李海燕，李馳坤，張明天，成光宇

（長(zhǎng)春中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院，長(zhǎng)春 130103）

蜂膠為蜜蜂科昆蟲意大利蜂（Apis mellifera L.）工蜂采集的植物樹脂與其上顎腺、蠟腺等分泌物混合形成的具有粘性的固體膠狀物，味苦、辛、寒，歸脾、胃經(jīng)，具有補(bǔ)虛弱、化濁脂，止消渴之功效。蜂膠具有抗菌、抗病毒、增強(qiáng)免疫、抗氧化、抗疲勞、抗癌等眾多藥理作用。近年來有些文獻(xiàn)報(bào)道過蜂膠具有耐缺氧的作用，而我國(guó)有許多崗位需要在低氧甚至是缺氧的狀態(tài)下進(jìn)行的。本研究旨在于發(fā)現(xiàn)并驗(yàn)證蜂膠具有耐缺氧的作用，可提高人體機(jī)能的耐缺氧能力。

蜂膠具有多種活性。劉立波[1]給正常小鼠灌以蜂膠黃酮發(fā)現(xiàn)，蜂膠黃酮可以顯著提高小鼠肝臟超氧化物歧化酶（SOD）、過氧化氫酶（CAT）活性，降低肝臟丙二醛（MDA）含量。蜂膠在體外能明顯抑制樣自由基引發(fā)的小鼠肝微粒體脂質(zhì)過氧化反應(yīng)，體內(nèi)能明顯抑制四氧嘧啶致小鼠肝臟的損傷作用，降低MDA含量[2]。蜂膠灌胃對(duì)正常小鼠、衰老模型小鼠腦組織中SOD、CAT、谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px）活性有顯著提高作用，同時(shí)能顯著減低腦組織中MDA含量，對(duì)腦組織起到了抗氧化保護(hù)作用[3]。蜂膠也能顯著提高老齡小鼠血清GSH-Px 活力，降低血中MDA 含量[4]；能明顯提高正常小鼠睪丸及卵巢組織的SOD 活性[5]；增加小鼠胸腺SOD 的活力，降低MDA 及NO 的含量[6]。蜂膠體外能抑制血管緊張素II（AnglI）誘導(dǎo)的平滑肌細(xì)胞增殖過程，增加SOD 活力，降低MDA 含量，增加高血脂癥兔SOD活力，降低低密度脂蛋白（LDL）、MDA含量[7]。小鼠灌服蜂膠4 周后紅細(xì)胞Na+ K+ ATP 酶和SOD 活性顯著高于對(duì)照組，血漿MDA 含量顯著降低[8]。在觀察蜂膠黃酮對(duì)果蠅壽命的影響及預(yù)防小鼠自由基損傷的作用時(shí)也證明，蜂膠黃酮可顯著提高果蠅及小鼠體內(nèi)SOD 活性，降低MDA 含量，說明蜂膠黃酮通過有效清除自由基、抑制或減輕機(jī)體組織和細(xì)胞的過氧化過程起到延緩衰老的作用[9]。

近期研究結(jié)果表明，蜂膠能顯著抑制缺氧誘導(dǎo)的線粒體活性氧（ROS）的產(chǎn)生和小膠質(zhì)細(xì)胞中核因子-B（NF-B）的激活，表明蜂膠可能有益于預(yù)防缺氧誘導(dǎo)的神經(jīng)炎癥[10]。Julio B.Daleprane 等[11]通過體內(nèi)和體外模型的實(shí)驗(yàn)，證明紅蜂膠多酚是通過影響內(nèi)皮細(xì)胞中的缺氧誘導(dǎo)因子-1來穩(wěn)定抑制血管，從而發(fā)揮抗血管活性。潘燕等[12]在研究蜂膠黃酮對(duì)小鼠缺血再灌注后心肌線粒體自由基損傷時(shí)發(fā)現(xiàn)，與對(duì)照組比較，給藥組的SOD、GSH-Px、總抗氧化能力（T-AOC）在力竭后的不同時(shí)刻均明顯升高，MDA 含量明顯下降，其原因可能與增強(qiáng)機(jī)體缺氧耐受力有關(guān)。近期報(bào)道，具有耐缺氧的處方組成中也含有蜂膠[13,14]。為了驗(yàn)證蜂膠是否對(duì)小鼠具有提高缺氧耐受力的能力，本試驗(yàn)對(duì)蜂膠滴丸進(jìn)行了如下研究，為評(píng)價(jià)蜂膠具有提高缺氧耐受力提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料、試劑、儀器

1.1 材料

蜂膠滴丸（廣州市杰禾蜂業(yè)有限公司），由蜂膠、聚乙二醇6 000 為原料制成的保健食品；規(guī)格：20 mg/粒（每粒含蜂膠10 mg）；樣品形態(tài)：圓形；食用方法及食用量：口服，4 粒/次，每日 1 次；保質(zhì)期：24 個(gè)月；貯存方法：常溫。

1.2 試劑及配制

羧甲基纖維素鈉（CMC-Na，沈陽(yáng)化學(xué)試劑廠，批號(hào)：200111011，規(guī)格：250g）。

分別按 40.0 mg/kg、26.7 mg/kg、13.3 mg/kg 劑量（相當(dāng)于人體推薦劑量的30 倍、20 倍、10 倍）配制蜂膠高、中、低劑量組。稱取蜂膠適量，加入0.5%CMC-Na，配制成濃度分別為4.00、2.67、1.33 mg/mL 的溶液，充分混勻備用；陰性對(duì)照組劑量為10 mL/kg，配制0.5%CMC-Na 溶液。

1.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

小鼠：昆明種，雄性，80 只，18～22 g，SPF 級(jí)；質(zhì)量合格證：No.211002300022072。試驗(yàn)動(dòng)物提供單位：遼寧長(zhǎng)生生物技術(shù)有限公司；試驗(yàn)動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào)：（遼）2017-0001；試驗(yàn)動(dòng)物使用許可證號(hào)：SYXK（遼）2017-0001。

SPF 級(jí)維持鼠料（沈陽(yáng)市于洪區(qū)前民動(dòng)物實(shí)驗(yàn)飼料廠）；生產(chǎn)許可證號(hào)：SCXK（遼）2017-0002；試驗(yàn)動(dòng)物飲用水：純化水，自由攝?。粍?dòng)物室環(huán)境條件：溫度20～25 ℃、相對(duì)濕度40%～70%。

1.4 儀器

秒表（DM1-001，上海銀澤儀器設(shè)備有限公司）；電子天平（CP124S，北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司）；電子天平〔PL1002E型，梅特勒托利多儀器（上海）有限公司〕。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 常壓耐缺氧實(shí)驗(yàn)

動(dòng)物在實(shí)驗(yàn)動(dòng)物房中適應(yīng)3d，取雄性小鼠40 只，按體重隨機(jī)分為4 組，即蜂膠高、中、低3 個(gè)劑量組，1個(gè)陰性對(duì)照組，每組10 只。連續(xù)灌胃給予30 d，于末次灌胃后1 h，將各組小鼠分別放入盛有5 g 鈉石灰的250 mL 磨口瓶?jī)?nèi)（每瓶1 只），用凡士林封嚴(yán)瓶口，以呼吸停止為指標(biāo)，記錄小鼠因缺氧而死亡的時(shí)間。

2.2 亞硝酸鈉中毒存活實(shí)驗(yàn)

動(dòng)物在實(shí)驗(yàn)動(dòng)物房中適應(yīng)4 d，取雄小鼠40 只，按體重隨機(jī)分為4 組，即高、中、低3 個(gè)劑量組，1 個(gè)陰性對(duì)照組，每組10 只。給予方式均為灌胃，連續(xù)給予30 天。于末次灌胃后1h，各組小鼠按照240mg/kg劑量腹腔注射亞硝酸鈉（注射量為0.1 mL/10g），立即計(jì)時(shí)，記錄動(dòng)物存活時(shí)間。

2.3 數(shù)據(jù)處理

實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用spss22 軟件，采用單因素方差分析，組間比較采用Duunet-t檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，P＜0.05表示有顯著性差異，證明該數(shù)據(jù)具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 結(jié)果與分析

3.1 小鼠常壓耐缺氧試驗(yàn)

與陰性對(duì)照組比較，蜂膠各劑量組試驗(yàn)動(dòng)物體重均無(wú)顯著差異（P＞0.05），蜂膠中、低劑量組試驗(yàn)動(dòng)物存活時(shí)間具有顯著差異（P＜0.05）。結(jié)果見表1、表2。

表1 蜂膠滴丸常壓耐缺氧實(shí)驗(yàn)動(dòng)物體重Tab1 Change of mice weight in anti-hypoxia test of Propolis Dropping pills （g）

表2 蜂膠滴丸常壓耐缺氧實(shí)驗(yàn)結(jié)果Tab 2 Result of anti-hypoxia test of Propolis Dropping pills

3.2 亞硝酸鈉中毒存活試驗(yàn)

與陰性對(duì)照組比較，蜂膠各劑量組試驗(yàn)動(dòng)物體重均無(wú)顯著差異，蜂膠中、低劑量組試驗(yàn)動(dòng)物注射亞硝酸鈉后存活時(shí)間具有顯著差異（P＜0.05）。結(jié)果見表3、4。

表3 蜂膠滴丸亞硝酸鈉中毒存活實(shí)驗(yàn)小鼠體重Tab3 Change of mice weight in sodium nitrite poisoning test of Propolis Dropping pills （g）

表4 蜂膠滴丸亞硝酸鈉中毒存活實(shí)驗(yàn)結(jié)果Tab4 Result of sodium nitrite poisoning test of Propolis Dropping pills

4 結(jié)論

本實(shí)驗(yàn)分別以蜂膠低、中、高劑量連續(xù)經(jīng)口灌胃給藥30 d 后，觀察其對(duì)小鼠常壓耐缺氧實(shí)驗(yàn)、亞硝酸鈉中毒存活實(shí)驗(yàn)的影響。結(jié)果顯示，低、中劑量組可以顯著延長(zhǎng)小鼠常壓耐缺氧的時(shí)間以及亞硝酸鈉中毒的存活時(shí)間，并且對(duì)小鼠體重均無(wú)明顯影響。由于2 個(gè)實(shí)驗(yàn)的結(jié)果均呈陽(yáng)性，根據(jù)保健食品對(duì)提高缺氧耐受力功能的判定要求，本品具有提高缺氧耐受力的作用。