張靜　朱雅琴　祝宇龍

摘要? [目的]探討鐵皮石斛及其凍干粉對(duì)提升免疫抑制小鼠的免疫調(diào)節(jié)作用差異。[方法]120只SPF級(jí)昆明雄性小鼠分為空白對(duì)照組、環(huán)磷酰胺模型組、鐵皮石斛組和鐵皮石斛凍干粉組。兩組給藥組連續(xù)灌胃30 d后，24 h內(nèi)模型組、鐵皮石斛及其凍干粉組一次性腹腔注射200 mg/kg的環(huán)磷酰胺免疫抑制造模。試驗(yàn)結(jié)束后測(cè)定胸腺系數(shù)、脾臟系數(shù)、足趾腫脹度，以及血清中的細(xì)胞因子IFN-γ、IL-2和IL-6的含量。[結(jié)果]鐵皮石斛及其凍干粉均可以升高免疫抑制小鼠的胸腺和脾臟系數(shù);增加免疫抑制小鼠的足趾腫脹度;上調(diào)免疫抑制小鼠血清中TNF-α、IFN-γ、IL-2和IL-6的水平。[結(jié)論]鐵皮石斛及其凍干粉對(duì)環(huán)磷酰胺引起的免疫抑制具有明顯的改善作用，且后者藥效更好。

關(guān)鍵詞? 鐵皮石斛;凍干粉;環(huán)磷酰胺;細(xì)胞因子;免疫調(diào)節(jié)

中圖分類號(hào)? R285.5??? 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼? A

文章編號(hào)? 0517-6611（2019）24-0180-02

doi：10.3969/j.issn.0517-6611.2019.24.054

Study on the Difference of Immunomodulatory Effects of Dendrobium officinale and Its Lyophilized Power on Immunosuppressed Mice

ZHANG Jing1，2，3，4，ZHU Ya-qin1，2，4，ZHU Yu-long1，2，4? （1.School of Pharmacy，Anhui University of Chinese Medicine，Hefei，Anhui 230012;2.Anhui Province Key Laboratory of Chinese Medicine Formula，Hefei，Anhui 230012;3.Institute of Pharmaceutics，Anhui Academy of Chinese Medicine，Hefei，Anhui 230012;4.Synergetic Innovation Center of Anhui Authentic Chinese Medicine Quality Improvement，Hefei，Anhui 230012）

Abstract? [Objective]The research aimed to study the difference in immunomodulatory effects of Dendrobium officinale and its lyophilized power on immunosuppressed mice.[Method]120 SPF Kunming male mice were divided into control group，cyclophosphamide modle group，Dendrobium officinale and its lyophilized power group.Dendrobium officinale and its lyophilized power groups were continuously administrated for 30 days.At 24 hours before the end of the experiment，the model group，Dendrobium officinale and its lyophilized power group were intraperitoneally injected with 200 mg/kg cyclophosphamide.At the end of the experiment，the thymus index，spleen index，DTH，and serum cytokines IFN-γ，IL-2 and IL-6 were measured.[Result]Dendrobium officinale and its lyophilized power increased the thymus index，spleen index and toe swelling，up-regulated the levels of IFN-γ，IL-2 and IL-6 in the serum of immunosuppressed mice.[Conclusion]Dendrobium officinale and its lyophilized power has a significant improvement on the immunosuppression caused by cyclophosphamide，and the latter is better.

Key words? Dendrobium officinale;Lyophilized power;Cyclophosphamide;Cytokine;Immunoregulation

基金項(xiàng)目? 安徽省科技重大專項(xiàng)（17030801015）。

作者簡(jiǎn)介? 張靜（1996—），女，安徽宿州人，碩士研究生，研究方向：藥劑學(xué)。

收稿日期? 2019-07-02

鐵皮石斛（Dendrobium officinale Kimura et Migo）為蘭科石斛屬植物，位列中華九大仙草之首，是一種名貴的中草藥。鐵皮石斛中主要活性成分為多糖、生物堿、氨基酸、芐類及其衍生物、揮發(fā)性成分以及微量元素等[1-4]。鐵皮石斛因其具有免疫調(diào)節(jié)作用、抗腫瘤和抗氧化等特性[5-7]，越來(lái)越受到現(xiàn)代醫(yī)學(xué)的關(guān)注。而在實(shí)際應(yīng)用中，鐵皮石斛的應(yīng)用人群往往是免疫力低下者。鐵皮石斛凍干粉不僅最大限度地保留了鐵皮石斛有效成分的生物活性和臨床有效性，并且生物活性更高、臨床有效性更好，更容易被人體消化吸收，能夠更好地發(fā)揮藥效。環(huán)磷酰胺（cyclophosphamide，CP）屬于烷化劑類免疫抑制劑，是可阻斷復(fù)制，破壞DNA結(jié)構(gòu)從而導(dǎo)致細(xì)胞死亡的一種細(xì)胞毒性化合物。因此為了探討鐵皮石斛及其凍干粉在增強(qiáng)免疫力功效方面的差異性，筆者采用CP建立免疫抑制動(dòng)物模型[8]，通過(guò)比較鐵皮石斛凍干粉和鐵皮石斛免疫調(diào)節(jié)藥效，為鐵皮石斛凍干粉的藥用價(jià)值提供依據(jù)，也為其深層次的開(kāi)發(fā)和應(yīng)用打下基礎(chǔ)。

1? 材料與方法

1.1? 儀器? 離心機(jī)（TG16-WS，常州市萬(wàn)豐儀器制造有限公司）;十萬(wàn)分之一電子天平（BT 25 S型，賽多利斯科學(xué)儀器北京有限公司）;酶標(biāo)儀（RT-6000，雷杜生命科學(xué)有限公司）;恒溫水浴鍋。

1.2? 試材

鐵皮石斛購(gòu)買于安徽亳州藥材市場(chǎng)，由安徽中醫(yī)藥大學(xué)俞年軍老師鑒定為蘭科石斛屬植物鐵皮石斛（Dendrobium officinale Kimura et Migo）的干燥根莖，鐵皮石斛純粉和鐵皮石斛凍干粉是于安徽中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院藥劑實(shí)驗(yàn)室制得。環(huán)磷酰胺購(gòu)自江蘇恒瑞醫(yī)藥股份有限公司;ELISA試劑盒購(gòu)于武漢基因美生物科技有限公司;綿羊紅細(xì)胞（SRBC）、生理鹽水等。

1.3? 試驗(yàn)動(dòng)物及分組處理

健康SPF級(jí)昆明雄性小鼠120只，來(lái)自安徽醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，生產(chǎn)許可證號(hào)為Scxk（皖）2017-001。小鼠隨機(jī)分為4組（鐵皮石斛原藥材組、鐵皮石斛凍干粉組、模型組和空白對(duì)照組），每組30只，鐵皮石斛及其凍干粉按照《中華人民共和國(guó)藥典》推薦量6～12 g的中間量9 g/（人·d）[0.15 g/（kg·d）]的10倍，即1.5 g/（kg·d）給藥?？瞻讓?duì)照組和模型組等劑量給予生理鹽水，1.5 g鐵皮石斛及其凍干粉加蒸餾水至100 mL，煎煮后水浴蒸發(fā)濃縮，灌胃。每日一次，連續(xù)30 d。試驗(yàn)結(jié)束前24 h，模型組、鐵皮石斛及其凍干粉組一次性腹腔注射200 mg/kg的環(huán)磷酰胺[8-9]。

1.4? 指標(biāo)測(cè)定

1.4.1? 免疫器官臟器系數(shù)。

末次給藥24 h禁食不禁水后，精確稱定小鼠體質(zhì)量，4組每組10只小鼠摘眼球取血后處死，取小鼠胸腺和脾臟，用濾紙吸干臟器表面血污，并稱其質(zhì)量，按照公式：臟器指數(shù)=臟器質(zhì)量（mg）/體質(zhì)量（10 g）來(lái)分別計(jì)算胸腺系數(shù)和脾臟系數(shù)。

1.4.2? 遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)（DTH）。

4組每組10只小鼠用2%綿羊紅細(xì)胞（SRBC）0.2 mL腹腔注射致敏。致敏4 d后，測(cè)量左后足趾部厚度，并在該測(cè)量部位皮下注射20%的SRBC 20 μL，注射24 h后再重新測(cè)量左后足趾部厚度。用注射前后足趾厚度的差值（足趾腫脹度）來(lái)表示遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)的程度。

1.4.3? 血清中細(xì)胞因子IFN-γ、IL-2和IL-6的含量。

末次給藥24 h禁食不禁水后，每組10只小鼠摘眼球取血，室溫靜置30 min，3 000 r/min離心15 min，取上清，-80 ℃冰箱凍存?zhèn)溆谩０凑誆LISA試劑盒說(shuō)明書操作，檢測(cè)血清中IFN-γ、IL-2和IL-6的含量。

1.5? 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析

用Excel和SPSS軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析處理，數(shù)據(jù)用±S表示。

2? 結(jié)果與分析

2.1? 鐵皮石斛及其凍干粉對(duì)免疫抑制小鼠免疫器官臟器系數(shù)及遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)（DTH）的影響

由表1可見(jiàn)，與空白對(duì)照組相比，模型組小鼠的脾臟系數(shù)、胸腺系數(shù)和足趾腫脹系數(shù)都有極為顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）;鐵皮石斛凍干粉組與環(huán)磷酰胺模型組相比有顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.05）;鐵皮石斛組與模型組相比僅有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.05）。

2.2? 血清中細(xì)胞因子IFN-γ、IL-2和IL-6的含量

由表2可見(jiàn)，與空白對(duì)照組相比，模型組小鼠的細(xì)胞因子IFN-γ、IL-2和IL-6有顯著性差異（P<0.01）。鐵皮石斛凍干粉組與鐵皮石斛組相比，小鼠血清中IFN-γ、IL-2和IL-6水平增加，鐵皮石斛凍干粉組與模型組相比有顯著性差異（P<0.01）;鐵皮石斛組與模型組相比細(xì)胞因子IFN-γ和IL-6有顯著性差異（P<0.01），而因子IL-2有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.05）。

3? 討論

天然植物多糖被認(rèn)為是最有前途的免疫調(diào)節(jié)劑，相對(duì)無(wú)毒且沒(méi)有明顯的副作用。鐵皮石斛經(jīng)常以水提取物的方式服用，其中發(fā)揮最大藥效的成分是石斛多糖。植物多糖可誘導(dǎo)如TNF-α、IL-1h、IL-2、IL-6、IL-12、IFN-γ和IFN-β細(xì)胞因子的產(chǎn)生[10]。該研究中通過(guò)煎煮鐵皮石斛及其凍干粉的濃縮液灌胃給藥，腹腔注射環(huán)磷酰胺后，結(jié)果顯示模型組小鼠的免疫器官臟器系數(shù)、足趾腫脹度和血清中IFN-γ、IL-2、IL-6均降低，表明免疫抑制模型建立成功。而灌胃給予鐵皮石斛及其凍干粉后，各個(gè)指標(biāo)數(shù)均明顯升高，表明鐵皮石斛及其凍干粉具有增強(qiáng)免疫力的作用，且尤以鐵皮石斛凍干粉的療效更加顯著。

該研究發(fā)現(xiàn)鐵皮石斛具有增強(qiáng)免疫力的作用，其作用機(jī)制可能與上調(diào)細(xì)胞因子IFN-γ、IL-2和IL-6等的表達(dá)水平有關(guān)。但是機(jī)體免疫調(diào)節(jié)系統(tǒng)是一個(gè)極其復(fù)雜的系統(tǒng)，目前對(duì)石斛尤其是鐵皮石斛及其凍干粉的研究依然處于比較淺顯的階段，其具體機(jī)制還有待進(jìn)一步的深入研究。

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