于 敏，王傳嶺，張嘉嫻

(嘉應(yīng)學(xué)院醫(yī)學(xué)院，廣東 梅州 514031)

維生素C，即抗壞血酸，具有還原性，能參與機(jī)體的氧化還原反應(yīng)，清除自由基，提高機(jī)體免疫力，是人體機(jī)能得以正常運(yùn)行的必需物質(zhì)。水果和蔬菜中富含維生素C，是人體所需維生素C的重要來源，因此，需要對水果和蔬菜中的維生素C含量的測定進(jìn)行研究[1-2]。目前常見的檢測維生素C的方法有分光光度法[3-4]、高效液相色譜法[5-6]、電化學(xué)法[7]、間接原子吸收法[8-9]等。

BZ振蕩反應(yīng)是指在酸性介質(zhì)中，在催化劑的作用下，具有活潑亞甲基的有機(jī)酸、酮、酯等化合物被溴酸鹽氧化的反應(yīng)，催化劑一般是可變價(jià)金屬離子對。在反應(yīng)過程中，體系中某些物質(zhì)的濃度會(huì)隨反應(yīng)時(shí)間呈現(xiàn)規(guī)則振蕩[10-11]。因BZ振蕩反應(yīng)對外界的擾動(dòng)敏感，因此可以利用振蕩反應(yīng)對外界物質(zhì)的含量進(jìn)行分析測定[11-16]。一般BZ振蕩體系采用硫酸為反應(yīng)介質(zhì)，本實(shí)驗(yàn)選擇用硫酸-磷酸混酸來提供酸性環(huán)境，來檢測維生素C的含量，發(fā)現(xiàn)檢測效果更好。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 實(shí)驗(yàn)儀器與試劑

BZ 振蕩反應(yīng)實(shí)驗(yàn)系統(tǒng) BZOAS-ⅡS (南京南大萬和科技有限公司),232型甘汞電極,213 型鉑電極，超級恒溫水浴 CS-501 型(上海實(shí)驗(yàn)儀器廠)，超純水機(jī) MING-CHE (法國 Merck Millipore)硫酸、磷酸、丙二酸、溴酸鉀、硫酸鈰銨、維生素C等均為分析純，實(shí)驗(yàn)用水為超純水。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

打開BZ 振蕩反應(yīng)實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)及電腦記錄軟件，以鉑電極和甘汞電極分別作為工作電極和參比電極，設(shè)定反應(yīng)溫度為30℃，恒定磁力攪拌器轉(zhuǎn)速，向反應(yīng)器中依次加入丙二酸、溴酸鉀、混酸，混合均勻后，加入硫酸鈰銨，同時(shí)利用電腦記錄振蕩曲線，當(dāng)系統(tǒng)進(jìn)入規(guī)則振蕩后，加入不同濃度的維生素C并記錄振蕩參數(shù)。

2 結(jié)果與討論

2.1 實(shí)驗(yàn)條件優(yōu)化

振蕩系統(tǒng)中的反應(yīng)物的濃度會(huì)影響振蕩圖形，誘導(dǎo)期、周期和振幅均有改變，實(shí)驗(yàn)表明，維生素C的含量的負(fù)對數(shù)與周期(T)變化值有良好的線性關(guān)系，而其他參數(shù)線性關(guān)系較差，因此，改變反應(yīng)物的濃度，可以提高對干擾物的靈敏度，結(jié)果如圖1所示。

圖1 各實(shí)驗(yàn)因素對振蕩周期T的影響Fig.1 The influence of experimental factors of malonic acid (a),the mixture of acids (b), potassium bromate (c),ammonium cerous sulfate (d),on the oscillation period T

B-Z振蕩反應(yīng)體系以丙二酸為有機(jī)底物，只有當(dāng)丙二酸的濃度高于0.4mol/L時(shí)，才能為引起B(yǎng)-Z振蕩提供足夠的能量。在丙二酸的濃度為0.9mol/L時(shí)振蕩周期最大，因此，確定丙二酸的濃度為0.9mol/L。

B-Z振蕩反應(yīng)一般由硫酸提供酸性環(huán)境，采用磷酸代替部分硫酸后，由于磷酸會(huì)與Ce4+發(fā)生沉淀反應(yīng)，因此會(huì)導(dǎo)致振蕩反應(yīng)振幅減小，周期增加，當(dāng)磷酸占比增加到一定程度后，振蕩反應(yīng)無法發(fā)生。實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，磷酸存在會(huì)增加維生素C對系統(tǒng)擾動(dòng)的幅度，同時(shí)，為研究磷酸對體系的影響，所以選擇磷酸占硫酸磷酸的體積分?jǐn)?shù)為60%。

溴酸鉀是BZ反應(yīng)中的氧化劑，實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，當(dāng)KBrO3的濃度低于0.2mol/L時(shí)，產(chǎn)生的Br-濃度太低以致于不能產(chǎn)生振蕩行為。當(dāng)溴酸鉀的濃度為0.5mol/L時(shí)，體系的振蕩周期最大，選定溴酸鉀濃度為0.5mol/L。

硫酸鈰銨中的Ce4+是整個(gè)反應(yīng)中的催化劑，考察了Ce4+在0.002～0.008mol/L范圍內(nèi)對化學(xué)振蕩圖形穩(wěn)定性的影響，選擇0.008mol/L作為實(shí)驗(yàn)濃度。

2.2 維生素C對BZ振蕩反應(yīng)的影響

待化學(xué)振蕩體系穩(wěn)定后，在振蕩電勢到達(dá)最低點(diǎn)時(shí)，用微量注射器分別加入不同濃度的維生素C溶液，得到擾動(dòng)圖譜。如下圖所示為加入1mL 0.25mg/mL維生素C所產(chǎn)生的的擾動(dòng)圖譜，其中圖2為以硫酸為酸性介質(zhì)下的振蕩圖譜，圖3為以硫酸-磷酸混酸為酸性介質(zhì)下的振蕩圖譜，可以發(fā)現(xiàn),采用磷酸取代硫酸會(huì)降低維生素C對于振幅的擾動(dòng),振幅變化從29mv降低到10mv，但能夠增加對于周期的擾動(dòng)，周期變化值從接近0s增加到4s左右，本實(shí)驗(yàn)選擇磷酸條件下考察振蕩周期受維生素C濃度的影響。

圖2 硫酸條件下維生素C對振蕩體系的影響Fig.2 effect of vitamin C on the oscillating system under sulfuric acid conditions

圖3 硫酸-磷酸混酸條件下維生素C對BZ振蕩體系的影響Fig.3 effect of vitamin C on the oscillating system under mixed acid conditions

2.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立

在上述選定條件下，考察不同濃度維生素C對于BZ振蕩反應(yīng)的影響。配置一系列不同濃度的維生素C溶液，待振蕩系統(tǒng)穩(wěn)定后加入維生素C溶液，記錄振蕩曲線。對振蕩曲線進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)，當(dāng)維生素C的濃度在0.03125mg/mL～0.25mg/mL范圍內(nèi)時(shí)，維生素C濃度的負(fù)對數(shù)(-logC)與其體系振蕩周期的改變量△T存在一定的線性關(guān)系，其線性回歸方程為△T=2.3313logC +7.6579,線性相關(guān)系數(shù)R=0.9450，標(biāo)準(zhǔn)曲線見圖4，為驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性和重現(xiàn)性，在同一條件下進(jìn)行10次平行試驗(yàn)，計(jì)算標(biāo)準(zhǔn)偏差為2%，方法具有可行性。

圖4 △T與維生素C濃度的負(fù)對數(shù)的線性關(guān)系Fig.4 linear relationship between △T and the negative logarithm of vitamin C concentration

2.4 可能的反應(yīng)機(jī)理

B-Z振蕩反應(yīng)反應(yīng)機(jī)理復(fù)雜，比較經(jīng)典的機(jī)理是Field,Koros和Noyes的FKN模型[10，17]，該模型包括20個(gè)基元反應(yīng)，且Br-和HBrO2是其中兩個(gè)關(guān)鍵組分。該反應(yīng)的總反應(yīng)為：

其反應(yīng)機(jī)理中主要反應(yīng)有：

BrO3-+4Ce3++5H+→HOBr+4Ce4++2H2O

(2)

BrCH(COOH)2+4Ce4++HOBr+H2O→2Br-+3CO2↑+4Ce3++6H+

(3)

根據(jù)FKN機(jī)理，磷酸取代硫酸可能對振蕩反應(yīng)體系造成如下影響：

其次，由于硫酸的酸性強(qiáng)于磷酸，以磷酸取代硫酸會(huì)導(dǎo)致溶液中氫離子濃度降低，根據(jù)FKN機(jī)理，反應(yīng)中許多反應(yīng)均為酸催化機(jī)理，因此磷酸的加入會(huì)增加pH值，降低反應(yīng)速率，增加反應(yīng)周期。

其三，磷酸含量的增加會(huì)增加溶液的離子強(qiáng)度，增強(qiáng)溶液的鹽效應(yīng)，有利于各反應(yīng)速率的提高，降低反應(yīng)周期，以上三個(gè)作用導(dǎo)致的結(jié)果是反應(yīng)周期先增加后減小。

最后，磷酸根具有較強(qiáng)的配位能力，在一定濃度下與Ce(IV)會(huì)發(fā)生沉淀反應(yīng)，能夠降低溶液中Ce(IV)的活度，進(jìn)一步的降低電對的電極電勢，振幅減小。

向振蕩體系中加入維生素C后，反應(yīng)周期延長，振幅增加，并且磷酸存在下周期變化明顯而振幅變化減弱，原因可能是：

首先，維生素C是一種常見的還原劑，它的烯二醇結(jié)構(gòu)能夠與反應(yīng)體系中的溴發(fā)生氧化還原反應(yīng)，生成溴離子，使得A組反應(yīng)時(shí)間延長，反應(yīng)周期增加，該組反應(yīng)需要?dú)潆x子參與，磷酸存在時(shí)，氫離子濃度較低，反應(yīng)更慢，因此變化更加明顯。

其次，維生素C含有多羥基結(jié)構(gòu)，具有一定的配位能力，可以與金屬離子產(chǎn)生不同程度的配位作用，導(dǎo)致Ce4+/Ce3+電極電勢改變，電位降低，導(dǎo)致振幅增加，當(dāng)磷酸存在時(shí)，由于磷酸根本身即具有很好的配位能力，因此可以和維生素C產(chǎn)生競爭反應(yīng)，從而導(dǎo)致維生素C對振蕩體系振幅的影響減弱。

3 結(jié)論

本文研究了以磷酸-硫酸混酸替代硫酸提供酸性環(huán)境下BZ振蕩反應(yīng)的基本規(guī)律，并使用該體系測定維生素C的含量；研究發(fā)現(xiàn)維生素C濃度C的負(fù)對數(shù)與振蕩周期改變值△T在0.03125～0.25mg/mL范圍內(nèi)具有良好的線性關(guān)系，△T =2.3313logC +7.6579,線性相關(guān)系數(shù)R=0.9450；維生素C和磷酸均在人體中廣泛存在且發(fā)揮了重要的生理功能，本文研究發(fā)現(xiàn)，磷酸存在條件下，維生素C會(huì)對BZ振蕩反應(yīng)產(chǎn)生特殊影響，這一實(shí)驗(yàn)事實(shí)能夠加深對維生素C在人體內(nèi)作用機(jī)理的理解，具有一定的指導(dǎo)意義。