唐靜 黃文杰 范恩勇

[摘要] 目的 探討全自動(dòng)細(xì)胞處理系統(tǒng)與手工法制備冰凍解凍去甘油紅細(xì)胞制備效果。 方法 對(duì)2016年6月～2017年8月40袋原料血冰凍紅細(xì)胞按照洗滌方法的不同分為手工對(duì)照組和全自動(dòng)試驗(yàn)組，每組20袋，試驗(yàn)組采用全自動(dòng)細(xì)胞處理系統(tǒng)制備冰凍解凍去甘油紅細(xì)胞，對(duì)照組采用手工開放式洗滌法進(jìn)行制備。對(duì)試驗(yàn)組和對(duì)照組制備的產(chǎn)品進(jìn)行紅細(xì)胞產(chǎn)品容量（mL）、血紅蛋白含量（g/袋）、游離血紅蛋白含量（g/L）、白細(xì)胞殘留量（×107個(gè)/袋）、甘油殘留量（g/L）、紅細(xì)胞回收率（%）及無菌試驗(yàn)等指標(biāo)的檢測分析。 結(jié)果 兩組洗滌法制備的冰凍解凍去甘油紅細(xì)胞產(chǎn)品各項(xiàng)質(zhì)量指標(biāo)均符合國家相關(guān)規(guī)定標(biāo)準(zhǔn)要求，試驗(yàn)組中血紅蛋白含量、紅細(xì)胞回收率明顯高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）;游離血紅蛋白含量、甘油殘留量等指標(biāo)均低于對(duì)照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。試驗(yàn)組與對(duì)照組在容量、白細(xì)胞殘留量質(zhì)量指標(biāo)方面基本一致，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。結(jié)論 全自動(dòng)細(xì)胞處理系統(tǒng)可有效保證臨床對(duì)Rh（D）陰性患者的緊急搶救用血，為患者搶救生命贏得時(shí)間，同時(shí)也可減少因手工開放操作而引起的血液細(xì)菌污染的可能性，提高采供血機(jī)構(gòu)工作人員工作效率，提升冰凍解凍去甘油紅細(xì)胞的產(chǎn)品質(zhì)量，從而確保血液質(zhì)量和臨床用血安全。

[關(guān)鍵詞] 冰凍解凍去甘油紅細(xì)胞;冰凍紅細(xì)胞;血紅蛋白含量;甘油殘留量

[中圖分類號(hào)] R446.1 ? ? ? ? ?[文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] B ? ? ? ? ?[文章編號(hào)] 1673-9701（2019）29-0087-03

Effect study of automatic cell processing system and manual method on preparation of frozen thawed deglycerol red blood cells

TANG Jing ? HUANG Wenjie ? FAN Enyong

Yangzhou Central Blood Station in Jiangsu Province， Yangzhou ? 225007， China

[Abstract] Objective To investigate the effects of the automatic cell processing system and the manual method on the preparation of frozen thawed deglycerol red blood cells. Methods Red blood cells of 40 bags of raw blood from June 2016 to August 2017 were frozen and divided into the manual control group and the automatic experiment group according to the washing method， with 20 bags in each group. In the experiment group， the automatic cell processing system was used to prepare frozen thawed glycerol free erythrocyte， while in the control group， the manual open washing method was used. Indicators， including red blood cell product volume （mL）， hemoglobin content （g/bag）， free hemoglobin content （g/L）， leukocyte residual amount （×107 cells/bag）， glycerol residual amount （g/L）， red blood cell recovery rate （%） and sterility test of the two groups were detected and analyzed. Results The quality indices of the frozen thawed glycerol free erythrocyte products prepared by both the experiment group and the control group were in compliance with the relevant national standards. The experiment group was significantly higher than the control group in hemoglobin content and red blood cell recovery rate， with statistically significant differences（P<0.05）， and was significantly lower than the control group free hemoglobin content， glycerol residual and other indicators， with statistically significant differences（P<0.05）. The experiment group and the control group were similar in volume and leukocyte residual， with no statistically significant differences （P>0.05）. Conclusion The automatic cell processing system can effectively guarantee the emergency rescue blood for patients with negative Rh （D）， win time for rescuing life， as well as reduce the possibility of blood bacterial contamination caused by manual open operation， improve the working efficiency of blood collection and supply agencies， and improve the product quality of frozen thawed glycerol free erythrocyte， thus ensuring blood quality and clinical blood safety.

[Key words] Frozen thawed glycerol free erythrocyte; Frozen red blood cells; Hemoglobin content; Glycerol residues

近年來，隨著臨床醫(yī)療技術(shù)水平的發(fā)展和輸血技術(shù)的進(jìn)步，臨床對(duì)稀有血型的需求量呈逐年上升，Rh血型系統(tǒng)作為人類第2大血型系統(tǒng)，在輸血醫(yī)學(xué)中具有極其重要的臨床意義，特別是在產(chǎn)科手術(shù)、新生兒輸血及急診輸血等方面需求較大，Rh（D）陰性血供應(yīng)的難點(diǎn)不只是獻(xiàn)血者的稀有，更重要的是應(yīng)急性和及時(shí)性[1]。當(dāng)前，國、內(nèi)外絕大部分采供血機(jī)構(gòu)對(duì)于Rh（D）陰性血的保存主要采用高濃度甘油冰凍保存，保存時(shí)間長，能有效緩解臨床突發(fā)事件對(duì)Rh（D）陰性血的需求，且冰凍解凍去甘油紅細(xì)胞制劑的作用是其他制劑不能替代的[2]。對(duì)于冰凍紅細(xì)胞解凍去甘油制備方法，主要有全自動(dòng)細(xì)胞處理系統(tǒng)和手工法制備兩種。由于冰凍解凍去甘油紅細(xì)胞的制備操作復(fù)雜，洗滌液的添加量、添加速度等極易受人為因素影響，制備時(shí)間也較長，工作效率不高，同時(shí)易造成冰凍解凍去甘油紅細(xì)胞質(zhì)量的不穩(wěn)定[3-8]。為提高冰凍解凍去甘油紅細(xì)胞產(chǎn)品的制備質(zhì)量和安全，本站于2016年5月引進(jìn)ACP215全自動(dòng)血細(xì)胞處理系統(tǒng)進(jìn)行冰凍解凍去甘油紅細(xì)胞產(chǎn)品的制備，取得了較好效果，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

40袋血液產(chǎn)品均來自揚(yáng)州市中心血站2016年6月～2017年8月成品庫，原料血均為2 U/袋的冰凍紅細(xì)胞，符合《全血及成分血質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)》[9]，冰凍紅細(xì)胞的制備按照《血站技術(shù)操作規(guī)程》（2015版）的要求進(jìn)行，將采集的6 d內(nèi)且各項(xiàng)指標(biāo)檢測均為合格的Rh（D）陰性全血或懸浮紅細(xì)胞制備成冰凍紅細(xì)胞，并將其置于-65℃以下條件保存，本血站冰凍紅細(xì)胞全部由去白細(xì)胞懸浮紅細(xì)胞制備。

1.2 方法

取待解凍的冰凍紅細(xì)胞置37℃恒溫水浴箱約30 min進(jìn)行解凍，按照洗滌方法的不同分為對(duì)照組和試驗(yàn)組，每組20袋。

（1）對(duì)照組：采用手工制備法進(jìn)行解凍-復(fù)蘇-去甘油化-洗滌過程，將解凍后的冰凍紅細(xì)胞在4℃×2500 r/min×10 min 條件下離心，去除上清液;加入9%氯化鈉溶液160 mL復(fù)蘇，混勻后再離心擠出上清液;然后連接 0.9%氯化鈉聯(lián)袋進(jìn)行洗滌，每次加入1袋氯化鈉溶液250 mL，混勻、離心擠出上清液;重復(fù)上述步驟3～5次，直至離心后紅細(xì)胞上清液澄清為止，去除上清液后加入0.9%氯化鈉溶液，使其容量達(dá)到（400±40）mL即為冰凍解凍去甘油紅細(xì)胞[10]。全部洗滌過程約需3 h。

（2）試驗(yàn)組：采用ACP215全自動(dòng)細(xì)胞處理系統(tǒng)進(jìn)行洗滌。首先將融化后的紅細(xì)胞稱重并與ACP215細(xì)胞處理系統(tǒng)的235型耗材采用無菌接駁機(jī)進(jìn)行連接，將程序選擇為去甘油洗滌，安裝好耗材，根據(jù)設(shè)定的程序，分別加入9%氯化鈉溶液復(fù)蘇和0.9%氯化鈉溶液進(jìn)行梯度洗滌，經(jīng)過2次稀釋、5次洗滌，最后加入一定量的0.9%氯化鈉溶液，即制備成冰凍解凍去甘油紅細(xì)胞。具體操作方法依據(jù)ACP215細(xì)胞處理系統(tǒng)操作手冊(cè)進(jìn)行。全部洗滌過程結(jié)束約需56 min。

1.3 主要儀器與材料

ACP215細(xì)胞處理系統(tǒng)（美國血液技術(shù)公司生產(chǎn)）及配套一次性235型去甘油洗滌耗材;Com poDock型無菌接管機(jī)（德國費(fèi)森尤斯）、6000i型大容量冷凍離心機(jī)（德國賀利氏）、DK-600型電熱恒溫水槽（上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司）、MEK-7222K全自動(dòng)血細(xì)胞計(jì)數(shù)儀（日本光電）、BD-9050全自動(dòng)細(xì)菌培養(yǎng)系統(tǒng)（美國BD公司）、Microlab 300半自動(dòng)生化儀（荷蘭威圖）;9%NaCl溶液、0.9%生理鹽水（1000 mL）、0.9%生理鹽水四聯(lián)袋、一次性無菌空袋等均由山東威高集團(tuán)公司生產(chǎn)。

1.4 檢測指標(biāo)

按照國家相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)[9]對(duì)兩組的產(chǎn)品容量（mL）、血紅蛋白含量（g/袋）、游離血紅蛋白含量（g/L）、白細(xì)胞殘留量（×107個(gè)/袋）、甘油殘留量（g/L）、紅細(xì)胞回收率（%）及無菌試驗(yàn)等進(jìn)行檢測，由本血站質(zhì)量技術(shù)科進(jìn)行測定。血紅蛋白含量、紅細(xì)胞回收率等測定采用全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀進(jìn)行，游離血紅蛋白、甘油殘留量采用半自動(dòng)生化儀進(jìn)行測定，白細(xì)胞殘留量采用Nageotte細(xì)胞計(jì)數(shù)盤計(jì)數(shù)，無菌試驗(yàn)采用全自動(dòng)細(xì)菌培養(yǎng)系統(tǒng)進(jìn)行培養(yǎng)。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS 19.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理及統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)量資料用（x±s）表示，組間比較采用t檢驗(yàn)，P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

兩種不同方法制備的冰凍解凍去甘油紅細(xì)胞產(chǎn)品質(zhì)量指標(biāo)檢測情況比較，試驗(yàn)組中血紅蛋白含量、紅細(xì)胞回收率明顯高于對(duì)照組，游離血紅蛋白、甘油殘留量明顯低于對(duì)照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），見表1。

3 討論

冰凍紅細(xì)胞作為Rh（D）陰性血、稀有血型的有效保存手段，也是臨床稀有血型患者緊急搶救用血的重要來源和保障[11]，可應(yīng)對(duì)臨床突發(fā)事件對(duì)Rh（D）陰性血或稀有血的需求，為搶救患者生命贏得時(shí)間，但手工法制備冰凍解凍去甘油紅細(xì)胞的時(shí)間較長，每U約需3 h左右，不僅屬于半開放環(huán)境操作，存在被細(xì)菌污染或交叉污染的安全隱患，而且制備過程復(fù)雜，影響因素較多，受凍存前白細(xì)胞的濾除、制備原料血（冰凍紅細(xì)胞）質(zhì)量、甘油化過程、甘油添加量、去甘油化的離心速度、處理時(shí)間等諸多因素影響[12-16]。如何能最大化保證產(chǎn)品質(zhì)量的同時(shí)，縮短制備時(shí)間，確保臨床急救用血的及時(shí)性和有效性，已成為當(dāng)前采供血機(jī)構(gòu)的共識(shí)。

本研究表1結(jié)果顯示，兩組洗滌法制備的產(chǎn)品質(zhì)量均符合國家相關(guān)規(guī)定標(biāo)準(zhǔn)要求，但有些質(zhì)量指標(biāo)有所差異，試驗(yàn)組中血紅蛋白含量、紅細(xì)胞回收率明顯高于對(duì)照組，游離血紅蛋白含量、甘油殘留量等指標(biāo)均低于對(duì)照組（P<0.05）。說明全自動(dòng)細(xì)胞處理系統(tǒng)紅細(xì)胞回收率較對(duì)照組高，且洗滌后殘留游離血紅蛋白、甘油含量較低，說明洗滌效果較好。較高的紅細(xì)胞回收率及較好的細(xì)胞洗滌效果，可提高紅細(xì)胞攜氧量，減少因游離血紅蛋白和甘油對(duì)患者的影響，可更好地充分利用稀有血液資源，有效提高患者輸血的治量效果。試驗(yàn)組在容量、白細(xì)胞殘留量等方面與對(duì)照組比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），主要原因?yàn)楸狙局苽浔鶅黾t細(xì)胞的原料血為去白細(xì)胞懸浮紅細(xì)胞，在制備冰凍紅細(xì)胞前已將白細(xì)胞通過白細(xì)胞濾器去除;容量方面，表面看似相近，實(shí)際上是為滿足《全血及成分血質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)》中“容量”的要求時(shí)，手工添加進(jìn)去的生理鹽水，主要區(qū)別為手工法制備的最終產(chǎn)品中紅細(xì)胞量較少，生理鹽水較多;而自動(dòng)處理系統(tǒng)洗滌的最終產(chǎn)品中紅細(xì)胞量較多，生理鹽水量相對(duì)較少。表面上看，與手工法相比較，雖然容量無差異，但紅細(xì)胞的含量卻有明顯增高，細(xì)胞攜氧能力及治療效果會(huì)更好。

全自動(dòng)細(xì)胞處理系統(tǒng)由于其制備時(shí)間短，自動(dòng)化程度高，減少人為差錯(cuò)的發(fā)生，耗時(shí)僅1 h左右，可為搶救患者生命爭取寶貴時(shí)間;同時(shí)，該系統(tǒng)可進(jìn)一步避免血液開袋操作引發(fā)的細(xì)菌污染或交叉污染的安全隱患，越來越受到國內(nèi)采供血機(jī)構(gòu)的認(rèn)可。全自動(dòng)細(xì)胞處理系統(tǒng)除用于冰凍解凍去甘油紅細(xì)胞的制備，也可用于原料血液冰凍紅細(xì)胞的制備，對(duì)于添加甘油的量可以準(zhǔn)確計(jì)算并添加[17]，從而保證原料血液的質(zhì)量，對(duì)于下一步的冰凍解凍去甘油紅細(xì)胞的制備、確保最終產(chǎn)品的合格奠定基礎(chǔ)。全自動(dòng)細(xì)胞處理系統(tǒng)的缺點(diǎn)是設(shè)備和耗材較貴，會(huì)給患者帶來一定的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。

綜上所述，全自動(dòng)細(xì)胞處理系統(tǒng)可有效保證臨床對(duì)Rh（D）陰性患者的緊急搶救用血，為患者搶救生命贏得時(shí)間，同時(shí)也可減少因手工開放操作而引起的血液細(xì)菌污染的可能性，提高采供血機(jī)構(gòu)工作人員工作效率，提升冰凍解凍去甘油紅細(xì)胞的產(chǎn)品質(zhì)量，從而確保血液質(zhì)量和臨床用血安全。

[參考文獻(xiàn)]

[1] 梁義安，蘇相耿，李彬. Rh（D）陰性血在突發(fā)公共衛(wèi)生事件中的應(yīng)用探討[J]. 國際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2016，37（20）：2882-2883.

[2] 劉米佳，尹建平. 冰凍解凍去甘油紅細(xì)胞研究進(jìn)展[J]. 臨床血液學(xué)雜志，2014，27（8）：727-728.

[3] 王惟. 不同制備方法制備冰凍解凍去甘油紅細(xì)胞質(zhì)量研究[J]. 中國實(shí)用醫(yī)藥，2013，8（26）：274-275.

[4] 時(shí)卉麗，李玉秋，程菲，等. 國產(chǎn)與進(jìn)口血細(xì)胞處理機(jī)制備冰凍解凍去甘油紅細(xì)胞的質(zhì)量對(duì)比[J]. 河北醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2017，38（11）：1344-1347.

[5] 肖樂宇，任明臣，馬振芳，等. 機(jī)器法和手工法制備的冰凍解凍去甘油紅細(xì)胞的質(zhì)量比較[J]. 現(xiàn)代預(yù)防醫(yī)學(xué)，2014，41（17）;3201-3203.

[6] 李敏. 全自動(dòng)與手工洗滌制備冰凍解凍去甘油紅細(xì)胞效果比較[J]. 吉林醫(yī)藥學(xué)院學(xué)報(bào)，2012，33（4）：242-243.

[7] 譚菲. 手工法和機(jī)器法制備冰凍解凍去甘油紅細(xì)胞的質(zhì)量分析[J]. 臨床輸血與檢驗(yàn)，2015，17（6）：563-564.

[8] 梁艷. 手工密閉式制備冰凍解凍去甘油紅細(xì)胞的可行性研究[J]. 貴州醫(yī)藥，2016，40（6）：592-593.

[9] 中國國家標(biāo)準(zhǔn)化管理委員會(huì).全血及成分血質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)（GB 18469-2012）[S]. 北京：中國標(biāo)準(zhǔn)出版社，2012.

[10] 李文靜，沈瑞. 冰凍紅細(xì)胞技術(shù)及其應(yīng)用的研究進(jìn)展[J].國際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2013，34（11）：1414-1415，1422.

[11] 王惟，譚菲，柴婷婷. 冰凍紅細(xì)胞冰凍前去除甘油的效果研究[J]. 臨床輸血與檢驗(yàn)，2015，17（4）：349-350

[12] 林豪，黃文華，江偉梅，等. 冰凍-解凍-去甘油過程紅細(xì)胞形態(tài)變化與損傷相關(guān)性探討[J]. 臨床輸血與檢驗(yàn)，2018，20（2）：141-144.

[13] 袁文聲，林惠燕. 凍存前濾除白細(xì)胞對(duì)解凍紅細(xì)胞質(zhì)量影響的研究分析[J].國際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2015，36（9）：1246-1249.

[14] 黃飛，譚均強(qiáng)，高炳諫. 冰凍紅細(xì)胞的制備與應(yīng)用分析[J].中國醫(yī)藥科學(xué)，2017，7（11）：146-148.

[15] 紀(jì)宏革，王麗，胡喬，等. 甘油對(duì)冰凍解凍紅細(xì)胞質(zhì)量的影響探討[J]. 國際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2016，37（4）：564-565.

[16] 林豪，黃文華，江偉梅，等. 凍存前細(xì)胞外多余甘油溶液的去留對(duì)解凍紅細(xì)胞質(zhì)量影響的比較[J]. 中國輸血雜志，2018，31（2）：159-161.

[17] 張雅莉，張貝，靳朝霞，等. 冰凍解凍去甘油紅細(xì)胞制備過程質(zhì)量控制方法[J]. 臨床輸血與檢驗(yàn)，2014，16（1）：68-70.

（收稿日期：2019-03-25）