潘晨燕

靈山縣人民醫(yī)院 廣西欽州 535400

免疫學檢驗技術主要是源于在免疫學中標記技術的應用。伴隨近幾年醫(yī)療水平提升與研究的深入，使得免疫學檢驗技術的發(fā)展更向前進了一步，已從以往單純的免疫診斷技術逐漸向微量化、多基因和單細胞等方面發(fā)展[1]。而對于一些惡性腫瘤、原發(fā)性與繼發(fā)性免疫缺陷的臨床診斷，都會客觀要求提高免疫學檢驗技術的精確度，便于對臨床治療有效性的定量評價。故筆者做免疫學檢驗技術研究進展綜述。

1 免疫學檢驗的含義

免疫學檢驗指的是依照抗體、抗原反應原理，通過對已知抗體的利用對未知抗原、抗體實施檢測。經(jīng)不同抗原遞呈途徑，內(nèi)源性與外源性抗原可對生物機體的免疫應答進行誘導，使得非特異性、特異性細胞的克隆情況在生物體內(nèi)形成且不斷擴增，同時還能分泌特異性的免疫球蛋白[2-3]。因抗體-抗原的結合特點具有專一性與特異性，使得此檢測方法能對某一特異的蛋白進行定量、定位及定性檢測。隨著近幾年免疫學檢測技術在臨床中的應用愈發(fā)普遍，現(xiàn)已適用于對多種病癥的療效評價、診斷，以及對發(fā)病機制的研究。

2 免疫學檢驗技術的研究進展

2.1 酶標記免疫檢驗技術

（1）酶聯(lián)免疫變電技術

該技術屬于一種分析技術，多用于對T細胞分泌細胞因子功能和B細胞分泌免疫球蛋白的測定，為定量酶免疫吸附試驗技術的延伸與發(fā)展。

把抗Ig或CK的特異性單克隆抗體植入微孔培養(yǎng)板底部為酶聯(lián)免疫斑點技術的主要原理。把檢測樣本置于微孔板內(nèi)培養(yǎng)時，在特異性抗原或有絲分裂原的作用下，能對記憶型B細胞或T細胞進行活化，從而形成Ig或CK。細胞下方的固相單克隆抗體會將Ig或CK物質(zhì)捕獲。對清洗后的細胞加入生物素化的第二抗體，抗體經(jīng)結合Ig或CK物質(zhì)后，再加以酶做標記的親和素或生物素反應，以酶底物顯色，陽性細胞便能形成大小不等的圓形著色斑點，而斑點直徑則在50至200μm范圍內(nèi)，每個斑點均與Ig或CK的一個細胞對應分泌，而特定陽性B、T細胞族群的形成可經(jīng)斑點直徑的大小直接反映[4]。酶聯(lián)免疫斑點技術不但能對抗體的B細胞進行分泌，而且還能對各類CK的T細胞實施分泌。另外，此技術也是檢測T細胞功能的標準技術，其檢測靈敏度較高。

（2）酶聯(lián)免疫吸附試驗技術

從理論方面來看，只要是相應的抗體或某一抗原純品均可通過酶聯(lián)免疫技術實施檢測，所以，此檢測技術能均能對抗體系統(tǒng)、可溶性抗原予以檢測，可在抗體、抗原等血源病原體，以及腫瘤標志物、小分子激素和細胞分子等各種微量蛋白中廣泛應用[5]。ELISA（酶聯(lián)免疫吸附試驗技術）是把免疫過氧化物技術作為基礎，其有較強的特異性，較高的敏感性，操作便捷，而且方便臨床實施觀察，可在大規(guī)模檢查中適用。

2.2 熒光素標記抗體技術

（1）流式細胞免疫熒光分析技術

一種實驗技術以流式細胞分析、免疫微球與免疫熒光等基礎所建立的血清學新式實驗方法便是流式細胞免疫熒光分析技術。流式細胞儀的研制是基于熒光對抗體染色后將所需信息所換取的原理，技術特點具備單體克隆抗體、電子計算機技術與激光技術，所用領域分析范圍包括DNA含量、核膜成分、細胞內(nèi)與細胞表型等。因其具備將多種靶物質(zhì)的潛在特征同步檢測于同一試管的特性而備受業(yè)界臨床檢驗許多學者的關注。

（2）間接免疫熒光技術

簡介免疫熒光技術作用于檢測細胞內(nèi)因相應抗體或抗原定位的對照標準，所用范圍包括檢測其他呼吸道病原體抗體與抗平滑肌抗體、抗核抗體和抗病原體等?？蓪⒆詣踊潭扰c標準化檢測提升，可將手工操作誤差降低[6]。此技術現(xiàn)已相對成熟，可實施商品開發(fā)。

（3）四聚體分析技術

通過對T細胞表面TCR的利用，經(jīng)四聚體的構建能和其表位肽相互作用，進而能保證識別的精準度，使得有助于親和力結合的提升，起到對抗原特異性T細胞進行有效檢驗的目的。MHC-肽四聚體分子微陣列技術和MHC-肽四聚體磁分離技術、MHC-肽四聚體流式細胞技術和MHC-肽四聚體ELISA技術等均是從四聚體分析技術中衍生出來的常見檢驗方法，在臨床中多用于檢驗病毒、腫瘤抗原特異性T細胞。

2.3 新型標記免疫檢驗技術

（1）核酸標記免疫檢驗技術

核酸標記免疫檢驗技術以轉錄翻譯或核酸擴增為原理設計，轉錄翻譯即測定相應轉錄翻譯后的酶建立于抗原反應和標記抗體DNA的基礎上所進行的；而擴增即較短時間內(nèi)通過酶鏈反應可達數(shù)百萬倍的幾何級數(shù)擴增[7]。兩種檢測方法的靈敏性都較大，因此現(xiàn)今仍處于研究階段。

（2）元素標記免疫檢驗技術

檢驗技術有電化學發(fā)光與分辨熒光兩種免疫分析技術，另有Ru（釕元素）與Sm3+，Tb3+，Eu3+等鑭系元素的兩種標記元素。電化學發(fā)光免疫分析技術和分辨熒光免疫分析技術均屬于元素標記免疫檢驗技術之一，其中電化學發(fā)光免疫分析技術可用于反復激發(fā)于電場作用下而放大信號，分辨熒光免疫分析技術可用于測定兩種指標時同時進行。

2.4 其他免疫檢驗技術

（1）液態(tài)芯片技術

液態(tài)芯片技術研制于20世紀70年代時一家名為Lumi-nex的美國公司，該技術出現(xiàn)后被定性為新一代的生物芯片技術，采用流式細胞技術為檢測平臺，使用帶有編碼的微球體為載體，可大規(guī)模的用于進行核酸與蛋白質(zhì)的鑒定。與此同時，還可對神經(jīng)、內(nèi)分泌與傳染病等多重指標進行檢測，且可用于微量分析的任何使用系統(tǒng)的測試[8]。

（2）微陳列免疫芯片技術

微陳列免疫芯片技術是一種小分子抗原分析平臺，其所具備著高效率的特征。該技術可在定量檢測目標含量極低的物質(zhì)于復雜樣品中時快速的進行。此外可檢測全部蛋白質(zhì)含量在生物樣品中的變化情況。該技術具備在平行分析及檢驗時能夠高通量進行，可降低藥品或樣品的用量。

3 總結

綜上所述，通過簡要闡述免疫學檢驗概念，對不同免疫檢驗技術的檢測情況進行分析。為使免疫學檢驗技術能更好地適應當前醫(yī)療發(fā)展，都會要求能取得特定部位的微量樣本并對其予以精準分析，隨著在科研方面取得的進展，如維納電子學、生物學等，一些更敏感、更新型分析方法已不斷適用于臨床中，也使得免疫學檢驗技術朝著更新、更高的方向發(fā)展。