文貴輝，楊 海，劉增再

（1.湖南環(huán)境生物職業(yè)技術(shù)學(xué)院，湖南衡陽(yáng) 421005；2.衡陽(yáng)師范學(xué)院，湖南衡陽(yáng) 421000； 3.長(zhǎng)沙市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，湖南長(zhǎng)沙 410000）

抗生素的使用可能增加動(dòng)物源性食品中藥物殘留和致病菌產(chǎn)生耐藥性的風(fēng)險(xiǎn)，因此，食源性抗菌藥物被限制使用或禁用，我國(guó)養(yǎng)豬業(yè)正面臨著來(lái)自疾病方面的嚴(yán)峻挑戰(zhàn)。尋找新型飼料添加劑，改善豬健康、預(yù)防疾病成為當(dāng)務(wù)之急。多年來(lái)，許多中藥和天然產(chǎn)品被用作促進(jìn)豬健康的飼料添加劑，一些天然草藥可以改善豬肉品質(zhì)和風(fēng)味（胡丹等，2015）。多糖廣泛存在于中藥中，具有多種生物活性，如免疫調(diào)節(jié)、抗氧化、抗病毒、降糖、降脂等（劉慧，2007）。靈芝作為一種重要的促進(jìn)健康的中藥在中國(guó)已使用2000 多年，多糖是靈芝的主要活性成分之一。研究發(fā)現(xiàn)，靈芝多糖除具有抗腫瘤、抗氧化的作用以外，還可以通過(guò)增強(qiáng)抗原遞呈細(xì)胞和單核吞噬細(xì)胞的功能來(lái)調(diào)節(jié)免疫水平，此外，靈芝多糖還具有一定的抗氧化性能和脂質(zhì)代謝調(diào)節(jié)功能（楊美璐等，2018）。靈芝多糖生產(chǎn)成本較高，不利于推廣使用，而靈芝細(xì)胞外多糖（EPG）經(jīng)大規(guī)模人工浸沒(méi)發(fā)酵，大大降低生產(chǎn)成本，使EPG 作為飼料添加劑成為可能。有報(bào)道稱(chēng)EPG 能促進(jìn)T 淋巴細(xì)胞和B 淋巴細(xì)胞的增殖，增強(qiáng)免疫器官的重量，提高小鼠巨噬細(xì)胞的白細(xì)胞數(shù)量和吞噬能力（Kong 等，2000）。本文旨在評(píng)價(jià)EPG 對(duì)育肥豬生長(zhǎng)性能和血液指標(biāo)的影響。

1.1 試驗(yàn)材料 以靈芝浸沒(méi)發(fā)酵液為原料制備靈芝細(xì)胞外多糖，去除菌絲體后，對(duì)發(fā)酵液濾液進(jìn)行透析濃縮，加入95%（V/V）乙醇沉淀粗多糖。粗細(xì)胞外多糖經(jīng)干燥、粉碎后用苯酚- 硫酸法測(cè)定EPG 含量為8.76%。

1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì) 試驗(yàn)在四川省某規(guī)?；B(yǎng)豬場(chǎng)進(jìn)行，選擇體重為（53.13±0.46）kg 的生長(zhǎng)豬100頭，隨機(jī)分為4 組，每組5 個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)5 頭豬。試驗(yàn)1、2、3 組分別在對(duì)照組基礎(chǔ)飼糧基礎(chǔ)上添加0.1%、0.2%、0.3%EPG。試驗(yàn)分為兩個(gè)階段，對(duì)應(yīng)的基礎(chǔ)飼糧見(jiàn)表1，兩個(gè)階段分別持續(xù)35 d。

表1 飼糧配方和營(yíng)養(yǎng)水平

1.3 樣品采集及指標(biāo)測(cè)定

1.3.1 生長(zhǎng)性能 分別在兩個(gè)階段開(kāi)始和結(jié)束時(shí)稱(chēng)量育肥豬的空腹體重，每天記錄給料量和剩余料量。計(jì)算試驗(yàn)兩個(gè)階段和全期的平均日采食量（ADFI）、平均日增重（ADG）及料肉比（F/C）。

1.3.2 血液指標(biāo) 在試驗(yàn)第70 天早晨，每個(gè)重復(fù)隨機(jī)選擇2 頭育肥豬，前腔靜脈采血，10 mL/ 頭，血液樣本用EDTA 抗凝，采血前將豬饑餓12 h。血液在室溫靜置1 h 后離心收集上層血漿。用ELISA 試劑盒（賽默飛世爾科技公司）測(cè)定血漿中免疫球蛋白G（IgG）、白細(xì)胞介素2（IL-2），自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)血漿中總蛋白、白蛋白、球蛋白、甘油三酯、總膽固醇、高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C），低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）濃度。1.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì) 采用SAS 9.2 對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行方差分析，采用Duncan’s 法多重比較。結(jié)果以“平均值± 標(biāo)準(zhǔn)誤”表示，P ＜0.05 為差異顯著。

2 結(jié)果

2.1 靈芝細(xì)胞外多糖對(duì)育肥豬生長(zhǎng)性能的影響 由表2 可知，EPG 處理組育肥豬在試驗(yàn)第35 天和70 天時(shí)的體重與對(duì)照組無(wú)顯著差異。在0 ～35 d 階段，EPG 處理組ADG、ADFI、F/C 無(wú)顯著變化（P ＞0.05）；35 ～70 d 階段，與對(duì)照組相比，試驗(yàn)1、2、3 組育肥豬ADG 分別增加7.2%、9.5%、8.3%（P ＜0.05），F(xiàn)/C 降低4.5%、5.3%、4.6%（P＞0.05）。在整個(gè)試驗(yàn)期間，與對(duì)照組相比，試驗(yàn)2 組ADG 顯著增加7.4%（P ＜0.05），試驗(yàn)1、3組ADG 分別增加5.3%、5.7%（P ＞0.05），試驗(yàn)1、2、3 組F/C 分 別 降 低3.0%、4.1%、2.9%（P ＞0.05）。

表2 靈芝細(xì)胞外多糖對(duì)育肥豬生長(zhǎng)性能的影響

2.2 靈芝細(xì)胞外多糖對(duì)育肥豬血液指標(biāo)的影響 由表3 可知，與對(duì)照組相比，試驗(yàn)1、2、3 組育肥豬血漿中IgG 濃度分別增加20.1%、36.1%、25.5%（P ＜0.05），IL-2 濃度分別增加16.6%、23.3%、14.4%（P ＜0.05），球蛋白濃度分別增加10.4%、13.0%、13.8%（P ＜0.05），甘油三脂濃度分別降低10.9%、28.1%、17.2%（P ＜0.05）。試 驗(yàn)2、3組育肥豬血漿中白蛋白和球蛋白的比值分別較對(duì)照組降低12.4%、11.5%（P ＜0.05），LDL-C 濃度分別降低12.8%、11.1%（P ＜0.05），試驗(yàn)2 組血漿中總膽固醇較對(duì)照組降低9.2%（P ＜0.05）。

表3 靈芝細(xì)胞外多糖對(duì)育肥豬血液指標(biāo)的影響

3 討論

3.1 靈芝細(xì)胞外多糖對(duì)育肥豬生長(zhǎng)性能的影響 近年來(lái)有報(bào)道稱(chēng)，中草藥多糖具有提高豬抗病力，營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)消化率，改善豬生長(zhǎng)性能的作用（劉慧，2007）。靈芝是靈芝屬真菌，具有較高的藥用價(jià)值，長(zhǎng)期以來(lái)用于治療糖尿病、支氣管炎等疾病。隨著技術(shù)進(jìn)步，越來(lái)越多的研究開(kāi)始分離靈芝的有效成分，現(xiàn)已報(bào)道的成分有200 多種，包括多糖、核苷類(lèi)、生物堿等，其中靈芝多糖被廣泛研究，是靈芝主要的生物活性物質(zhì)（姜沅彤，2015）。研究表明，靈芝多糖具有多種生物學(xué)功能，包括（1）促進(jìn)巨噬細(xì)胞分化，調(diào)節(jié)淋巴細(xì)胞的免疫應(yīng)答，增強(qiáng)機(jī)體免疫功能；（2）促進(jìn)INF-γ 分泌，激活P38等信號(hào)途徑，抑制腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)，并且在臨床試驗(yàn)中也證實(shí)靈芝多糖的抗腫瘤作用；（3）清除自由基，起到抗氧化、抗衰老的作用；（4）調(diào)節(jié)糖代謝相關(guān)酶活性，降低血糖、提高胰島素敏感性；（4）降低炎癥因子表達(dá)，抑制炎癥反應(yīng)（王穎等，2019 ；胡丹等，2015）。而目前靈芝多糖對(duì)畜禽生長(zhǎng)的相關(guān)報(bào)道較少，本研究發(fā)現(xiàn)，育肥豬飼糧中添加EPG 顯著增加了育肥后期A(yíng)DG，F(xiàn)/C 得到改善。Mushtaq 等（2017）研究表明，飼糧中分別添加靈芝、穿心蓮、姜黃均顯著提高肉雞ADG，F(xiàn)/C 降低。邢瑞虎等（2013）以1 日齡肉雞為研究對(duì)象，飼糧中添加靈芝培養(yǎng)物（主要成分為靈芝多糖和靈芝酸）顯著改善低營(yíng)養(yǎng)水平下肉雞42 日齡時(shí)的飼料轉(zhuǎn)化率。此外，將靈芝多糖飼喂羅氏沼蝦發(fā)現(xiàn)，添加量為2.5 g/kg 時(shí)羅氏沼蝦的生長(zhǎng)性能和消化酶活性顯著提高（Mohan 等，2016）。以上研究表明，飼糧中添加EPG 有助于提高育肥豬生長(zhǎng)性能。

3.2 靈芝細(xì)胞外多糖對(duì)育肥豬血液指標(biāo)的影響 血液指標(biāo)可以直接反映機(jī)體代謝水平，并且與機(jī)體營(yíng)養(yǎng)、健康狀況相關(guān)。細(xì)胞因子是T 細(xì)胞和B細(xì)胞免疫反應(yīng)極其重要的調(diào)節(jié)因子，IL-2 濃度增加可促進(jìn)T 細(xì)胞增殖并啟動(dòng)細(xì)胞免疫，IgG 可以直接反映體液免疫狀態(tài)。在本試驗(yàn)中，EPG 處理組育肥豬血漿中IL-2 和IgG 濃度均高于對(duì)照組，表明其體液免疫和細(xì)胞免疫功能均有改善。EPG對(duì)育肥豬免疫功能有增強(qiáng)作用，可以推測(cè)飼料中添加EPG 可以提高育肥豬健康狀況和對(duì)傳染病的抵抗能力。血漿中總蛋白、白蛋白、球蛋白在一定程度上能綜合反應(yīng)動(dòng)物體對(duì)蛋白質(zhì)的利用情況及免疫水平，白蛋白與球蛋白比值下降表明合成更多的球蛋白以改善機(jī)體免疫功能（王婷等，2017）。本研究結(jié)果顯示，EPG 處理組育肥豬血漿中球蛋白含量、白蛋白/ 球蛋白顯著升高，從另一個(gè)角度表明，EPG 對(duì)育肥豬免疫功能具有促進(jìn)作用。邢瑞虎等（2013）發(fā)現(xiàn)，靈芝培養(yǎng)物能顯著提高肉雞新城疫疫苗的抗體效價(jià)。易霞等（2017）發(fā)現(xiàn)，添加靈芝多糖能顯著降低血清中炎癥因子IL-1β 濃度，促進(jìn)注射藍(lán)耳弱病毒組育肥豬產(chǎn)生特異性抗體。除此之外，在本試驗(yàn)中添加EPG 降低了血漿中甘油三酯和總膽固醇的濃度，兩者在血漿中含量降低影響其在肉中的含量，進(jìn)而提高肉質(zhì)。Chen 等（2005）報(bào)道靈芝多糖影響高脂血癥大鼠血脂代謝，降低血清中總膽固醇和甘油三酯含量。本研究結(jié)果與前人報(bào)道相符，表明飼糧中添加EPG 能增強(qiáng)育肥豬免疫功能，起到調(diào)節(jié)脂肪代謝的作用。

4 結(jié)論

綜上所述，飼糧中添加EPG 顯著影響育肥豬生長(zhǎng)，這可能與EPG 增強(qiáng)育肥豬免疫功能有關(guān)，此外，EPG 還能影響育肥豬脂肪代謝，對(duì)肉質(zhì)起到調(diào)節(jié)作用，最適添加量為0.2%。