趙曉燕 謝 競 付 倩 張 蘭 霍彥平

乳腺癌是發(fā)生在女性乳腺腺上皮組織的惡性腫瘤，其發(fā)病機制復(fù)雜，無明顯表現(xiàn)癥狀，且隨著病情的發(fā)展進一步出現(xiàn)淋巴轉(zhuǎn)移等惡化癥狀，導(dǎo)致預(yù)后效果不佳，嚴重影響患者的健康生活[1]。目前，臨床可通過外科手術(shù)給予腫瘤組織切除，可有效控制腫瘤發(fā)展，改善患者病情，但仍有部分患者因病情惡化而出現(xiàn)復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移，其機制可能與腫瘤的血管生成有關(guān)[2]。有研究顯示，環(huán)氧合酶2(cox-2)是1種誘導(dǎo)基因，與腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，但有關(guān)cox-2與腫瘤的血管關(guān)系還有待進一步深入研究[3-4]。對此，本研究通過給予檢測乳腺癌術(shù)后組織cox-2表達，探討其與微血管生成及預(yù)后的關(guān)系，現(xiàn)報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2016年3月至2017年3月本院乳腺癌術(shù)后組織及其癌旁正常乳腺組織各160例，納入標準：①經(jīng)臨床癥狀、實驗室、影像學(xué)等檢查證實為乳腺癌術(shù)后[5]，②就診前1個月無免疫、放化療、抗感染等治療史，③無精神病病史，④簽署知情同意書；排除標準：①妊娠及哺乳特殊人群，②血液性疾病，③有心、肝、腎等嚴重性疾病，④拒絕或終止本次研究者。其中年齡26～72歲，平均年齡(48.21±20.57)歲，體質(zhì)量指數(shù)(BMI)(19.06～30.40)kg/m2，平均BMI (24.21±4.06)kg/m2，臨床分期：Ⅰ期39例，Ⅱ期51例，Ⅲ期38例，Ⅳ期32例，癌癥類型：導(dǎo)管癌61例，小葉癌58例，腺癌伴粉刺樣癌41例，本次研究已經(jīng)我院倫理委員會審批且通過，所有數(shù)據(jù)來源真實可靠。

1.2 方法

所有患者經(jīng)乳腺癌手術(shù)切除3 d后，利用常規(guī)手術(shù)切除乳腺癌術(shù)后組織及其癌旁正常乳腺組織作為新鮮標本，采用免疫組化SP法檢測組織中cox-2、微血管密度(MVD)表達；所有標本經(jīng)10%甲醛固定和石蠟，包埋后，連續(xù)切片進行脫蠟，切片厚度均為4 μm，同時給予3%H2O2孵育滅活內(nèi)源性過氧化物酶、封閉非特異性抗原位點等預(yù)處理，加入實驗鼠抗人cox-2作為一抗，4 ℃孵育過夜，漂洗、復(fù)溫37 ℃，加生物素標記二抗工作液37 ℃孵育30 min，PBS緩沖液漂洗、DAB顯色后用蘇木精復(fù)染3 min，進行脫水待切片透明后用中性樹膠封固，高倍顯微鏡下鏡檢，PBS替代一抗作陰性對照。

1.3 指標觀察和標準

高倍視野(×400倍)在病灶隨機選擇5個視野，應(yīng)使所選視野分布于病灶各部位，cox-2陽性細胞表達及MVD表達為胞質(zhì)內(nèi)呈棕黃色顆粒狀，主要彌漫性分布于整個細胞胞質(zhì)。根據(jù)SP法染色以細胞質(zhì)中出現(xiàn)變異性染色的深淺進行評分，陽性強度以無色為0分；淡黃色為1分；黃色為2分；棕黃色為3分。根據(jù)組織染色細胞所占總細胞數(shù)百分比評分：陽性細胞數(shù)<5%為陰性(0分)；5%～25%(1分)；26%～50%(2分)；51%～75%(3分)；>75%(4分)。兩者評分相乘，0分為陰性(-)，1～4分為弱陽性(+)，5～8分為陽性(++)，9～12分為強陽性(+++)，方便試驗操作和分析，用(-)代表陰性，(+)(++)(+++)代表陽性，陽性代表高表達[5]。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 乳腺癌術(shù)后組織及癌旁正常組織中cox-2、MVD表達比較

乳腺癌組織cox-2、MVD表達明顯高于正常乳腺組織，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，見表1。

表1 乳腺癌術(shù)后組織及癌旁正常組織的cox-2、MVD表達比較

2.2 乳腺癌術(shù)后組織cox-2表達與其微血管生成及預(yù)后關(guān)系的單因素分析

單因素分析結(jié)果顯示，cox-2表達與MVD表達、臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠處轉(zhuǎn)移、病理分級等有關(guān)(P<0.05)，見表2。

2.3 有無cox-2表達患者的生存預(yù)后比較

cox-2表達患者1年無進展生存率70.63%(113/160)，明顯低于無cox-2表達患者的90.63%(145/160)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=20.485，P<0.05)，見圖1。

3 討論

乳腺癌是女性三大惡性腫瘤之一，隨著近年來生活節(jié)奏的加快和醫(yī)學(xué)知識的匱乏導(dǎo)致該發(fā)病率有明顯上升的趨勢，已成為當(dāng)前社會的重大公共衛(wèi)生問題。目前，乳腺癌通過手術(shù)切除術(shù)可有效切除腫瘤組織，控制癌細胞擴散，但仍有部分患者的病情復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移，故如何針對性確保患者術(shù)后預(yù)后轉(zhuǎn)歸具有重要的臨床意義[6-7]。

有研究顯示，乳腺癌是1種典型的血管依賴性病變，乳腺癌的發(fā)生與血管的生成密切相關(guān)，其機制可能腫瘤的存在打破血管生成促進因子上調(diào)和血管生成抑制因子下調(diào)的平衡，繼而使血管異常增生[8]。其中MVD是特定腫瘤區(qū)域的微血管計數(shù)，是臨床上腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移潛能的預(yù)測指標[9]。同時也有研究顯示，cox-2是催化花生四烯酸轉(zhuǎn)化為前列腺素類物質(zhì)過程中的一個關(guān)鍵限速酶，其應(yīng)答基因迅速，當(dāng)細胞受到刺激后開始合成；同時具有促進新生血管生成的作用，增加腫瘤細胞的侵襲性，其高度表達可提高腫瘤發(fā)生及轉(zhuǎn)移的潛能及增加腫瘤細胞的浸襲力[10]。

對此，本研究通過采用免疫組化SP法檢測組織中cox-2、MVD表達，結(jié)果發(fā)現(xiàn)乳腺癌組織cox-2、MVD表達明顯高于正常乳腺組織，而鄭玲玲等[11]的研究中也提示乳腺癌的發(fā)展與新生血管有關(guān)，進一步提示乳腺癌的發(fā)生發(fā)展與cox-2、MVD表達密切相關(guān)。這可能由于機體遭受腫瘤侵襲時，癌細胞會破壞血管的正常生成機制，從而使血管內(nèi)皮細胞增殖，誘導(dǎo)腫瘤血管生成，繼而使MVD、cox-2高度表達。同時單因素分析結(jié)果顯示，cox-2表達與MVD表達、臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠處轉(zhuǎn)移、病理分級等有關(guān)，表明cox-2的表達受多種因素的影響。這有可能由于MVD的計數(shù)越高，提示機體的腫瘤新生血管增多，而cox-2則是新生血管生成的重要因素之一，故隨著腫瘤新生血管的增多，其表達越高，而姚紅等[12]的研究提示癌組織的發(fā)生發(fā)展與cox-2、MVD協(xié)同變化有關(guān)，為上述結(jié)論提供了重要的依據(jù)。而臨床分期越高的患者表明其病情越發(fā)嚴重，癌細胞快速生長且向外擴散，導(dǎo)致細胞質(zhì)內(nèi)產(chǎn)生缺氧環(huán)境而增加缺氧誘導(dǎo)因子α的合成，進一步影響腫瘤血管的生成。同時患者發(fā)生淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移則意味著腫瘤的發(fā)育可能進入晚期，腫瘤細胞侵入血管，通過靜脈與淋巴管吻合處進入淋巴管，從而誘導(dǎo)新生淋巴管的形成，使cox-2高度表達。而腫瘤發(fā)生遠處轉(zhuǎn)移則提示腫瘤細胞具備向正常細胞侵襲的能力，且已新生腫瘤血管，繼而導(dǎo)致腫瘤增大發(fā)生轉(zhuǎn)移，從而使cox-2快速合成；而腫瘤的病理分級程度越高，其惡化程度越嚴重，繼而加劇腫瘤細胞發(fā)生轉(zhuǎn)移，腫瘤血管的大量異常增生[13-14]。從上述因素分析得出cox-2的高度表達與腫瘤的病情嚴重程度密切相關(guān)。此外，cox-2表達患者1年無進展生存率明顯低于無cox-2表達患者，表明cox-2的表達可作為乳腺癌患者的預(yù)后生存指標，這有可能由于cox-2的高度表達會加劇腫瘤細胞的增殖與分化，抑制腫瘤細胞凋亡，提高腫瘤血管的生成，加劇腫瘤發(fā)生轉(zhuǎn)移，而李鴻濤等[15]的研究結(jié)論也明確cox-2是乳腺癌組織中的預(yù)后重要因素之一，進一步提示醫(yī)師應(yīng)定期檢測乳腺癌術(shù)后患者的cox-2表達，把控患者的病情發(fā)展，同時應(yīng)制定對cox-2表達的患者的相關(guān)治療方案，提高患者的預(yù)后生存。

表2 乳腺癌術(shù)后組織cox-2表達與其微血管生成及預(yù)后關(guān)系的單因素分析(例，%)

圖1 有無cox-2表達患者的生存曲線

本研究仍存在一定不足，如樣本量較少不足以代表所有案例，但乳腺癌術(shù)后組織cox-2表達與其微血管生成及預(yù)后有關(guān)，有望成為乳腺癌抗血管形成治療的重要生物靶點，同時檢測cox-2表達對評估患者微血管生成及預(yù)后具有重要的價值。