常婭莉 高嶺

肺炎支原體(MP)是介于病毒和細(xì)菌之間的原核細(xì)胞型微生物[1]。MP主要通過呼吸道的飛沫進(jìn)行傳播，是引發(fā)小兒肺炎、支氣管炎等下呼吸道感染的常見病原菌[2]。MP感染在青少年更容易發(fā)生，數(shù)據(jù)[3]統(tǒng)計(jì)顯示30%的呼吸道感染患兒伴有MP感染。MP感染者除了呼吸道感染外，還可能累及其他器官系統(tǒng)，引發(fā)腦膜炎、心包炎等其他感染疾病，嚴(yán)重影響兒童的身體健康。因此有效檢出MP感染，對(duì)于患兒的治療和預(yù)后均有重要意義[4]。MP感染檢測(cè)的常用方法包括血清學(xué)檢測(cè)、快速培養(yǎng)法以及核酸檢測(cè)法等，但是快速培養(yǎng)法中樣本中的其他病原體會(huì)對(duì)結(jié)果造成干擾，且耗時(shí)，操作繁瑣，而血清學(xué)檢測(cè)時(shí)，檢測(cè)結(jié)果與患者自身的免疫功能和抗體的轉(zhuǎn)化有一定的相關(guān)性，假陰性的概率較高[5]。肺炎支原體DNA實(shí)時(shí)熒光定量PCR(MP-DNA) 法是臨床應(yīng)用較多的一種核酸檢測(cè)方法，僅需少量DNA片段即能進(jìn)行擴(kuò)增檢測(cè)，靈敏度佳，但是仍存在一定比例的假陰性、假陽(yáng)性[6]。肺炎支原體RNA實(shí)時(shí)熒光核酸恒溫?cái)U(kuò)增檢測(cè)技術(shù)(MP-SAT)是一種新型的核酸檢測(cè)法，它以活菌中的特異性RNA片段進(jìn)行擴(kuò)增檢測(cè)，具有操作簡(jiǎn)便，靈敏度高的特點(diǎn)，但是在臨床上相關(guān)應(yīng)用研究不多[7]。本次研究對(duì)MP的RNA和DNA的檢測(cè)在兒童支原體感染診斷中的應(yīng)用效果進(jìn)行了評(píng)價(jià)比較。現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2017年10月至2018年12月我院收治的86例肺炎患兒作為研究對(duì)象。其中男47例，女39例。年齡0.3～15歲，平均年齡(6.9±2.3)歲。本次研究已經(jīng)醫(yī)院的醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)通過。病例納入標(biāo)準(zhǔn)：經(jīng)臨床診斷符合獲得性肺炎的相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)；年齡≤15歲；之前4周內(nèi)未接受到抗生素治療；患者的家屬均知情同意并簽署同意書。病例排除標(biāo)準(zhǔn)：存在心肝腎等重要臟器功能障礙者；合并有肺結(jié)核、哮喘等其他肺部器官疾病者；無法配合完成治療和隨訪者。

1.2 方法 對(duì)所有患兒在入院24 h內(nèi)進(jìn)行采集咽拭子標(biāo)本，并分別用MP-SAT進(jìn)行檢測(cè)RNA和MP-DNA法進(jìn)行檢測(cè)DNA。采用美國(guó)ABI公司的7500型實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀進(jìn)行檢測(cè)RNA和DNA。其中MP-SAT試劑盒和MP-DNA試劑盒分別由上海仁度生物技術(shù)有限公司和中山大學(xué)達(dá)安基因股份有限公司提供。嚴(yán)格按照檢測(cè)試劑盒的相關(guān)操作說明進(jìn)行操作，其MP-SAT的判讀標(biāo)準(zhǔn)為：dt值≤35為陽(yáng)性，dt值≥40為陰性，介于兩者之前的對(duì)樣本重新擴(kuò)增后，以dt值≤35為陽(yáng)性，dt＞35為陰性。MP-DNA的判讀標(biāo)準(zhǔn)為：ct值＜30為陽(yáng)性；ct值≥30為陰性。

根據(jù)患兒的臨床癥狀、體征以及其他輔助檢查等方式進(jìn)行綜合診斷，明確患兒MP感染的情況。所有患兒均采用大環(huán)內(nèi)酯抗生素進(jìn)行治療，對(duì)于確診為MP感染的患兒在治療期間的1周、2周以及3周進(jìn)行重復(fù)檢測(cè)MP的RNA和DNA。

1.3 觀察指標(biāo) 以最終綜合診斷的患兒MP感染結(jié)果作為診斷金標(biāo)準(zhǔn)，比較MP的RNA和DNA的檢測(cè)在兒童支原體感染診斷中的應(yīng)用效果，計(jì)算其診斷的靈敏度、特異度以及準(zhǔn)確率。靈敏度＝真陽(yáng)性人數(shù)/(真陽(yáng)性人數(shù)＋假陰性人數(shù))×100%。特異度＝真陰性人數(shù)/(真陰性人數(shù)＋假陽(yáng)性人數(shù))×100%。準(zhǔn)確性＝(真陽(yáng)性人數(shù)＋真陰性人數(shù))/(真陽(yáng)性人數(shù)＋假陰性人數(shù)＋真陰性人數(shù)＋假陽(yáng)性人數(shù))×100%。并統(tǒng)計(jì)比較MP感染陽(yáng)性患兒在治療期間不同時(shí)間點(diǎn)的RNA和DNA的檢測(cè)的陽(yáng)性率變化情況。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 22.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行處理，計(jì)量數(shù)據(jù)采用(±s)表示，組間比較采用t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)數(shù)據(jù)采用率進(jìn)行表示，組間比較采用卡方檢驗(yàn)，P＜0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 RNA和DNA檢測(cè)在兒童MP感染診斷中的應(yīng)用效果比較 經(jīng)最終診斷，86例患兒中MP感染陽(yáng)性49例，MP感染陰性37例。其中MP-SAT檢測(cè)診斷的MP感染陽(yáng)性者43例，陰性34例；MP-DNA檢測(cè)的MP感染陽(yáng)性者31例，陰性27例(表1)。

表1 RNA和DNA檢測(cè)在兒童MP 感染診斷中的應(yīng)用效果比較(n)

2.2 RNA和DNA檢測(cè)在兒童MP感染診斷的診斷效能分析 MP-SAT檢測(cè)診斷兒童MP感染的靈敏度、特異度、準(zhǔn)確性分別為87.76%、91.89%、89.53%，MP-DNA檢測(cè)診斷兒童MP感染的靈敏度、特異度、準(zhǔn)確性分別為63.27%、72.97%、67.74%，MP-SAT檢測(cè)診斷的靈敏度、特異度、準(zhǔn)確性均高于MP-DNA檢測(cè)診斷，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05，表2)。

表2 RNA和DNA檢測(cè)在兒童MP 感染診斷的診斷效能分析 單位：%

3 討論

在小兒肺炎的致病菌中，肺炎支原體的所占比例僅次于肺炎鏈球菌，因此肺炎支原體肺炎(MPP)是常見的小兒肺炎類型之一[8]。MPP患兒沒有典型性的臨床癥狀，多數(shù)表現(xiàn)為咳嗽、發(fā)熱、頭疼等，嚴(yán)重的情況下還會(huì)引發(fā)多系統(tǒng)的肺外感染癥狀。由于MP缺乏細(xì)胞壁，因此針對(duì)細(xì)胞壁合成進(jìn)行抑制發(fā)揮抗菌機(jī)制的萬古霉素以及β- 內(nèi)酰胺類抗生素治療的效果并不理想，需要采用阿奇霉素等大環(huán)內(nèi)酯類抗生素治療，以控制細(xì)胞內(nèi)的蛋白質(zhì)合成[9]。因此不同的肺炎類型的治療方案不同，需要及時(shí)明確診斷MP感染，以便為臨床治療提供參考依據(jù)。支原體培養(yǎng)法是MP感染檢測(cè)的金標(biāo)準(zhǔn)，但是培養(yǎng)周期長(zhǎng)，操作繁雜，不能滿足臨床快速檢測(cè)的要求[10]。MP-抗體的血清學(xué)檢測(cè)存在一定的窗口期，在感染早期約1周內(nèi)的敏感性較低，且容易受到機(jī)體免疫水平影響[11]。核酸檢測(cè)也是MP感染檢測(cè)的一種方法，其中以MP-DNA法檢測(cè)最為常用。MP-DNA法對(duì)基因的DNA片段進(jìn)行擴(kuò)增和檢測(cè)，與常規(guī)的血清學(xué)檢測(cè)相比，靈敏度高[12]。但是DNA片段在進(jìn)行PCR擴(kuò)增時(shí)，若操作不規(guī)范可能造成感染，出現(xiàn)假陽(yáng)性、假陰性，影響診斷的準(zhǔn)確性。SAT是一種新型的核酸檢測(cè)技術(shù)，SAT以活體中的RNA作為靶目標(biāo)，采用M-MLV反轉(zhuǎn)錄酶以及T7RNA多聚酶等進(jìn)行恒溫的擴(kuò)增，從而對(duì)病原菌RNA進(jìn)行檢測(cè)[13]。SAT技術(shù)在結(jié)核分枝桿菌、腸道病毒71型等的檢測(cè)中均得到了較好的應(yīng)用效果，其中診斷效能優(yōu)于血清MP抗體檢測(cè)。且RNA只能在病原菌活體中存在，MP細(xì)胞死亡后，細(xì)胞內(nèi)的RNA會(huì)快速降解，而DNA的降解周期較長(zhǎng)，因此應(yīng)用SAT方法進(jìn)行MP檢測(cè)，還能較好的提示MP感染的治療好轉(zhuǎn)情況[14]。本次研究對(duì)MP的RNA和DNA的檢測(cè)在兒童支原體感染診斷中的應(yīng)用效果進(jìn)行了評(píng)價(jià)比較，結(jié)果中MP-SAT檢測(cè)診斷兒童MP感染的靈敏度、特異度、準(zhǔn)確性分別為87.76%、91.89%、89.53%，高于常規(guī)的MP-DNA法檢測(cè)。結(jié)果 與林苗苗等[15]的研究一致，顯示在兒童支原體感染的診斷中，RNA實(shí)時(shí)檢測(cè)相對(duì)而言檢測(cè)的靈敏度和準(zhǔn)確性更高，應(yīng)用價(jià)值良好。

綜上所述，在兒童支原體感染的診斷中，RNA實(shí)時(shí)檢測(cè)相對(duì)而言檢測(cè)的靈敏度和準(zhǔn)確性更高，應(yīng)用價(jià)值良好。