張艷，李慧冬，丁蕊艷，郭長英，毛江勝，陳子雷*

1. 山東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)業(yè)質(zhì)量標準與檢測技術(shù)研究所（濟南 250100）；2. 農(nóng)業(yè)農(nóng)村部農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全風險評估實驗室（濟南 250100）；3. 山東省食品質(zhì)量與安全檢測技術(shù)重點實驗室（濟南 250100）

中國是梨的起源地之一，也是目前梨栽培面積最大的國家[1]。為了防治病蟲害和提高梨的外觀品質(zhì)，有機磷農(nóng)藥在梨園中被廣泛使用。它具有經(jīng)濟、高效、方便等特點[2]，是果品中農(nóng)藥殘留的主要種類之一[3]。但它殘留量高、急性毒性強，具有致癌性和生殖毒性，長期接觸此類農(nóng)藥可引起免疫功能損害[4]，部分有機磷農(nóng)藥代謝產(chǎn)物還可在食品中殘留富集，對人體健康危害巨大[5]。因此，有必要建立一種準確、快速、可靠的農(nóng)藥多殘留檢測方法，對梨中的有機磷農(nóng)藥殘留進行測定。

目前，有機磷農(nóng)藥的主要檢測方法有氣相色譜法[6]、氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法[7]、高效液相色譜法[8]和液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法[9]。其中，氣相色譜-質(zhì)譜法可以達到更好的分離效果和檢測效果，能夠?qū)Χ喾N有機磷類農(nóng)藥進行準確定量檢測，目前水果中定量模式主要依靠選擇離子模式（SIM）檢測[10]。Pereira等[11]用氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)儀以選擇離子監(jiān)測模式測定了椰汁中多種有機磷農(nóng)藥殘留，該方法檢測限為0.12～0.86 μg/mL，方法快捷、準確度較高。張兵等[12]用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀以選擇離子監(jiān)測方式對蔬菜中含有的包括有機磷、氨基甲酸酯及擬除蟲菊酯類等15種農(nóng)藥的殘留量進行定性分析和定量分析。Qu等[13]采用氣相色譜-四極桿質(zhì)譜儀以選擇離子監(jiān)測方式建立了快速測定韭菜中有機磷農(nóng)藥的方法。王海鳳等[14]用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀以選擇離子監(jiān)測方式對果蔬中含有的包括有機磷進行檢測，其分離效果較好。但目前關(guān)于梨中有機磷農(nóng)藥殘留的快速前處理及檢測方法研究報道仍較少。

PSA、C18和GCB是QuEChERS方法凈化樣品時最常選用的吸附劑，PSA可用于去除各種有機酸、色素、一些糖類和脂肪酸[15]。因此，試驗采用QuEChERS法結(jié)合氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜以選擇離子監(jiān)測（SIM）模式同時對梨中21種有機磷農(nóng)藥進行檢測，該方法操作簡便，成本低，以期為梨等水果中多農(nóng)藥殘留的檢測提供方法參考。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

梨（市售）；正己烷、乙腈（HPLC級，美國Fisher公司）；N-丙基乙二胺吸附劑（PSA，40～60 μm）：天津博納艾杰爾公司；乙酰甲胺磷、滅線磷、治螟磷、甲拌磷、內(nèi)吸磷、地蟲硫磷、氯唑磷、磷胺、甲拌磷亞砜、馬拉硫磷、甲拌磷砜、倍硫磷、對硫磷、水胺硫磷、甲基異柳磷、硫環(huán)磷、殺撲磷、苯線磷、丙溴磷、亞胺硫磷、蠅毒磷共21種有機磷農(nóng)藥混合標準溶液，質(zhì)量濃度為10 μg/mL，農(nóng)業(yè)部環(huán)境保護科研監(jiān)測所（天津）。

1.2 儀器與設(shè)備

Agilent 5977B-7890A氣質(zhì)聯(lián)用儀（美國安捷倫公司）；BSA224S-CW萬分之一電子天平（德國Sartorius公司）；LDZS-2高速離心機（北京京立離心機公司）；MS3 D S25漩渦混合器（德國IKA公司）；T25 D均質(zhì)機（德國IKA公司）；RV10 D旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀（德國IKA公司）；50 mL離心管（美國康寧公司）；0.22 μm有機系微孔濾膜（北京科瑞?？茖W(xué)儀器有限公司）。

1.3 方法

1.3.1 GC-MS條件

色譜柱：DB-5MS（30 m×0.25 mm×0.25 μm）。色譜柱溫度程序：40 ℃保持1 min，然后以30 ℃/min程序升溫至130 ℃，再以5 ℃/min升溫至250 ℃，再以10 ℃/min升溫至300 ℃，保持 5 min。載氣，氦氣，純度≥99.999%；流速，1.2 mL/min；進樣口溫度，280 ℃；不分流進樣，進樣量，1 μL。

質(zhì)譜條件：離子源EI（70 eV）；離子源溫度，230 ℃；接口溫度，280 ℃；采集方式，選擇離子監(jiān)測（SIM）模式；溶劑延遲，6 min。

1.3.2 樣品前處理

將鮮梨樣品去柄勻漿。準確稱取10 g樣品，加入20.0 mL乙腈，在勻漿機中高速勻漿3 min，加入5 g氯化鈉，渦旋3 min，靜置分層，在離心機中12 000 r/min 離心5 min，吸取10 mL上清液于PSA凈化管，搖勻，在離心機中12 000 r/min離心5 min，取5 mL上清液于250 mL圓底燒瓶中，在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中旋蒸至干，用2.5 mL正己烷定容，裝進樣小瓶，混勻，上機測定。

2 結(jié)果與分析

2.1 質(zhì)譜條件的優(yōu)化

將混合標準物質(zhì)用丙酮稀釋，配制0.4 μg/mL農(nóng)藥混標溶液。首先采用Full Scan模式對21種有機磷混合標準溶液和添加混合標準物質(zhì)的梨樣品進行全掃，全掃描范圍為m/z 40～450，掃描結(jié)果用特征離子挑選，對挑選結(jié)果進行NIST譜庫比對。21種有機磷農(nóng)藥混合標準溶液及添加混合標準物質(zhì)梨樣品的總離子流圖見圖1。對比數(shù)據(jù)庫中的特征離子信息，以確認各目標化合物的保留時間進行定性分析。

圖1 總離子流圖

根據(jù)全掃結(jié)果，選擇離子監(jiān)測模式（SIM），每種農(nóng)藥選擇3～4個特征離子，選擇一個豐度高、荷質(zhì)比較大的離子作為定量離子。按照農(nóng)藥出峰順序采用分時間段監(jiān)測模式，在某一時間段監(jiān)測一個或幾個待測物質(zhì)，使得特征離子在單位時間內(nèi)被掃描的次數(shù)增多，從而降低背景干擾，提高信噪比。通過對質(zhì)譜參數(shù)的優(yōu)化，最終確定了質(zhì)譜條件，這21種有機磷農(nóng)藥均得到了很好的分離，且峰型良好。21種有機磷農(nóng)藥的分子式、保留時間和定性、定量離子見表1。

2.2 標準曲線和檢出限

將10 μg/mL的21種混合標準品溶液用1.3.2方法處理后的梨提取溶液稀釋，配制成濃度范圍在0.01～1.0 μg/mL的系列標準溶液。按選定的色譜條件和質(zhì)譜條件，用選擇離子監(jiān)測（SIM）模式，以峰面積為縱坐標，濃度為橫坐標，得到21種有機磷農(nóng)藥的線性方程和相關(guān)系數(shù)，結(jié)果見表2。結(jié)果表明，在0.01～1.0 μg/mL線性范圍內(nèi)，21種目標化合物線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)（r）在0.990 7～0.999 4之間，檢出限在0.2～2.6 μg/kg之間。

表1 21種有機磷農(nóng)藥的保留時間及質(zhì)譜條件參數(shù)

2.3 回收率與精密度

在相應(yīng)的線性范圍內(nèi)對梨空白樣品進行三個水平（0.01，0.1和0.5 mg/kg）的添加回收試驗，每個添加水平平行測定6次，計算回收率和相對標準偏差，結(jié)果見表3。21種有機磷農(nóng)藥在0.01，0.1和0.5 mg/kg 3個添加水平下的回收率在85.4%～100.4%之間，相對標準偏差（RSD）在1.9%～6.8%之間。用此方法測定梨樣品中21種有機磷農(nóng)藥殘留，準確度、精密度和靈敏度均較好，能夠滿足殘留分析的要求。

表3 21種有機磷農(nóng)藥的回收率精密度

2.4 實際樣品檢測

根據(jù)試驗建立的試驗條件，對市場采集的100批梨樣品進行檢測，在1批梨中檢出馬拉硫磷農(nóng)藥，其含量為0.032 mg/kg，低于GB 2763—2016[16]中梨的農(nóng)藥最大殘留限量值（Maximum residue limit，MRL）2 mg/kg，其余20種有機磷農(nóng)藥均未檢出。研究表明，該方法可用于梨中21種有機磷農(nóng)藥的同時測定。

3 結(jié)論

試驗采用QuEChERS前處理技術(shù)，與氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法相結(jié)合，梨樣品采用乙腈提取，氯化鈉鹽析后，經(jīng)N-丙基乙二胺（PSA）凈化，采用氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜選擇離子監(jiān)測（SIM）方法檢測，外標法定量，建立了一種簡便、快速測定梨中21種有機磷農(nóng)藥的分析方法。該方法在保證檢測結(jié)果的準確性和再現(xiàn)性的同時，操作簡單、效率高，適合實際檢測工作中大批量梨樣品的檢測。