黃敏敏 劉 洋 顏振蘭 張閩春 李 巍 姚清華③ 羅 欽③

(1福建省農業(yè)科學院農業(yè)質量標準與檢測技術研究所 福建福州350003;2福建省南平市農業(yè)局 福建南平353000;3福建省武夷山市食用菌站 福建武夷山354300)

秀珍菇 （Pleurotus geesteranus），又名紫孢側耳、小平菇、姬菇、黃白平菇、美味側耳等，屬于真菌門，擔子菌綱，傘菌目，側耳科，側耳屬，是近年來栽培面積最廣的珍稀食用菌之一。該菇富含鮮味氨基酸、甜味氨基酸、支鏈氨基酸、脂肪酸、蛋白多糖及維生素和鐵、鈣、磷、鋅等微量元素。尤為值得一提的是，秀珍菇的蛋白質含量高于蘑菇、香菇、草菇等食用菌，有“菇中極品”之稱。掃描電鏡已廣泛應用于番茄、水稻、甘藍、烤煙等農作物［1-6］和野兔、扁蛾、嗜尸性蠅等動物［7-9］及多種細菌和真菌［10-16］的亞微機構和超微結構研究。培養(yǎng)基酸堿度不僅能夠促進食用菌菌絲加快、提高食用菌產量，而且具有改善食用菌品質的作用。但關于應用掃描電子顯微鏡觀察不同酸堿度的液體培養(yǎng)基對福秀163菌絲體大小、鎖狀個數和表面結構等的影響尚未見報道。本研究就不同酸堿度的液體培養(yǎng)基對福秀163菌絲體大小、鎖狀個數和表面結構影響進行研究，以期為福秀163生產等提供科學參考。

1 材料與方法

1.1 材料

供試菌種：供試品種為福秀163，由福建省農業(yè)科學院土壤肥料研究所環(huán)保研究室食用菌育種課題組提供。

培養(yǎng)基配方：土豆200g、白糖20g、水1000mL。

試劑：鹽酸和氫氧化鈉等，均為分析純，購于國藥集團化學試劑有限公司。試驗用儀器為日本電子（JEOL） JSM-6380Lv型掃描電子顯微鏡.購于日本電子有限公司。

1.2 方法

1.2.1 試驗設計

先將配制好的液體培養(yǎng)基用鹽酸和氫氧化鈉制成pH 4（A1）、pH 5（A2）、pH 6（A3）、pH 7（A4）、pH 8（A5） 5個梯度。試驗共分5個處理，每處理3個重復，每重復1瓶，每三角瓶裝量為50 mL，高壓滅菌。待培養(yǎng)基溫度冷卻至26℃左右接種。接種后放入26℃生化培養(yǎng)箱培養(yǎng)，取培養(yǎng)18 d的菌絲樣品作電鏡觀測。

1.2.2 電鏡觀測方法

切取不同酸堿度處理的新鮮福秀163菌絲體，迅速投入濃度為5%的戊二醛固定液中固定，并在4℃冰箱中存放4h。用0.2 mol/L磷酸緩沖液漂洗3次，15 min/次。再用1%濃度的鋨酸對樣品進行第二次固定，放在4℃冰箱存放2 h。將雙固定好的樣品先用0.2 mol/L磷酸緩沖液沖洗3次，每次10～15 min，再用乙醇進行梯度脫水：50%、70%、80%、90%，各10～15 min，100%的乙醇脫水3次，每次10 min，用環(huán)氧丙烷溶液置換2次。最后將樣品置于日立HCP-2臨界點干燥儀中進行干燥處理。干燥后的樣品用銅臺和導電膠粘好后放入離子鍍膜儀上噴鍍黃金，再用掃描電子顯微鏡進行觀察拍照。

1.2.3 測定方法［17］

采用直接測定方法計算菌絲寬窄和菌絲鎖狀個數。每個樣品的每個項目均分別觀察3個視野，據以（菌絲鎖狀、菌絲）計算個數及測量其大小，按放大倍率換算成實際長度；采用了DPS軟件進行差異顯著性檢驗。

2 結果與分析

2.1 不同酸堿度對福秀163菌絲干重的影響

由圖1看出，A4處理的福秀163菌絲干重最重，分別比pH 4、pH 5、pH 6和pH 8處理的福秀163菌絲干重重了6.60%、4.31%、2.42%和10.78%，經生物統(tǒng)計差異極顯著水平（p＜0.01）。

圖1 酸堿度對福秀163菌絲干重的影響

2.2 不同酸堿度對福秀163菌絲直徑的影響

2.2.1 不同酸堿度對福秀163菌絲最大直徑的影響

由圖2可知，pH 5、pH 6和pH 7處理的福秀163菌絲最大直徑之間差異不顯著（p＞0.05）。但pH 7處理的福秀163菌絲最大直徑比pH 4和pH 8處理的福秀163菌絲分別增加了31.25%和35.49%，經統(tǒng)計差異達極顯著水平（p＜0.01）。

圖2 酸堿度對福秀163菌絲最大直徑的影響

2.2.2 不同酸堿度對福秀163菌絲最小直徑的影響

由圖3看出，pH 4、pH 5、pH 6和pH 7處理的福秀163菌絲最小直徑之間經生物統(tǒng)計差異不顯著（p＞0.05）。但A5處理的福秀163菌絲最小直徑比pH 4、pH 5、pH 6和pH 7處理的福秀163菌絲窄大了69.23%、69.23%、83.33%和120.00%，差異極顯著水平（p＜0.01）。

圖3 酸堿度對福秀163菌絲最小直徑的影響

2.3 不同酸堿度對福秀163菌絲體中鎖狀個數的影響

由圖4看出，pH 7處理的福秀163菌絲鎖狀個數最多，分別比pH 4、pH 5、pH 6和pH 8處理的福秀163鎖狀個數多了200.00%、125.00%、60.71%和400.00%，經生物統(tǒng)計差異極顯著水平（p＜0.01）。

圖4 酸堿度對福秀163菌絲體中鎖狀個數的影響

2.4 不同酸堿度對福秀163菌絲體表面結構的影響

掃描電鏡觀察顯示，不同酸堿度下福秀163菌絲體形態(tài)發(fā)生明顯改變，甚至菌絲和鎖狀形態(tài)嚴重改變；有的菌絲體扁，有的菌絲體大小不均勻還出現(xiàn)凹或凸現(xiàn)象，且表面紋飾或清晰或模糊，有的鎖狀大小均勻，有的干癟或無紋飾。

從圖5可以看出，pH 4處理的福秀163菌絲上有較淺紋飾，大小較均勻，部分呈圓形，部分呈腸形；鎖狀大小均勻，部分紋飾模糊。A2處理時，菌絲大小不均勻，部分呈圓形，部分呈扁條形，表面光滑或有較淺紋飾，有竹節(jié)狀菌絲；鎖狀大小不均勻。A3處理的菌絲大小不均勻，呈圓形；鎖狀大小不均勻，有的還出現(xiàn)干癟。當pH 7處理時，菌絲大小不均勻，部分沒紋飾，部分有紋飾，形態(tài)變化大；鎖狀無紋飾且個數最多。當pH 8處理時，菌絲大部分呈豬大花腸狀，大小較均勻。

圖5 酸堿度對福秀163菌絲體表面結構的影響

3 討論

酸堿度對食用菌的產量和品質具有一定的影響。宮志遠等［18］研究了酸堿度對5種珍稀食用菌——阿魏蘑、杏鮑菇、真姬菇、酒紅球蓋菇和楊樹菇菌絲生長的影響，結果表明：阿魏蘑、杏鮑菇、真姬菇、酒紅球蓋菇和楊樹菇菌絲生長的最適pH分別為6.0、5.4、6.0、5.4和6.8。楊順強等［19］研究在食用菌菌種制作、培養(yǎng)過程中，培養(yǎng)基是關鍵性因素。其中，培養(yǎng)基的酸堿度對食用菌菌種的生長尤為重要，關系到菌種制作的成敗。為此，以平菇和香菇為試驗材料，以PDA培養(yǎng)基作為基礎培養(yǎng)基，將培養(yǎng)基的pH分別調至5.0、6.0、8.0、9.0，對照（CK）為自然酸堿度，接種培養(yǎng)平菇和香菇母種。接種后觀察菌絲生長、污染狀況，同時測定菌落直徑。結果表明：香菇在偏酸環(huán)境下長勢優(yōu)于堿性環(huán)境，其中在pH 6處理下長勢最好，污染最低，成活率達70%；平菇對酸堿度的適應范圍較寬，在所設處理下均能正常生長，其中在自然酸堿度下長勢最好，污染最低，成活率達80%。郝冊等［20］為了確定北京懷柔地區(qū)的墨汁鬼傘菌絲體生長的最佳酸堿度和溫度，為人工馴化栽培提供依據，采用平板培養(yǎng)法分別研究了不同酸堿度及溫度對該地區(qū)墨汁鬼傘菌絲體生長的影響。結果表明，在PDA+玉米粉培養(yǎng)基上，墨汁鬼傘菌絲體在pH 5～10均能生長，pH 6～8菌絲生長健壯，生長速度稍慢。pH為9時菌絲濃密，生長速度最快，為最適合的酸堿度。肖興等［21］研究不同培養(yǎng)基和pH對巨大口蘑菌絲生長的影響。在pH為7.0時，菌絲生長速度最快，菌絲粗壯、濃白、致密。黃俊軒等［22］用飽和D-最優(yōu)設計方法，探討了馬鈴薯汁濃度和酸堿度對姬松茸菌絲體生長的影響，得出pH 6.201能提高菌絲生長速度。江枝和等［23］研究發(fā)現(xiàn)，pH為8.5的培養(yǎng)料栽培的虎奶菇菌核的蛋白質氨基酸評分和營養(yǎng)指數分別為30.91和10.68，均居5種pH處理的第一位；化學評分、必需氨基酸指數和生物價分別為29.67、79.56和75.02，均居第二位，氨基酸比值系數分為24.76，均居第3位，綜合評價（pH為6.5、7.0、7.5、8.0、8.5）的結果表明，以pH 8.5的培養(yǎng)料栽培虎奶菇菌核的蛋白質營養(yǎng)價值較高。陳志松［24］研究發(fā)現(xiàn)，金針菇適宜pH為5.5～6.2，pH超過6.5，菌絲生長稀疏纖細，生長速度變慢，超過7.5，生長基本停止，培養(yǎng)料散發(fā)一種臭味，容易感染雜菌；pH低于5.0以下，菌絲生長速度明顯變慢，菌種塊形成一個濃的白毛團。劉葉高等［25］發(fā)現(xiàn)茶薪菇、杏鮑菇、阿魏菇菌絲生長最適宜的pH為7～7.5，茶薪菇在pH為6.5～7.5菌絲滿袋最快為44 d，生物轉化率最高為47%，杏鮑菇在pH為6.5～7.5菌絲滿袋最快為34 d，生物轉化率為46%，阿魏菇在pH為6.5～7.5菌絲滿袋最快為38 d，生物轉化率最高為42%。毛順興［26］研究發(fā)現(xiàn)，以草代料栽培阿魏菇在pH為8～10菌絲生長健壯，污染率減少，最適pH比常規(guī)栽培阿魏菇高1.5～2.5。但未見秀珍菇及其食藥用菌的其它菇形態(tài)等特征掃描電鏡觀察的報道。

本研究結果表明，pH 7處理的福秀163菌絲干重、菌絲大小極顯著高于其它處理（p＜0.01）。掃描電鏡觀察結果顯示，pH 7處理的菌絲大小不均勻，部分沒紋飾，部分有紋飾，形態(tài)變化大；鎖狀無紋飾且鎖狀個數最多，極顯著高于其它處理（p＜0.01）。

筆者主要從形態(tài)學的角度就酸堿度對秀珍菇新品種福秀163菌絲得影響展開研究，今后將繼續(xù)在細胞、亞細胞及分子水平上進行深入研究，以進一步探討酸堿度值對食（藥）用菌的作用機理。