呂小梨，林彥朝，陳紅英

（仲景宛西制藥股份有限公司，河南 鄭州 450003）

中藥配方顆粒為傳統(tǒng)中藥煎劑的改良劑型，在保持傳統(tǒng)煎劑特點(diǎn)外，還具有免煎煮，攜帶、服用方便，便于企業(yè)、醫(yī)院的生產(chǎn)、貯存及流通等優(yōu)點(diǎn)，越來越受到關(guān)注［1-2］。青皮為蕓香科植物橘Citrus reticulataBlanco及其栽培變種的干燥幼果或未成熟果實(shí)的果皮，有疏肝破氣、消積化滯功效，可用于治療胸脅脹痛、疝氣疼痛、乳癖、乳癰、食積氣滯、脘腹脹痛［3］。青皮的主要化學(xué)成分為揮發(fā)油［4］、總黃酮［5］、多種氨基酸［6］，以及含升壓有效成分左旋辛弗林乙酸鹽和胺類成分［6］。國外學(xué)者還從冷壓縮后的桔皮油固體中分離出了黃酮類化合物［7-8］。近年來關(guān)于青皮的藥理作用已有很多研究，包括對(duì)心血管系統(tǒng)的作用［9-13］和平滑肌及能量代謝的影響等［14-18］。青皮配方顆粒采用2015年版《中國藥典（一部）》中的青皮飲片為原料，通過工業(yè)化提取、分離、濃縮、干燥、制粒等制成，基本保證了有效成分和功效。本研究中采用薄層色譜（TLC）法對(duì)青皮配方顆粒進(jìn)行了定性鑒別，采用高效液相色譜（HPLC）法對(duì)其中的橙皮苷進(jìn)行了含量測定，以建立其穩(wěn)定可行、質(zhì)量可控的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)?，F(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Agilent 1260型高效液相色譜儀（包括VWD檢測器、四元泵、柱溫箱、化學(xué)工作站，美國安捷倫公司）；MS-105型電子分析天平、AL104型電子天平（瑞士Mettler Toledo公司）；KQ-500DE型超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）。

1.2 試藥

橙皮苷對(duì)照品（中國食品藥品檢定研究院，批號(hào)為110721-201617，含量96.1%）；青皮配方顆粒［仲景宛西制藥股份有限公司，批號(hào)分別為171101，171102，171103，規(guī)格為每袋 1 g（相當(dāng)于 6 g飲片）］；甲醇為色譜純，其他試劑均為分析純，水為超純水。

2 方法與結(jié)果

2.1 薄層色譜鑒別

取樣品各0.2 g，研細(xì)，加甲醇10 mL，超聲（功率250 W，頻率 40 kHz，下同）處理 20 min，濾過，濾液蒸干，殘?jiān)蛹状?mL使溶解，作為供試品溶液。取青皮對(duì)照藥材0.5 g，加水50 mL，煎煮30 min，放冷，離心，取上清液，蒸干，殘?jiān)蛹状?0 mL，按供試品溶液制備方法制成對(duì)照藥材溶液。取缺青皮陰性樣品0.2 g，按供試品溶液制備方法制備陰性對(duì)照品溶液。取供試品溶液、陰性對(duì)照品溶液各2 μL，對(duì)照藥材溶液1 μL，點(diǎn)入1%氫氧化鈉溶液制備的硅膠G薄層板，以乙酸乙酯-甲醇-水（100 ∶17 ∶13，V/V/V）為展開劑，展至約 3 cm，取出，晾干，以甲苯-乙酸乙酯-甲酸-水（20∶10∶1∶1，V/V/V/V）的上層溶液為展開劑，展至約8 cm，取出，晾干，噴以三氯化鋁試液，置365 nm波長紫外光燈下檢視。供試品溶液色譜中，在與對(duì)照藥材溶液色譜相應(yīng)位置上顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)，陰性對(duì)照無干擾。色譜圖見圖1。

圖1 薄層色譜圖

2.2 含量測定

2.2.1 色譜條件

色譜柱：Xtimate-C18柱（250 mm ×4.6 mm，5 μm）；流動(dòng)相：甲醇 -水（35 ∶65，V/V）；檢測波長為 284 nm；流速：1.0 mL/min；柱溫：30 ℃；進(jìn)樣量：5 μL。

2.2.2 溶液制備

取橙皮苷對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1 mL含0.1 mg的對(duì)照品溶液。取裝量差異項(xiàng)下的樣品，研細(xì)，取約0.2 g，精密稱定，置容量瓶中，加入甲醇適量，超聲處理30 min，放冷，用甲醇定容，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得供試品溶液。取缺青皮陰性樣品0.2 g，按供試品溶液制備方法制備陰性對(duì)照品溶液。

2.2.3 方法學(xué)考察

系統(tǒng)適用性試驗(yàn)：取2.2.2項(xiàng)下3種溶液各適量，按2.2.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測定，記錄色譜圖，見圖2。理論板數(shù)以橙皮苷峰計(jì)大于3 000，分離度大于1.5，基線分離良好。

圖2 高效液相色譜圖

線性關(guān)系考察：精密量取2.2.2項(xiàng)下對(duì)照品溶液，加入甲醇，制成質(zhì)量濃度為0.100 1 g/L的對(duì)照品溶液，精密吸取 1，2，3，5，8，10 μL，按 2.2.1 項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣，測定峰面積。以對(duì)照品進(jìn)樣量（X，μg）為橫坐標(biāo)、峰面積積分值（Y）為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得回歸方程Y=1 894.1X+14.438，r=0.999 9（n=6）。結(jié)果表明，橙皮苷進(jìn)樣量在0.100 1～1.001 0 μg范圍內(nèi)與峰面積積分值線性關(guān)系良好。

精密度試驗(yàn)：取2.2.2項(xiàng)下對(duì)照品溶液，分別進(jìn)樣測定6次，記錄峰面積。結(jié)果的RSD為1.1%（n=6），表明儀器精密度良好。

穩(wěn)定性試驗(yàn)：取供試品（批號(hào)為171101）溶液，分別于室溫下放置 0，2，4，6，8，12 h 進(jìn)樣，測定峰面積。結(jié)果的RSD為1.7%（n=6），表明供試品溶液室溫下放置12 h內(nèi)穩(wěn)定。

重復(fù)性試驗(yàn)：取樣品（批號(hào)為171101）適量，分別處理6次，依法制備供試品溶液，測定含量。結(jié)果的RSD為1.1%（n=6），表明方法重復(fù)性良好。

加樣回收試驗(yàn)：取裝量差異項(xiàng)下的樣品（批號(hào)為171101），研細(xì)，取6份，每份約 0.2 g，精密稱定，分別置50 mL容量瓶中，加入甲醇適量，超聲處理30 min，放冷，用甲醇定容，搖勻，精密吸取25 mL置50 mL容量瓶中，精密加入對(duì)照品溶液3 mL（橙皮苷質(zhì)量濃度0.483 0 g/L），加甲醇定容，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，按2.2.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測定，計(jì)算回收率。結(jié)果見表1。

表1 加樣回收試驗(yàn)結(jié)果（n=6）

2.2.4 樣品含量測定

取3批樣品各適量，研細(xì)，取約0.2g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50 mL，稱定質(zhì)量，超聲處理30 min，放冷，再次稱定質(zhì)量，用甲醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液。按2.2.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測定。結(jié)果批號(hào)為171101，171102，171103的樣品中橙皮苷含量分別為 14.3，14.4，15.0 mg/g（按干燥品計(jì)）。

3 討論

2015年版《中國藥典（一部）》青皮項(xiàng)下的TLC法以橙皮苷為對(duì)照品，本試驗(yàn)中采用的TLC法以青皮作為對(duì)照藥材，青皮配方顆粒與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)位置上均顯相同顏色斑點(diǎn)，斑點(diǎn)清晰，分離效果好，兩者對(duì)應(yīng)的主斑點(diǎn)在3個(gè)以上，說明在該配方顆粒TLC圖中可以青皮對(duì)照藥材作為對(duì)照。

HPLC法測定中以橙皮苷為青皮配方顆粒的指標(biāo)性成分，方法學(xué)考察結(jié)果顯示，所建立的方法重復(fù)性較好，且科學(xué)準(zhǔn)確，有利于確保以后的生產(chǎn)質(zhì)量穩(wěn)定可控。

HPLC法和TLC法已用于配方顆粒有效化學(xué)成分的測定，目前，配方顆粒已有很多品種建立了指紋圖譜，中藥指紋圖譜可全面反映所含化學(xué)成分的種類與數(shù)量，但青皮配方顆粒指紋圖譜研究還未見報(bào)道，下一步可著力研究，以完善其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。