黃勇 張歡 聶蕾 王公華 何昆云

1.云南省醫(yī)療器械檢驗(yàn)研究院，昆明 650106；2.昆明醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院，昆明 650500；3.云南白藥集團(tuán)股份有限公司，昆明 650500

血塞通注射液主要成分為三七總皂苷[1]。目前市場(chǎng)上的血塞通注射液大多是采用低硼硅安瓿包裝，低硼硅玻璃在生產(chǎn)使用過(guò)程中易出現(xiàn)脫片、破裂等不良現(xiàn)象，與藥品接觸過(guò)程中易出現(xiàn)穩(wěn)定性和相容性問(wèn)題[2]。而中硼硅安瓿由于具有膨脹系數(shù)小，耐急冷急熱性強(qiáng)，加工過(guò)程中不易炸裂，抗沖擊性強(qiáng)，化學(xué)穩(wěn)定性好，耐酸耐堿耐水級(jí)別高等優(yōu)點(diǎn)，逐漸替代低硼硅安瓿，成為注射劑包裝[3-6]的首選材質(zhì)。本文根據(jù)中硼硅玻璃的原材料、添加劑，建立了藥用中硼硅安瓿與血塞通注射液相容性試驗(yàn)中B、Sb、Zn、Ca、Pb、Ti、Cd、Fe、Sr、Ba、Ce、Mn 12種元素遷移量[7-8]的電感耦合等離子體質(zhì)譜（ICP-MS）測(cè)定方法，并進(jìn)行了方法學(xué)驗(yàn)證，評(píng)估元素遷移造成的用藥風(fēng)險(xiǎn)。

1 儀器、試藥與樣品

1.1 儀器

iCAP RQ型電感耦合等離子質(zhì)譜儀（ICPMS,thermos scientific）、Sartorius純水機(jī)、100 mL、50 mL、25 mL、10 mL VITLAB塑料容量瓶、100-1000μL Sartorius移液器、1000-5000μL Sartorius移液器。實(shí)驗(yàn)所用容器均為塑料制品,實(shí)驗(yàn)用具均用硝酸浸泡過(guò)夜，用二級(jí)水沖洗備用。

1.2 試藥

B、Sb、Zn、Ca、Pb、Ti、Gd、Fe、Sr、Ba、Ce單元素標(biāo)準(zhǔn)溶液（國(guó)家有色金屬及電子材料分析測(cè)試中心，標(biāo)示值1000μg·mL-1）、混合內(nèi)標(biāo)（spex certiprep，InternaL Standard Mix 1,10 ng·mL-1，Bi、Ge、In、Li、Sc、Tb、Y）、硝酸（65%，分析級(jí)，默克股份有限公司）、超純水（Sartorius純水機(jī)制備）、調(diào)諧液（thermos scientific，1.0μg·mL-1）。

1.3 樣品

某玻璃股份有限公司生產(chǎn)的三批中硼硅安瓿，灌裝一家公司生產(chǎn)的同一批血塞通注射液得樣品1、2、3，規(guī)格：2mL：100mg。

2 方法與結(jié)果

2.1 考察方法

采用ICP-MS法測(cè)定中硼硅安瓿玻璃瓶包裝的三個(gè)批號(hào)的血塞通注射液中B、Sb、Zn、Ca、Pb、Ti、Cd、Fe、Sr、Ba、Ce、Mn12個(gè)元素的含量。

2.2 儀器工作參數(shù)

射頻功率1550W，蠕動(dòng)泵轉(zhuǎn)速40rpm，霧化室溫度2.7℃，采樣深度5mm，冷卻氣流速14 L·min-1，輔助氣流速0.8000 L·min-1，霧化器流速0.8814 L·min-1。

2.3 溶液制備

2.3.1 混合標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

2.3.1.1 配制2個(gè)低濃度元素（Cd、Sb）的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液 精密量取各單元素標(biāo)準(zhǔn)溶液，用2%的硝酸定容，制得1、2、3、4、5、0.5、0.1、0.05ng·mL-1的系列低濃度混合標(biāo)準(zhǔn)溶液。用2%的硝酸作為空白溶液。

2.3.1.2 配制10個(gè)高濃度元素的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液（Fe、B、Zn、Ca、Pb、Ti、Sr、Ba、Ce、Mn）精密量取各單元素標(biāo)準(zhǔn)溶液，用2%的硝酸定容，制得1、2、4、10、20、40、60、80、100ng·mL-1的系列混合標(biāo)準(zhǔn)溶液。用2%的硝酸作為空白溶液。

2.3.2 內(nèi)標(biāo)液配制（0.1% Bi、Ge、In、Li6、Sc、Tb、Y）精密量取100μL混合內(nèi)標(biāo)溶液，置于100mL容量瓶中，加入5mL硝酸，用水稀釋至刻度。

2.3.3 血塞通注射液供試品配制 取3批血塞通注射液原液記為供試品1、2、3。將原液稀釋10倍和100倍，分別記為供試品1#、2#、3#和供試品1##、2##、3##。

2.4 方法學(xué)驗(yàn)證

2.4.1 專(zhuān)屬性 采用電感耦合等離子體質(zhì)譜法檢測(cè)，測(cè)定的是由元素經(jīng)高頻電感耦合場(chǎng)激發(fā)到等離子化后其外層電子躍遷產(chǎn)生的特定波長(zhǎng)光強(qiáng)度。各元素等離子體由于構(gòu)造不同，其躍遷產(chǎn)生的光線波長(zhǎng)也有其專(zhuān)屬性。各元素在相應(yīng)檢查波長(zhǎng)下均無(wú)譜線干擾，專(zhuān)屬性好。

2.4.2 線性關(guān)系 取2.3.1配制的系列混合標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行測(cè)定，以待測(cè)元素的CPS值（每秒計(jì)數(shù)值）與內(nèi)標(biāo)液CPS值得比率(A)為縱坐標(biāo)，待測(cè)元素的濃度（C，ng·mL-1）為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算相關(guān)系數(shù)，結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 線性關(guān)系考察結(jié)果

2.4.3 檢出限與定量限 取空白溶液2%的硝酸溶液連續(xù)進(jìn)樣11次，以測(cè)定結(jié)果3倍的標(biāo)準(zhǔn)偏差所對(duì)應(yīng)的濃度值作為各元素的檢出限，10倍標(biāo)準(zhǔn)偏差所對(duì)應(yīng)的濃度計(jì)算各元素的儀器定量限，結(jié)果見(jiàn)表2。

2.4.4 精密度 分別取質(zhì)量濃度為 3 ng·mL-1和40ng·mL-1的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液連續(xù)測(cè)定6次，得各元素的RSD 值，結(jié)果見(jiàn)表2。

2.4.5 重復(fù)性 因供試品中各元素的含量極微小，故采用加樣的方法進(jìn)行重復(fù)性實(shí)驗(yàn)。取同一批注射液20mL，加入質(zhì)量濃度為10ng·mL-1（測(cè)定Cd、Sb）的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液2mL，用空白定容至25mL，平行6份。取同一批注射液7.5mL，加入質(zhì)量濃度為100ng·mL-1（測(cè)定其他10種元素）的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液2.5mL，用空白定容至25mL，平行6份。各自比較六份供試液中各元素的的質(zhì)量濃度，RSD結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 檢出限、定量限、精密度和重復(fù)性實(shí)驗(yàn)結(jié)果（n=11）

2.4.6 加標(biāo)回收率試驗(yàn) 10個(gè)高濃度元素（2.3.1.2）加標(biāo)回收率：取20mL血塞通注射液9份，置于25mL容量瓶，再精密量取1、2、3mL混合標(biāo)準(zhǔn)溶液(100ng·mL-1)各3份，置于容量瓶?jī)?nèi)，加2%硝酸溶液稀釋至刻度，各配制三份平行樣。2個(gè)低濃度元素（2.3.1.1）加標(biāo)回收率：取7.5mL血塞通注射液9份，置于25mL容量瓶，再分別精密量取2、2.5、3mL混合標(biāo)準(zhǔn)溶液(10ng·mL-1)各3份，置于容量瓶?jī)?nèi)，加2%硝酸溶液稀釋至刻度，各配制三份平行樣。結(jié)果見(jiàn)表3。

表3 加標(biāo)回收率

2.5 樣品測(cè)定

取3批樣品按“2.3.3”項(xiàng)方法制備供試品溶液，進(jìn)行測(cè)定（測(cè)定B時(shí)稀釋100倍），計(jì)算供試品溶液質(zhì)量濃度，同時(shí)將測(cè)定結(jié)果轉(zhuǎn)換為實(shí)際PDE 值，結(jié)果見(jiàn)表4。

3 討論

3.1 結(jié)果分析

方法學(xué)驗(yàn)證結(jié)果顯示，本測(cè)定方法靈敏，檢出限低，相關(guān)系數(shù)大于0.999，回收率達(dá)到80.7%～122%，精密度的RSD均小于5%，重復(fù)性的RSD均小于15%，符合分析要求。同時(shí)樣品測(cè)定結(jié)果顯示，各元素含量均較低，測(cè)定所得實(shí)際人每日允許暴露量均遠(yuǎn)遠(yuǎn)小于規(guī)定值。

表4 測(cè)定結(jié)果

3.2 測(cè)定時(shí)應(yīng)防止元素污染

使用電感耦合等離子質(zhì)譜法測(cè)定元素含量時(shí)，由于儀器對(duì)硼元素存在記憶效應(yīng)，為防止儀器交叉污染，每進(jìn)完一個(gè)樣品都用空白液（2%硝酸）進(jìn)行儀器的清洗，再進(jìn)下一個(gè)樣品[9]。

3.3 內(nèi)標(biāo)元素的選擇

內(nèi)標(biāo)的應(yīng)用能校正信號(hào)波動(dòng)，質(zhì)量數(shù)接近的分析元素受信號(hào)波動(dòng)和基底效應(yīng)的影響大小相近，所以?xún)?nèi)標(biāo)的選擇以質(zhì)量數(shù)接近為好，而進(jìn)行多元素分析時(shí)，應(yīng)選用雙內(nèi)標(biāo)或多內(nèi)標(biāo)[10]

3.4 待測(cè)元素的選擇

玻璃通常包含B2O3、CaO、MgO、B、Fe、Zn、Ti等成分，由于玻璃原料的復(fù)雜和藥液儲(chǔ)存時(shí)間較長(zhǎng)，玻璃中的金屬離子有可能遷移到藥品中，影響藥物的穩(wěn)定性和人體的用藥安全。本次實(shí)驗(yàn)重點(diǎn)考察了B、Sb、Zn、Ca、Pb、Ti、Cd、Fe、Sr、Ba、Ce、Mn 12種元素。

3.5 安全性評(píng)價(jià)

3.5.1 注射途徑人每日允許暴露量（PDE）的確定 指導(dǎo)原則明確規(guī)定：通過(guò)“文獻(xiàn)及毒性數(shù)據(jù)庫(kù)查詢(xún)相關(guān)浸出物”或“進(jìn)行安全性研究”，得到相關(guān)毒理數(shù)據(jù)，換算成人每日允許最大暴露量，即根據(jù)測(cè)定的水平計(jì)算實(shí)際的每日暴露量與毒理學(xué)評(píng)估中得到的PDE值進(jìn)行比較，做出包裝系統(tǒng)是否與藥物具有相容性的定論[11]。本文所涉及的元素中12中元素中除Sr、Ce兩個(gè)元素未確定PDE值，其它10種均通過(guò)查閱ICH Q3D得，并見(jiàn)表4。

3.5.2 分析評(píng)估閾值（AET）的確定 為評(píng)估相容性研究遷移試驗(yàn)中的元素對(duì)人類(lèi)的毒理學(xué)危害，需要將化學(xué)物質(zhì)的毒理數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)換為化學(xué)物質(zhì)的分析方法，實(shí)現(xiàn)藥品與包裝材料中對(duì)遷移物的控制。AET代表一種化合物的濃度，根據(jù)人每日允許最大暴露量或者安全性閾值·限定閾值、用藥劑量以及制劑包裝特點(diǎn)等計(jì)算每包裝容器中特定的可以提卻物和或浸出物含量[12]。血塞通注射液成人用量每日不超過(guò)400mg，通過(guò)每日最多可以使用的劑量來(lái)計(jì)算不同元素的AET值見(jiàn)表4。