王乙茹，柳成東，白華毅，錢(qián)錦花，趙 平，朱耀順，楊向東，程志斌*

（1.云南農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科學(xué)技術(shù)學(xué)院，云南昆明 650201；2.玉溪農(nóng)業(yè)職業(yè)技術(shù)學(xué)院,云南玉溪 653100；3.昆明云嶺廣大種禽飼料有限公司，云南昆明 650200）

凝結(jié)芽孢桿菌（Bacillus coagulans）集合了芽孢桿菌屬（耐熱、適合制粒）[1]與乳酸菌類（產(chǎn)酸、抑菌）[2]益生菌的共同優(yōu)勢(shì)，成為當(dāng)前畜禽飼料與養(yǎng)殖領(lǐng)域“替抗”的新型飼用益生菌[3]。試驗(yàn)報(bào)道，與無(wú)抗日糧對(duì)照組相比，飼用凝結(jié)芽孢桿菌能夠顯著改善肉雞的增重[4]、飼料轉(zhuǎn)化效率、免疫功能等[5-6]，卻鮮有飼用凝結(jié)芽孢桿菌與抗生素組合使用的研究[7]。雖然我國(guó)政府決定2020 年7 月全面實(shí)施飼料“禁抗”，但全球范圍內(nèi)飼用抗生素乃至抗生素保健藥物仍在使用，因此研究“有抗”日糧基礎(chǔ)上凝結(jié)芽孢桿菌對(duì)肉雞生長(zhǎng)性能的效果仍有價(jià)值。

與其他飼用抗生素相比，阿維拉霉素安全性較好，在肉雞養(yǎng)殖中無(wú)休藥期（農(nóng)業(yè)農(nóng)村部第168 號(hào)公告《飼料藥物添加劑使用規(guī)范》），目前廣泛應(yīng)用于全世界（無(wú)禁抗令）多數(shù)國(guó)家的肉雞飼料中[8]。課題組前期采用牛津杯藥敏實(shí)驗(yàn)法證明，5～10 mg/kg 阿維拉霉素溶液對(duì)凝結(jié)芽孢桿菌活菌的生長(zhǎng)無(wú)明顯抑制作用（抑菌圈直徑0 mm，數(shù)據(jù)未公開(kāi)發(fā)表）。本試驗(yàn)旨在研究凝結(jié)芽孢桿菌與阿維拉霉素組合使用對(duì)21～42 日齡AA 肉雞生產(chǎn)性能的影響。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)設(shè)計(jì)及飼養(yǎng)管理 試驗(yàn)在云南農(nóng)業(yè)大學(xué)附屬雞場(chǎng)開(kāi)展，將200 只21 日齡健康、平均體重為（801.85±24.66）g的AA 肉公雞分成2 組，每個(gè)處理組10 個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)10 只雞/籠。對(duì)照組飼糧中添加10 mg/kg 阿維拉霉素，試驗(yàn)組飼糧中添加10 mg/kg 阿維拉霉素和3×106CFU/g（全價(jià)配合飼料）凝結(jié)芽孢桿菌制劑。凝結(jié)芽孢桿菌添加量參考Wu 等[5]和Zhen 等[6]的文獻(xiàn)以及本課題組前期報(bào)道[7]。試驗(yàn)周期為肉雞育成期21～42 日齡，試驗(yàn)期間日糧參照NRC（1994）肉雞飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)，飼料原料組成及配制營(yíng)養(yǎng)成分見(jiàn)表1。

專人負(fù)責(zé)飼養(yǎng)試驗(yàn)，全程控溫、控濕、24 h 光照，試驗(yàn)雞自由采食和飲水。及時(shí)清掃雞舍，保證良好雞舍衛(wèi)生環(huán)境，實(shí)施正常免疫程序。

1.2 測(cè)定指標(biāo)及方法

1.2.1 生長(zhǎng)性能 測(cè)定試驗(yàn)雞的初體重、末體重、采食量，并計(jì)算平均日增重、平均日采食量、耗料增重比（飼料轉(zhuǎn)化效率）等指標(biāo)[9]。試驗(yàn)雞腹瀉會(huì)造成糞便敷住肛門(mén)現(xiàn)象，因此以籠為單位統(tǒng)計(jì)處理組“敷肛”的腹瀉率[7,9]。同時(shí)，觀察肉雞死亡情況，統(tǒng)計(jì)死亡率。

1.2.2 血清生化指標(biāo) 至肉雞42 日齡，每籠隨機(jī)挑選2 只，翅靜脈采血4～6 mL。血樣3 000 r/min 離心15 min 制備血清，在-20℃冰箱保存待檢[9]。血清生化指標(biāo)在云南農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院采用全自動(dòng)生化儀器測(cè)定。

1.2.3 免疫器官指數(shù) 血樣采集后，將挑選的肉雞屠宰，取脾臟、胸腺、法氏囊稱重，免疫器官指數(shù)為該器官重量除以活體重的百分?jǐn)?shù)[9]。

1.3 統(tǒng)計(jì)分析 試驗(yàn)數(shù)據(jù)用平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示，用SPSS 17.0 進(jìn)行T-test 檢驗(yàn)，P＜0.05 表示差異顯著，0.05＜P＜0.1表示有差異的趨勢(shì)[6]。

表1 基礎(chǔ)日糧組成及營(yíng)養(yǎng)成分（風(fēng)干基礎(chǔ)）

2 結(jié)果

2.1 飼用凝結(jié)芽孢桿菌對(duì)肉雞生長(zhǎng)性能的影響 如表2所示，試驗(yàn)組肉雞腹瀉率顯著低于對(duì)照組。其他生長(zhǎng)性能指標(biāo)兩組之間差異不顯著。試驗(yàn)組耗料增重比較對(duì)照組相比有下降趨勢(shì)（0.05＜P＜0.1）。

表2 凝結(jié)芽孢桿菌對(duì)肉雞生長(zhǎng)性能的影響

2.2 飼用凝結(jié)芽孢桿菌對(duì)肉雞血清生化指標(biāo)的影響 由表3 可見(jiàn)，試驗(yàn)組肉雞血清球蛋白、甘油三酯、低密度脂蛋白膽固醇的含量均高于對(duì)照組（P＜0.05）。與對(duì)照組相比，試驗(yàn)組肉雞血清總蛋白含量及谷丙轉(zhuǎn)氨酶活性有提高的趨勢(shì)（0.05＜P＜0.10）。其他血清生化指標(biāo)無(wú)顯著差異。

表3 飼用凝結(jié)芽孢桿菌對(duì)肉雞血清生化指標(biāo)的影響

2.3 飼用凝結(jié)芽孢桿菌對(duì)肉雞免疫器官指數(shù)的影響 試驗(yàn)組與對(duì)照組肉雞的胸腺指數(shù)、脾臟指數(shù)、法氏囊指數(shù)等指標(biāo)無(wú)顯著差異（表4）。

表4 飼用凝結(jié)芽孢桿菌對(duì)肉雞免疫器官指數(shù)的影響 %

3 討 論

3.1 凝結(jié)芽孢桿菌與阿維拉霉素組合對(duì)肉雞生長(zhǎng)性能的影響 本研究結(jié)果顯示，凝結(jié)芽孢桿菌與阿維拉霉素組合使用的試驗(yàn)組肉雞平均日增重與對(duì)照組無(wú)顯著差異，但耗料增重比降低了4.5%。這表明在含抗生素飼糧基礎(chǔ)上補(bǔ)充3×106CFU/g 凝結(jié)芽孢桿菌，雖未能進(jìn)一步提高21～42 日齡育成期AA 肉雞的生長(zhǎng)速度，但對(duì)飼料轉(zhuǎn)化效率有一定程度改善。Li 等[10]試驗(yàn)證明，與飼喂無(wú)抗日糧的對(duì)照組相比，飼糧添加2×106CFU/g 凝結(jié)芽孢桿菌對(duì)21～42 日齡AA 肉雞平均日增重也無(wú)顯著影響，但對(duì)耗料增重比也有改善趨勢(shì)。Wu 等[5]和Zhen等[6]進(jìn)一步研究顯示，與飼喂無(wú)抗日糧的對(duì)照組相比，添加4×106CFU/g 凝結(jié)芽孢桿菌未能對(duì)21～42 日齡AA 肉雞增重、飼料轉(zhuǎn)化效率產(chǎn)生顯著影響。Hung 等[11]研究表明，與飼喂無(wú)抗日糧的對(duì)照組相比，添加3×107CFU/g 凝結(jié)芽孢桿菌對(duì)21～42 日齡AA 肉雞平均日增重依然無(wú)顯著影響，但顯著降低了耗料增重比。綜上分析，飼用凝結(jié)芽孢桿菌改善育成期肉雞生長(zhǎng)性能的效果可能存在劑量依賴性[5-6,10-11]。本研究結(jié)果顯示，凝結(jié)芽孢桿菌與阿維拉霉素組合能夠在單一使用抗生素的基礎(chǔ)上，進(jìn)一步降低肉雞腹瀉的發(fā)生。眾所周知，飼用抗生素雖能有效抑制腸道有害細(xì)菌滋生，但對(duì)腸道有益菌的負(fù)面影響及腸菌群穩(wěn)態(tài)的破壞也十分明顯[12]。Zhen 等[6]最新試驗(yàn)報(bào)道，飼糧添加4×106CFU/g 凝結(jié)芽孢桿菌顯著降低了42 日齡AA 肉雞盲腸中的大腸桿菌、沙門(mén)氏菌。

3.2 凝結(jié)芽孢桿菌與阿維拉霉素組合對(duì)肉雞血清生化指標(biāo)的影響 肉雞血清總蛋白含量可反映飼料蛋白質(zhì)營(yíng)養(yǎng)攝入情況，總蛋白含量越高，表明日糧蛋白質(zhì)攝入越多，則有利于改善肉雞生長(zhǎng)性能[12]。血清總蛋白主要由血清球蛋白和血清白蛋白構(gòu)成，其中血清球蛋白是肉雞機(jī)體免疫功能重要指標(biāo)之一，血清球蛋白含量高反映機(jī)體免疫功能好[14]。本研究結(jié)果顯示，與對(duì)照組相比，試驗(yàn)組肉雞的血清球蛋白顯著增高，且總蛋白含量有提高的趨勢(shì)，這與肉雞耗料增重比、腹瀉率改善的結(jié)果相符。林麗花等[13]試驗(yàn)表明，與飼喂無(wú)抗日糧的對(duì)照組相比，添加凝結(jié)芽孢桿菌的試驗(yàn)組育成黃羽肉雞血清總蛋白含量、成活率顯著增加。趙娜等[14]在科寶（Cobb）肉雞上的試驗(yàn)也顯示，與飼喂無(wú)抗日糧的對(duì)照組相比，飼糧添加凝結(jié)芽孢桿菌顯著提高了21～42 日齡肉雞血清總蛋白和球蛋白含量以及肉雞的成活率。以上研究表明，凝結(jié)芽孢桿菌與抗生素聯(lián)合使用具有改善育成雞飼料蛋白利用率及機(jī)體免疫的作用。

血液中谷丙轉(zhuǎn)氨酶、谷草轉(zhuǎn)氨酶來(lái)源于肉雞肝臟細(xì)胞分泌，可反映肝臟的營(yíng)養(yǎng)代謝功能，是肉雞營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)代謝利用的重要指標(biāo)[12,14]。本結(jié)果顯示，試驗(yàn)組肉雞血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶活性比對(duì)照組提高23.8%，這與試驗(yàn)組肉雞血清較高的總蛋白、球蛋白、甘油三酯、低密度脂蛋白膽固醇含量的結(jié)果相符。趙娜等[14]在Cobb 肉雞上試驗(yàn)顯示，與無(wú)抗日糧對(duì)照組相比，凝結(jié)芽孢桿菌組肉雞血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶活性顯著升高。Qing 等[12]研究也顯示，與無(wú)抗日糧對(duì)照組相比，約翰遜乳桿菌組肉雞血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶活性升高3.8%，但差異不顯著。以上結(jié)果表明，飼用益生菌可在一定范圍內(nèi)升高血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶活性，反映出肉雞增強(qiáng)了對(duì)攝入營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的代謝利用。

3.3 凝結(jié)芽孢桿菌與阿維拉霉素組合對(duì)肉雞免疫器官的影響 胸腺、法氏囊和脾臟是家禽重要的免疫器官[15]，其器官指數(shù)（器官重量/體重）的適當(dāng)提高與機(jī)體良好的免疫水平及健康狀況呈正相關(guān)[4]。本試驗(yàn)結(jié)果顯示，與飼喂無(wú)抗日糧的對(duì)照組相比，添加3×106CFU/g 凝結(jié)芽孢桿菌對(duì)42 日齡育成雞的脾臟指數(shù)、胸腺指數(shù)、法氏囊指數(shù)均無(wú)顯著差異。宮秀燕等[15]報(bào)道，試驗(yàn)組添加0.4×106CFU/g 低劑量的飼用凝結(jié)芽孢桿菌，與飼喂無(wú)抗日糧的對(duì)照組Cobb 肉雞相比，35 日齡的脾臟指數(shù)、胸腺指數(shù)、法氏囊指數(shù)均無(wú)顯著差異。然而，AIKhalaifa 等[4]研究顯示，與飼喂無(wú)抗日糧的對(duì)照組相比，添加2×107CFU/g 高劑量凝結(jié)芽孢桿菌的35 日齡Cobb肉雞的脾臟指數(shù)和法氏囊指數(shù)仍然差異不顯著，但試驗(yàn)組肉雞胸腺指數(shù)顯著提高。試驗(yàn)雞品種和檢測(cè)日齡差異、對(duì)照組是否使用抗生素、凝結(jié)芽孢桿菌劑量顯著不同可能是影響凝結(jié)芽孢桿菌對(duì)肉雞免疫器官發(fā)育與功能的主要因素。這進(jìn)一步提示，凝結(jié)芽孢桿菌改善肉雞機(jī)體免疫功能可能也存在劑量依賴性，適當(dāng)增加飼糧中凝結(jié)芽孢桿菌有利于增強(qiáng)肉雞機(jī)體免疫功能。

4 結(jié) 論

本試驗(yàn)結(jié)果表明，飼糧補(bǔ)充3×106CFU/g 凝結(jié)芽孢桿菌對(duì)21～42 日齡育成期肉雞的腹瀉率與飼料轉(zhuǎn)化效率有改善作用。