吳彩娟，錢榮花，程彩花，張炎林，胡光明，朱木富

（杭州蠶種場，浙江 杭州 310021）

在我國已經(jīng)建立了以生產(chǎn)“無毒”（未感染家蠶微粒子病）蠶種為關鍵，防治病原污染擴散為基礎，有效消毒為重點的綜合防治家蠶微粒子病技術體系。但是，隨著我國城市化的發(fā)展，農(nóng)村經(jīng)濟結構的調(diào)整，蠶種生產(chǎn)形式的變遷，以及原蠶區(qū)農(nóng)村勞動力的短缺，導致蠶種生產(chǎn)轉(zhuǎn)型升級過程中，家蠶微粒子病流行的防控遭遇諸多新的問題，主要表現(xiàn)為原有微粒子病防控技術規(guī)程中的相關技術，對現(xiàn)有生產(chǎn)形式的不適應和到位率低兩大問題。通過對不同流行狀態(tài)和生產(chǎn)條件下的原蠶生產(chǎn)點的生產(chǎn)過程監(jiān)控檢測；采用不同強度的遲眠蠶和種繭淘汰率、桑葉葉面消毒和桑園治蟲技術措施，比較和分析流行因子與檢疫結果（國家強制實施的蠶種質(zhì)量檢驗與檢疫結果）的關聯(lián)，初步解明流行因子與檢疫結果及微粒子病防控主要技術措施及強度間的關系，建立基于生產(chǎn)過程流行因子監(jiān)控生產(chǎn)技術規(guī)程。為提高蠶種生產(chǎn)安全性、經(jīng)濟效益和保障蠶種供應提供先進技術或支撐。

蠶桑產(chǎn)業(yè)是杭州市的優(yōu)勢和特色農(nóng)業(yè)之一，現(xiàn)有桑園約3333.33hm2，養(yǎng)蠶農(nóng)戶約5萬戶，年總飼養(yǎng)蠶種量約為10萬張蠶種，年蠶繭產(chǎn)量約5000t，年蠶繭產(chǎn)值約2億多元。杭州西部縣市（淳安、建德、桐廬和臨安）作為浙江省“東桑西進工程”的實施縣市，蠶桑產(chǎn)業(yè)已成為農(nóng)業(yè)增效、農(nóng)民增收的重要支柱產(chǎn)業(yè)之一，也是其中一大批農(nóng)戶的主要經(jīng)濟來源。在提高農(nóng)民經(jīng)濟收入的同時，栽桑養(yǎng)蠶在維系區(qū)域生態(tài)方面發(fā)揮了重要的作用。杭州蠶種場每年生產(chǎn)雜交蠶種約10萬張，年產(chǎn)值約500萬元，更為重要的是為保障杭州市5萬戶蠶農(nóng)生產(chǎn)蠶繭用種提供了安全足量用種的需要。高效生態(tài)農(nóng)業(yè)是浙江省現(xiàn)代農(nóng)業(yè)發(fā)展的必然途徑，也是蠶種制造業(yè)必須遵循的發(fā)展道路，高效的家蠶微粒子病綜合防治技術不僅可以減少蠶種場的直接經(jīng)濟損失，也可提高勞動工效和減低材料和能源消耗，更為重要的是保障蠶農(nóng)蠶繭生產(chǎn)的安全。該項研究不僅在杭州市蠶種生產(chǎn)具有良好的市場需求，以及良好的經(jīng)濟、社會和生態(tài)效益，對全省或全國的蠶種生產(chǎn)都有積極影響。

家蠶微粒子病檢測技術是該病防治中的一項關鍵性技術，隨著PCR技術的發(fā)展，使該項技術在家蠶微粒子病的檢測中應用成為可能。綜述了有關應用PCR技術檢測家蠶微粒子病的研究，從模板核酸制備和引物設計等方面分析提高靈敏度和解決特異性問題的途徑。提出蠶種生產(chǎn)單位承擔母蛾的微粒子病檢驗，省級檢驗檢疫機構承擔蠶種（成品卵）的家蠶微粒子病的監(jiān)督檢驗檢疫，是PCR技術在蠶種生產(chǎn)質(zhì)量檢驗中實用化的重要前提。

1 家蠶微粒子病檢測技術的研究和實用化方案

主要研究適用于大規(guī)模常規(guī)PCR檢測遲眠蠶、桑蟲和種繭（蛹或蛾）等樣本的制作技術，為高效實施檢測和獲取較大規(guī)模數(shù)據(jù)，增強流行因子分析的準確性提供有效基礎；解決復雜樣本（遲眠蠶、桑蟲和種繭）條件對PCR檢測技術靈敏度的影響，以及檢測穩(wěn)定性的評估；在上述兩方面研究的基礎上建立熟化技術。

在具體細節(jié)上，包括核酸獲取方法、引物設計和擴增效果評價、靈敏度和穩(wěn)定性的測試等。

2 遲眠蠶、桑蟲和環(huán)境樣本等流行相關因子的檢測和流行程度分析

研究和建立抽樣技術，主要包括不同流行狀態(tài)原蠶點（或原蠶飼養(yǎng)戶）遲眠蠶、桑蟲和環(huán)境樣本等的抽取方案制定；并根據(jù)每季蠶種生產(chǎn)中，對流行因子分布規(guī)律、采取不同強度控制技術、生產(chǎn)蠶種的母蛾檢疫結果三者之間的進行協(xié)同分析，在據(jù)此調(diào)整流行因子控制技術強度；實施2～3個輪回修正完善。

3 研究生產(chǎn)過程流行因子控制技術的實施強度

研究和確定遲眠蠶淘汰、桑葉葉面消毒、環(huán)境消毒和種繭淘汰的技術選定，在消毒方面包括消毒藥劑、消毒時間和消毒方法等；在淘汰方面包括不同時間段和與檢測監(jiān)控的及時配套等。采用分等級與頻率為參數(shù)的防控技術強度實施策略，并制定各單項防控技術的技術實施細則。

同時，利用研發(fā)的檢測技術對防控技術實施進行過程性效果評價。

4 研究基于生產(chǎn)過程流行因子監(jiān)控的家蠶微粒子病防控生產(chǎn)技術規(guī)程

在實現(xiàn)高效快速檢測的基礎上，根據(jù)流行因子與防控技術相互關系研究的主要技術參數(shù)及變化規(guī)律，制定基于生產(chǎn)過程流行因子監(jiān)控的家蠶微粒子病防控生產(chǎn)技術規(guī)程。

5 技術路線

采用家蠶微粒子病流行病學、PCR檢測技術、桑園蟲害治理和消毒防病技術、原種試驗和蠶種制造等新技術與傳統(tǒng)技術有機結合的技術路線。具體參見下圖：