙肼則顯示敏感，則應進行異煙肼藥敏試驗[35]。LPAs被WHO推薦用于痰涂片陽性標本和分枝桿菌培養(yǎng)物中的利福平和異煙肼耐藥性及廣泛耐藥結核病(XDR-TB)的檢測[36]。GenoType MTBDRplus、GenoType MTBDRsl則是基于此類原理的檢測結核耐藥位點的商業(yè)化分子檢測平臺，可檢測利福平和異煙肼的耐藥性，并增加了gyrB、eis等新的檢測位點，使其能夠檢測氟喹諾酮類、二線注射類藥品的耐藥性。Gao等[37]的研究報道顯示，GenoType MTBDRsl檢測氟喹諾酮類和二線注射類藥品的耐藥性的敏感度分別為80.5%、80.7%。

四、其他分子生物學技術

環(huán)介導等溫擴增技術(LAMP)針對gyrB基因和IS6110插入序列，使用DNA聚合酶自旋環(huán)鏈置換介導的DNA富集進行檢測，該平臺設備較簡單，適用于基層醫(yī)療單位。LAMP在成人痰標本中，檢測的敏感度為72.6%，接近GeneXpert的水平[38]，但此項技術在兒童中的應用還有待進一步研究。

微陣列基因芯片技術是通過設計PCR擴增引物與寡核苷酸探針并在芯片上固定，繼而與靶DNA片段雜交，利用芯片掃描儀對雜交后的熒光信號進行掃描，繼而讀取出生物信息，多用于分枝桿菌菌種鑒定以及耐藥結核分枝桿菌的檢測。其鑒定結核分枝桿菌與非結核分枝桿菌(NTM)的準確率分別達到92.31%、96.34%，并且具有簡便快速的優(yōu)點[39]。何珍和王璞[40]在對648例成人肺結核的研究中發(fā)現(xiàn)，使用痰液、肺泡灌洗液等標本，芯片法檢測的敏感度達86.9%，高于培養(yǎng)(76.6%)；但在兒童結核病的研究中，雖然基因芯片技術敏感度仍高于培養(yǎng)和涂片染色，但也僅有24.3%，可能與兒童結核病本身少菌的特點和標本采集有關[6]。目前常用的微陣列平臺是Affymetrix?GeneChip?系列平臺，其檢測出利福平耐藥結核病、異煙肼耐藥結核病、耐多藥結核病(MDR-TB)的敏感度分別為89%、79%、79%[41]。

MeltPro?TB/STR則是結合結核分枝桿菌鑒定、結核分枝桿菌耐藥檢測、分子分型的一體化檢測平臺，其基于探針-靶雜交體的熱變性產生的解鏈溫度差異，對突變體和野生型DNA熔解溫度(Tm值)差異進行分析，其中結核耐藥檢測試劑已獲國家食品藥品監(jiān)督管理局認證批準，用于氟喹諾酮類藥物、鏈霉素、乙胺丁醇的耐藥檢測，其一線藥物檢測的敏感度為87%～89%[41]。

還有一些其他輔助診斷結核病的分子生物學方法，如檢測感染者外周血和體液中的miRNAs和轉錄RNA等。2014年，在一項納入非洲2000余例結核病患兒的研究中，使用了51種不同RNA組成的表達譜診斷模型，在培養(yǎng)陽性、高度可疑而培養(yǎng)陰性的患兒中，敏感度均達到60%以上，高于GeneXpert檢測[42]。2017年，Pan等[43]評估了miR-29a對小兒結核性腦膜炎診斷的敏感度，當標本為外周血單核細胞，敏感度、特異度和曲線下面積(AUC)分別為67.20%、88.50%和0.852；若標本為腦脊液，敏感度、特異度和AUC分別為81.10%、90.00%和0.890，兩種標本聯(lián)合檢測則可分別提高到84.40%、95.38%和0.934[43]。

免疫學方法

一、結核菌素皮膚試驗(TST)

TST試驗是檢測機體對結核免疫反應的經典方法，雖在BCG接種較為普及或NTM感染率較高的地區(qū)，該試驗有較高的假陽性率，但因其價格便宜，容易操作，故TST對兒童結核病仍有重要的輔助診斷價值。年齡、BCG接種情況、與活動性結核病患者的密切接觸史是目前研究較多的與TST試驗陽性率相關的獨立因素，但祁雪等[44]的研究表明，TST檢測的陽性率只與活動性結核病患者接觸程度有關，而與年齡、BCG接種情況無關。WHO仍推薦中、低收入國家使用TST進行結核病患兒的診斷[45]，這也適合我國國情，故TST仍是我國診斷結核分枝桿菌感染的主流免疫學方法。2017年的衛(wèi)生行業(yè)新標準中，詳細規(guī)定了TST在不同疫苗接種、活動接觸史、免疫功能情況下的陽性判斷標準[2]。

二、γ干擾素釋放試驗(IGRA)

IGRA包括結核感染T細胞斑點試驗(T-SPOT.TB)和QuantiFERON-TB Gold In-Tube(QFT-GIT)，原理是利用6 kD 早期分泌靶向抗原(ESAT-6)及10 kD培養(yǎng)濾液蛋白(CFP-10)刺激外周血中特異性T淋巴細胞釋放IFN-γ，然后定量檢測釋放的IFN-γ或產生IFN-γ的T淋巴細胞數(shù)。與TST相同，IGRA無法區(qū)分結核分枝桿菌感染和結核病，陰性結果不能排除疑似結核感染或疾病的可能性[4]。與培養(yǎng)結果相比，IGRA在<2歲、2～歲和5～16歲兒童的敏感度分別為93.9%、100.0%和94.4%，高于成人(81.0%)，且不受病變部位的影響[7]。Pang等[46]的研究顯示，對疑似結核性胸膜炎的患者，測定胸腔積液的IGRA較血液敏感度更高。在另一些研究中，IRGA顯示出潛在的其他檢驗功能，如Andrews等[47]報道，若結核分枝桿菌感染后無癥狀嬰兒IFN-γ水平從陰性轉換到很高水平(>4倍)，其結核病風險是未升高者的40倍，高IGRA值可能是嬰兒亞臨床感染的標志。建議臨床醫(yī)生注意隨訪、觀察兒童患者IGRA水平的動態(tài)變化，更好地判斷兒童感染狀態(tài)。Lombardi等[48]和Petrucci等[49]的研究結果提示, 對5歲以下(尤其2歲以下)兒童，可優(yōu)先采用IGRA，并結合暴露史、BCG接種史等進行感染狀態(tài)診斷。

目前，已有學者研究第二代T-SPOT.TB試劑，因加入更多種類的抗原，使得第二代試劑敏感度較第一代有所提高。如Whitworth等[50]以ESAT-6、CFP-10、結核特異性抗原Rv3615、Rv3879c為IGRA抗原研制的第二代T-SPOT.TB試劑，該試劑在成年培陽結核病患者中的敏感度達94%；若加入疑似結核病患者，則敏感度為89.2%，高于現(xiàn)有的T-SPOT.TB試劑檢測的敏感度，但其特異度略低于第一代T-SPOT.TB。此外，目前已獲美國食品藥品監(jiān)督管理局(FDA)批準的第二代QFT-GIT 試劑QuantiFERON-TB Gold Plus，是在第一代基礎上增加了測定CD8+T淋巴細胞釋放的IFN-γ的試驗管，在兒童中的研究結果顯示，雖然其對肺結核檢測的敏感度達84.2%，但對肺外結核的敏感度僅為14.3%[51]。

三、抗原檢測技術與T細胞標志物

針對兒童結核分枝桿菌感染標本中含菌量低、肺外結核較多的情況，并克服宿主預存抗體掩蓋細菌抗原以及NTM同源抗原干擾等缺點，Liu等[52]利用抗體偶聯(lián)的多孔盤狀納米顆粒(NanoDisks)與感染者血清中的CFP-10和ESAT-6蛋白結合，再通過基質輔助-激光解析電離飛行時間質譜(MALDI-TOF)技術對其進行定量檢測。結果顯示該技術檢測培養(yǎng)陽性的結核病患者敏感度達91.6%，培養(yǎng)陰性的少菌樣本敏感度也達到85.3%。診斷肺結核的敏感度為88%，肺外結核為90%。J?rstad等[53]利用免疫組化方法，對132份肺外結核標本中的分泌蛋白MPT64抗原進行檢測，其中41例兒童患者標本診斷的敏感度達100%。Gautam 等[54]采集280例肺內外結核病患兒的尿液標本，檢測其中的脂阿拉伯糖原抗原，診斷敏感度為73.2%，仍高于痰、胃液和穿刺活檢標本的GeneXpert和培養(yǎng)?？乖瓩z測方法具有敏感度高的優(yōu)勢，尤其是在肺外結核、含菌量少的標本中也有較好的效果，在未來兒童結核病實驗室診斷中具有較好的應用潛力。

此外，Tebruegge等[55]的研究發(fā)現(xiàn)，結核分枝桿菌特異性CD4+T淋巴細胞的數(shù)量和功能特征，在結核分枝桿菌感染和未感染的兒童之間、潛伏和活動性感染兒童之間差異有統(tǒng)計學意義，活動性感染患兒分枝桿菌特異性單陽性(TNF-α+)和雙陽性(IFN-γ+/TNF-α+)CD4+T淋巴細胞的比例明顯高于潛伏感染和未感染者。此外，表達IL-17的CD4+T淋巴細胞在活動性感染患兒中也高于其他兩組[55]，為區(qū)分兒童結核感染類型提供了新的思路。大于1歲但小于5歲的幼兒在感染結核分枝桿菌后，容易在短時間內從潛伏感染發(fā)展為活動性結核病，故篩查潛伏感染者或/和難以獲得病原學證據(jù)的患兒方面，免疫學方法具有較好的應用價值。

其他診斷新方法與聯(lián)合應用

除上述介紹的實驗診斷方法外，一些具有應用潛力的新方法目前也取得了可喜的進展。如TruTip工作站是進行核酸提取純化的自動化平臺，可從痰液中提取結核分枝桿菌DNA。該平臺可以連接到封閉的擴增子系統(tǒng)，用于擴增和基于微陣列檢測結核分枝桿菌以及許多與耐藥相關的基因。該方法檢測結核病患兒糞便標本的敏感度為59%，對涂陰培陽患者檢測的敏感度為40%[56]。Lyu等[57]用熒光底物探針技術，先將30 pl的液滴再次分散，使每個小液滴中包含單個細菌，再對其中結核分枝桿菌分泌的BlaC(一種高度保守、特異的A類β-內酰胺酶)進行定量測定，其能夠檢測出低至10 CFU/ml的細菌濃度，但其在臨床標本中的應用還需進一步探索。Cheng等[58]研究報告了雙靶向小分子探針CDG-DNB3，該探針在BlaC活化后發(fā)出熒光，結合自動的微流體芯片已實現(xiàn)了BCG的快速標記和自動定量。結核分枝桿菌蛋白芯片檢測方法是一種快速固相膜檢測手段，利用微陣列技術將純化阿拉伯甘露糖(LAM)、相對分子質量為16 000(rTPA16)和38 000(rTPA38)的結核分枝桿菌重組蛋白3種抗原固定于同一膜片上，與血清結合后，再以膠體金作為顯色劑直接在膜上顯色。當任一種抗體檢測為陽性時，均可確定為結核分枝桿菌感染，在兒童患者中檢測的敏感度為46.7%，特異度為90%[59]。總之，檢測宿主在感染結核分枝桿菌后的基因轉錄、蛋白產生、標志物的變化等是診斷結核分枝桿菌感染的新策略，適用于外周血、唾液或尿液等非痰標本檢測，這對于肺外結核發(fā)病較多、標本中含菌量少及咳痰困難的兒童感染者，均有重要的應用價值。

此外，不同實驗診斷技術聯(lián)合應用對提高兒童結核病的診斷效率有重要意義。除上述多次取樣、同一方法聯(lián)合不同標本類型檢測外，還可采取多種檢測方法，結合不同檢測方法的結果對及時準確診斷出兒童結核病幫助較大，并且容易實施。Rachow等[22]的研究中，在涂片、培養(yǎng)、GeneXpert檢測兒童痰標本的敏感度均低于60%，但3種方法聯(lián)合使用檢測的敏感度則提高到77.9%。Chiappini等[60]報道了胃液標本研究：當以臨床診斷作參考時，PCR檢測的敏感度為22.5%，高于涂片(12.7%)，低于培養(yǎng)(39.2%)；若同時使用涂片、培養(yǎng)和PCR，可以將胃液檢測敏感度提高到44.1%。Wang等[5]報道聯(lián)合組織活檢和培養(yǎng)診斷兒童結核性胸膜炎的敏感度接近100%。Pan等[61]研究發(fā)現(xiàn)，在痰涂片陰性情況下，聯(lián)合GeneXpert檢測后敏感度可提高28.6%。Elzi等[62]對結核病并發(fā)HIV感染的患者進行了研究，結果顯示聯(lián)合TST和IGRA檢測的敏感度(67%)高于單獨的IGRA檢測(39%)和TST試驗(50%)，且不受CD4+T淋巴細胞計數(shù)影響。由此可見，在現(xiàn)有實驗室條件情況下，增加采樣次數(shù)、標本類型、檢測方法的使用，再結合臨床表現(xiàn)和接觸史等暴露因素的調查，兒童結核病的診斷將更加快速準確。

小 結

實驗室檢查在兒童結核病診斷中具有重要作用，準確、及時地病原診斷對兒童結核病的治療和預后均具有重要意義。筆者部分列舉的新方法僅從成人結核病診斷結果中推斷出兒童的適用性，故目前亟需以兒童為研究對象來評估這些新技術與方法的診斷效能。鑒于兒童結核病自身特點，與成人結核病的實驗室診斷相比，兒童結核病的檢測應強調重復多次取樣、多種標本類型和檢測方法聯(lián)合運用、重視分子生物學和免疫學方法的檢測結果；同時提高無創(chuàng)、易獲取標本類型(如呼吸道拭子、尿液、糞便等)在不同檢測技術與方法中的敏感度。另外，未來還需要進行更多兒童結核病診斷技術與方法的專門研究，以便實驗室檢測能夠在兒童結核病診治中發(fā)揮更重要的作用。