張镅

齊齊哈爾市質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督檢驗(yàn)檢測(cè)中心 黑龍江齊齊哈爾 161000

1 高效液相色譜法

高效液相色譜技術(shù)指高壓液相色譜技術(shù)，是以經(jīng)典液相色譜法為前提條件，然后引入氣相色譜理論形成的檢測(cè)方法。高效液相色譜法的適用范圍比較廣闊、分離效率比較高、檢測(cè)的速度比較快。在利用高效液相色譜技術(shù)檢測(cè)時(shí)，流動(dòng)相能選擇的范圍比較寬，固定相的種類(lèi)比較多，色譜柱還可以反復(fù)使用，具有很大的便利性。高效液相色譜法廣泛地運(yùn)用在揮發(fā)性比較低、熱穩(wěn)定性比較差的高分子化合物和離子型的化合物中進(jìn)行分離檢測(cè)[1]。

2 超高效液相色譜檢測(cè)農(nóng)作物中農(nóng)藥殘留

2.1 儀器與試劑

儀器的選擇中，超高效液相色譜儀器是必備設(shè)備之一，除此之外還需要配備溶劑萃取儀、超聲波清洗機(jī)、元素型1820A超純水機(jī)以及固相萃取裝置等設(shè)備。必備試劑有各類(lèi)農(nóng)藥殘留物的對(duì)照品，主要分為甲基硫菌靈、多菌靈、三聚氰胺以及環(huán)丙氨嗪。以上4種對(duì)照液溶度要求為：＞97.7%、＞97.2%、＞99.5%、＞99.5%。除此之外，還需要配備甲醇、超純水、鹽酸以及丙酮等。檢測(cè)應(yīng)用的流動(dòng)相A為甲醇溶液；流動(dòng)相B為融合溶液，由乙酸銨+水+三氟乙酸調(diào)節(jié)而成，最終pH控制在3.8。萃取溶劑主要是由丙酮（100mL）和甲醇，最終需要定容在500mL，pH控制在3.0。標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液：0.01g甲基硫菌靈以及多菌靈溶劑應(yīng)用甲醇，最終定容到100mL；0.02g環(huán)丙氨嗪以及三聚氰胺同樣應(yīng)用甲醇進(jìn)行定容，定容規(guī)格與上述相同。工作液：結(jié)合實(shí)際需求進(jìn)行工作液配置，配置用試劑為甲醇和水。

2.2 樣品萃取與凈化

本次實(shí)驗(yàn)中，所有應(yīng)用到的食用菌樣品全部都是常見(jiàn)菌類(lèi)品種，從超市隨機(jī)采購(gòu)。采購(gòu)之后，將食用菌進(jìn)行勻漿處理，并且進(jìn)行避光存儲(chǔ)，存儲(chǔ)溫度為4℃。加速溶劑萃?。涸趯?duì)應(yīng)儀器萃取池底部設(shè)置1層直徑為16.2mm的墊片，在其中放置0.5g硅藻土，目的在于保證收集瓶干凈整潔，不會(huì)有多余雜質(zhì)進(jìn)入。樣品稱(chēng)取量為10g，將其均勻地混合到萃取池中。萃取溶劑為丙酮、甲醇、鹽酸混合液，保證萃取溫度為70℃恒定，壓強(qiáng)為10.3MPa恒定。進(jìn)行初期的靜態(tài)萃取，時(shí)間為5min，一共需要循環(huán)2次。之后以10000r/min的速度進(jìn)行離心，離心時(shí)間為10min，可以得到檢測(cè)應(yīng)用的上清液，將上清液轉(zhuǎn)移到梨形瓶進(jìn)行旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)處理，最后應(yīng)用3：7比例的甲醇水溶液進(jìn)行定容，定容規(guī)格為3mL。固相萃取凈化：將固相萃取小柱應(yīng)用甲醇溶液進(jìn)行活化處理，應(yīng)用清水進(jìn)行平衡，加入待測(cè)樣品[2]。

2.3 超高效液相分析應(yīng)用

色譜柱進(jìn)行檢測(cè)，要求色譜柱的柱溫度在40℃。在檢測(cè)之前進(jìn)行梯度洗脫，該過(guò)程中應(yīng)用到的溶劑為乙酸銨+水+三氟乙酸和甲醇。確定4種殘留農(nóng)藥最大檢測(cè)波長(zhǎng)分別為甲基硫菌靈264nm、多菌靈280nm、環(huán)丙氨嗪240nm、三聚氰胺237nm。保證外部條件最佳，對(duì)殘留農(nóng)藥進(jìn)行峰值、峰面積、工作曲線測(cè)定。

3 結(jié)果分析

3.1 檢測(cè)波長(zhǎng)分析

規(guī)定色譜條件一致，檢測(cè)4類(lèi)殘留農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)液，應(yīng)用儀器在190-400mm波長(zhǎng)范圍內(nèi)進(jìn)行測(cè)試。檢測(cè)結(jié)果表明，TM、CAR、CYR、MEL分別在280nm、264nm、240nm、237nm時(shí)存在有特征吸收峰，比對(duì)結(jié)果為四者在237nm處均有響應(yīng)，并且干擾并不大；最終確定，CYR、MEL的最佳波長(zhǎng)參數(shù)為237nm，這一檢測(cè)結(jié)果與其它文獻(xiàn)參數(shù)相同。

3.2 線性和檢出限

應(yīng)用流動(dòng)相進(jìn)行逐級(jí)稀釋?zhuān)罱K得出甲基硫菌靈、多菌靈、環(huán)丙氨嗪、三聚氰胺濃度分別為5-500ng/mL、4-400ng/mL、3.6-360ng/mL、2.4-240ng/mL，并且保證檢測(cè)條件最佳狀態(tài)進(jìn)峰面積測(cè)定。而對(duì)于檢測(cè)線性的展示則是通過(guò)坐標(biāo)軸完成，本次采用的坐標(biāo)軸橫縱坐標(biāo)分別為分析物濃度和峰面積。通過(guò)線性檢測(cè)分析可以發(fā)現(xiàn)，以上4種分析物都存在良好的線性關(guān)系，按照規(guī)定，最終確定上述4種分析物的檢出限分別為1.7、1.2、0.72以及1.1對(duì)照相關(guān)的GB/T22388以及GC-MS，本文應(yīng)用的檢測(cè)方法更加便捷，并且具有良好的檢測(cè)效果[3]。

3.3 精確度

在精確度的檢測(cè)過(guò)程中，保證檢測(cè)環(huán)境為最佳條件，最終經(jīng)測(cè)試4種分析物的日標(biāo)準(zhǔn)差基本維持在2.3%-4.5%之間，而相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差則維持在3.1%-6.3%之間，上述數(shù)據(jù)證明，本文應(yīng)用到的檢測(cè)方法具有良好重現(xiàn)性。

3.4 樣品分析

在本次檢測(cè)過(guò)程中，采集的食用菌為常見(jiàn)的香菇、杏鮑菇、雙孢菇以及金針菇等，檢測(cè)時(shí)確保萃取、凈化、分析等過(guò)程沒(méi)有受到外界環(huán)境條件影響，最終檢測(cè)結(jié)果為：在上述食用菌中沒(méi)有檢測(cè)到4種分析物，也就是不存在農(nóng)藥殘留。其中，香菇的4種分析物檢測(cè)回收率在83%-99%之間，杏鮑菇在82%-105%之間，雙孢菇以及金針菇在83%-98%、85%-97%之間。

3.5 檢測(cè)結(jié)果分析

本文檢測(cè)過(guò)程中所提出的ASE-SPE結(jié)合UPLCDAD方法，在實(shí)際應(yīng)用過(guò)程中，成功的檢測(cè)出采購(gòu)蘑菇樣品中甲基硫菌靈、多菌靈、環(huán)丙氨嗓、三聚氰胺農(nóng)藥殘留量。從檢測(cè)應(yīng)用情況以及具體表現(xiàn)角度而言，此種方法具有很好的立足點(diǎn)，較高的靈敏度，精密度和較低的溶劑消耗，4種分析物能夠在ug/kg水平上檢測(cè)藥物的殘留。因此，該方法可以用于蘑菇樣品中甲基硫菌靈、多菌靈、環(huán)丙氨嗦和三聚氰胺的常規(guī)檢測(cè)，并且可以發(fā)揮重要作用。