摘要：社會(huì)的進(jìn)一步發(fā)展，促使現(xiàn)階段我國食品行業(yè)發(fā)展速度不斷加快，此種背景下，如何保證食品安全質(zhì)量，成為居民十分關(guān)注的話題之一?；诖耍疚牧⒆阌谑称忿r(nóng)藥殘留檢測(cè)角度，分析了加速溶劑萃取以及超高效液相色譜檢測(cè)具體內(nèi)容，以常見菌類食品為例研究了具體檢測(cè)方法。

關(guān)鍵詞：加速溶劑萃取;超高效液相色譜;食用菌

中圖分類號(hào)：S-3

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

DOI：10.19754/j.nyyjs.20191115010

引言

近幾年，隨著我國經(jīng)濟(jì)水平的不斷提升，人們對(duì)“吃”進(jìn)行了重新定義，越來越多的人要求在吃得飽的前提下吃得少、吃得好，這就需要考慮到食品安全問題。加速溶劑萃取是現(xiàn)階段應(yīng)用較為廣泛的一種綠色分離技術(shù)，不僅操作較為簡(jiǎn)便，而且檢測(cè)環(huán)節(jié)綠色化。因此，對(duì)加速溶劑萃取—超高效液相色譜檢測(cè)農(nóng)作物中農(nóng)藥殘留相關(guān)內(nèi)容研究有著鮮明現(xiàn)實(shí)意義。

1 檢測(cè)農(nóng)藥殘留

蘑菇是人們生活中較為常見的一種食品，因?yàn)槠渥陨砭哂刑岣呙庖吡?、抗癌、降低血糖與膽固醇等功效，所以深受人們喜愛。隨著經(jīng)濟(jì)水平的提升，人們對(duì)于各類食用菌需求量的增加，導(dǎo)致一些不法商販應(yīng)用大量農(nóng)藥提升菌類存儲(chǔ)時(shí)間，對(duì)居民健康造成影響。常見的農(nóng)藥殘留物可以分為以下幾種：甲基硫菌靈，主要應(yīng)用在菌類種植階段;多菌靈，其實(shí)是甲基硫菌靈的一種代謝產(chǎn)物，存在于菌類種植的各個(gè)階段;環(huán)丙氨嗪，屬于三嗪類農(nóng)藥的1種，應(yīng)用目的是控制作物正常生長(zhǎng);三聚氰胺，也可以稱之為是環(huán)丙氨嗪的一種代謝產(chǎn)物，只不過在代謝進(jìn)行過程中需要借助植物體內(nèi)脫烷基才能形成。

隨著人們對(duì)食品安全的重視程度提升，以及農(nóng)藥用量的增加，我國對(duì)上述各類農(nóng)藥殘留量進(jìn)行了明確規(guī)定。例如：甲基硫菌靈的殘留量不能超過3ng/kg等。但是這些規(guī)定都是針對(duì)各類常見蔬菜，對(duì)于食用菌并沒有參考價(jià)值。

2 檢測(cè)技術(shù)分析

隨著科學(xué)技術(shù)的不斷進(jìn)步，可以應(yīng)用到食品農(nóng)藥殘留檢測(cè)中的方法越來越多，但是從各類檢測(cè)方法的應(yīng)用情況而言，仍具有一定局限性。例如：LC–MS/MS系統(tǒng)在應(yīng)用過程中表現(xiàn)出了極高的靈敏度以及應(yīng)用價(jià)值，但是其應(yīng)用范圍較小，造成此種現(xiàn)象的原因在于檢測(cè)價(jià)格昂貴。除此之外，傳統(tǒng)的試樣處理方法在實(shí)際應(yīng)用過程中無法做到殘留農(nóng)藥的快速分離，這對(duì)于檢測(cè)精度的影響較為明顯。鑒于此，在現(xiàn)階段的食品檢測(cè)過程中，需要研究并且開發(fā)一種適應(yīng)性較強(qiáng)、無污染且應(yīng)用簡(jiǎn)便、成本低的檢測(cè)方法[1]。本文提出，應(yīng)用ASE進(jìn)行樣品萃取，然后應(yīng)用SPE進(jìn)行凈化，最后應(yīng)用UPLC-DAD進(jìn)行分析檢測(cè)。此種檢測(cè)方法不僅可以提升檢測(cè)效率，還具有較高的靈敏度。

3 檢測(cè)內(nèi)容論述

3.1 儀器與試劑

儀器的選擇中，超高效液相色譜儀器是必備設(shè)備之一，除此之外還需要配備溶劑萃取儀、超聲波清洗機(jī)、元素型1820A超純水機(jī)以及固相萃取裝置等設(shè)備。

必備試劑有各類農(nóng)藥殘留物的對(duì)照品，主要分為甲基硫菌靈、多菌靈、三聚氰胺以及環(huán)丙氨嗪。以上4種對(duì)照液溶度要求為：>97.7%、>97.2%、>99.5%、>99.5%。除此之外，還需要配備甲醇、超純水、鹽酸以及丙酮等。

檢測(cè)應(yīng)用的流動(dòng)相A為甲醇溶液;流動(dòng)相B為融合溶液，由乙酸銨+水+三氟乙酸調(diào)節(jié)而成，最終pH控制在3.8。

萃取溶劑主要是由丙酮（100mL）和甲醇，最終需要定容在500mL，pH控制在3.0。

標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液：0.01g甲基硫菌靈以及多菌靈溶劑應(yīng)用甲醇，最終定容到100mL;0.02g環(huán)丙氨嗪以及三聚氰胺同樣應(yīng)用甲醇進(jìn)行定容，定容規(guī)格與上述相同。工作液：結(jié)合實(shí)際需求進(jìn)行工作液配置，配置用試劑為甲醇和水。

3.2 樣品萃取與凈化

本次實(shí)驗(yàn)中，所有應(yīng)用到的食用菌樣品全部都是常見菌類品種，從超市隨機(jī)采購。采購之后，將食用菌進(jìn)行勻漿處理，并且進(jìn)行避光存儲(chǔ)，存儲(chǔ)溫度為4℃。

加速溶劑萃取：在對(duì)應(yīng)儀器萃取池底部設(shè)置1層直徑為16.2mm的墊片，在其中放置0.5g硅藻土，目的在于保證收集瓶干凈整潔，不會(huì)有多余雜質(zhì)進(jìn)入。樣品稱取量為10g，將其均勻地混合到萃取池中。萃取溶劑為丙酮、甲醇、鹽酸混合液，保證萃取溫度為70℃恒定，壓強(qiáng)為10.3MPa恒定。進(jìn)行初期的靜態(tài)萃取，時(shí)間為5min，一共需要循環(huán)2次。之后以10000r/min的速度進(jìn)行離心，離心時(shí)間為10min，可以得到檢測(cè)應(yīng)用的上清液，將上清液轉(zhuǎn)移到梨形瓶進(jìn)行旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)處理，最后應(yīng)用3∶7比例的甲醇水溶液進(jìn)行定容，定容規(guī)格為3mL。

固相萃取凈化：將固相萃取小柱應(yīng)用甲醇溶液進(jìn)行活化處理，應(yīng)用清水進(jìn)行平衡，加入待測(cè)樣品。觀察待測(cè)樣品流動(dòng)情況，在其完全通過固相萃取小柱之后，應(yīng)用鹽酸與甲醇進(jìn)行清理，上述過程中所有流出液體需要全部丟棄。洗脫過程中應(yīng)用的溶劑為氨水甲醇溶液，此過程需要對(duì)洗脫液進(jìn)行收集，并且應(yīng)用氮?dú)鈱⑾疵撘捍蹈伞?yīng)用3∶7的甲醇水溶液定容，待液相檢測(cè)（以上所有溶液均為3mL）。

3.3 超高效液相分析

應(yīng)用色譜柱進(jìn)行檢測(cè)，要求色譜柱的柱溫度在40℃。在檢測(cè)之前進(jìn)行梯度洗脫，該過程中應(yīng)用到的溶劑為乙酸銨+水+三氟乙酸和甲醇。確定4種殘留農(nóng)藥最大檢測(cè)波長(zhǎng)分別為甲基硫菌靈264nm、多菌靈280nm、環(huán)丙氨嗪240nm、三聚氰胺237nm。保證外部條件最佳，對(duì)殘留農(nóng)藥進(jìn)行峰值、峰面積、工作曲線測(cè)定。

4 結(jié)果分析

4.1 檢測(cè)波長(zhǎng)分析

規(guī)定色譜條件一致，檢測(cè)4類殘留農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)液，應(yīng)用儀器在190～400mm波長(zhǎng)范圍內(nèi)進(jìn)行測(cè)試。檢測(cè)結(jié)果表明，TM、CAR、CYR、MEL分別在280nm、264nm、240nm、237nm時(shí)存在有特征吸收峰，比對(duì)結(jié)果為四者在237nm處均有響應(yīng)，并且干擾并不大;最終確定，CYR、MEL的最佳波長(zhǎng)參數(shù)為237nm，這一檢測(cè)結(jié)果與其它文獻(xiàn)參數(shù)相同。

4.2 線性和檢出限

應(yīng)用流動(dòng)相進(jìn)行逐級(jí)稀釋，最終得出甲基硫菌靈、多菌靈、環(huán)丙氨嗪、三聚氰胺濃度分別為5～500ng/mL、4～400ng/mL、3.6～360ng/mL、2.4～240ng/mL，并且保證檢測(cè)條件最佳狀態(tài)進(jìn)峰面積測(cè)定。而對(duì)于檢測(cè)線性的展示則是通過坐標(biāo)軸完成，本次采用的坐標(biāo)軸橫縱坐標(biāo)分別為分析物濃度和峰面積。通過線性檢測(cè)分析可以發(fā)現(xiàn)，以上4種分析物都存在良好的線性關(guān)系，按照規(guī)定，最終確定上述4種分析物的檢出限分別為1.7、1.2、0.72以及1.1[2]。對(duì)照相關(guān)的GB/T22388以及GC-MS，本文應(yīng)用的檢測(cè)方法更加便捷，并且具有良好的檢測(cè)效果。

4.3 精確度

在精確度的檢測(cè)過程中，保證檢測(cè)環(huán)境為最佳條件，最終經(jīng)測(cè)試4種分析物的日標(biāo)準(zhǔn)差基本維持在2.3%～4.5%之間，而相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)差則維持在3.1%～6.3%之間，上述數(shù)據(jù)證明，本文應(yīng)用到的檢測(cè)方法具有良好重現(xiàn)性。

4.4 樣品分析

在本次檢測(cè)過程中，采集的食用菌為常見的香菇、杏鮑菇、雙孢菇以及金針菇等，檢測(cè)時(shí)確保萃取、凈化、分析等過程沒有受到外界環(huán)境條件影響，最終檢測(cè)結(jié)果為：在上述食用菌中沒有檢測(cè)到4種分析物，也就是不存在農(nóng)藥殘留。其中，香菇的4種分析物檢測(cè)回收率在83%～99%之間，杏鮑菇在82%～105%之間，雙孢菇以及金針菇在83%～98%、85%～97%之間。

4.5 檢測(cè)結(jié)果分析

本文檢測(cè)過程中所提出的ASE-SPE結(jié)合UPLC-DAD方法，在實(shí)際應(yīng)用過程中，成功的檢測(cè)出采購蘑菇樣品中甲基硫菌靈、多菌靈、環(huán)丙氨嗓、三聚氰胺農(nóng)藥殘留量。從檢測(cè)應(yīng)用情況以及具體表現(xiàn)角度而言，此種方法具有很好的立足點(diǎn)，較高的靈敏度，精密度和較低的溶劑消耗，4種分析物能夠在ug/kg水平上檢測(cè)藥物的殘留[3]。因此，該方法可以用于蘑菇樣品中甲基硫菌靈、多菌靈、環(huán)丙氨嗦和三聚氰胺的常規(guī)檢測(cè)，并且可以發(fā)揮重要作用。

5 結(jié)論

作為一種綠色檢測(cè)技術(shù)，加速溶劑萃取方法在現(xiàn)階段的食品檢測(cè)中可以發(fā)揮重要作用。本文以上內(nèi)容以超市中常見的菌類食品為例，通過檢測(cè)證明，該類方法可以精準(zhǔn)的確定出菌類食品常見甲基硫菌靈以及多菌靈等農(nóng)藥殘留量，并且檢測(cè)流程較為簡(jiǎn)單，不會(huì)對(duì)外界環(huán)境造成二次污染，可以進(jìn)一步完善食品檢測(cè)工作。

參考文獻(xiàn)

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[3]趙紅霞.超高效液相色譜—三重四極桿串聯(lián)質(zhì)譜（UPLC-QqQ-MS/MS）對(duì)農(nóng)作物中農(nóng)藥多殘留的檢測(cè)研究[D].濟(jì)南：山東大學(xué)，2013.

作者簡(jiǎn)介：

崔曉麗（1980-），女。本科，農(nóng)藝師。研究方向：農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全。