王 輝，沈 玲，姬 翔

0引言

年齡相關(guān)性黃斑變性(age-related macular degeneration，ARMD)多發(fā)生于50歲以上老年人，又被稱(chēng)為老年黃斑變性。隨著社會(huì)老齡化的加劇，ARMD發(fā)病率逐年上升，已成為第三大致盲原因，嚴(yán)重威脅中老年人身體健康[1]。ARMD分為干性和濕性?xún)煞N類(lèi)型，臨床中以干性患者為主。目前，干性ARMD主要應(yīng)用抗氧化劑進(jìn)行治療，缺少有效的藥物緩解ARMD進(jìn)展[2]。磷脂酰肌醇-3-激酶/絲蘇氨酸蛋白激酶(phosphatidylinositol-3-kinase/serine threonine protein kinase，PI3K/Akt)信號(hào)通路是細(xì)胞內(nèi)重要的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路之一，可調(diào)控下游多種活化因子，參與細(xì)胞的增殖、分化和凋亡等生命過(guò)程[3]。研究表明，PI3K/Akt信號(hào)通路在增殖性玻璃體視網(wǎng)膜病、后發(fā)性白內(nèi)障、青光眼等多種眼科疾病的發(fā)生和發(fā)展過(guò)程中發(fā)揮關(guān)鍵作用[4]。二十二碳六烯酸(docosahexaenoic acid，DHA)是人體必須的不飽和脂肪酸，可促進(jìn)視網(wǎng)膜光感受器細(xì)胞和中樞神經(jīng)系統(tǒng)的發(fā)育。研究表明，DHA可能通過(guò)ROS/Nrf2途徑誘導(dǎo)視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞表達(dá)HO-1，從而發(fā)揮對(duì)視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞的保護(hù)作用[5]。飲食補(bǔ)充DHA可能通過(guò)提高胰島素敏感性，降低血清成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子21顯著改善非酒精性脂肪性肝病患者血脂水平[6]。DHA可降低人視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞ARPE-19凋亡率，誘導(dǎo)ARPE-19細(xì)胞HO-1 mRNA和蛋白表達(dá)，對(duì)ARPE-19細(xì)胞發(fā)揮保護(hù)作用[7]。目前，DHA對(duì)ARMD患者光感受器影響的研究相對(duì)較少。本研究通過(guò)光損傷法建立ARMD大鼠模型，研究DHA對(duì)ARMD大鼠視網(wǎng)膜光感受器細(xì)胞凋亡的影響，并探討了其可能的作用機(jī)制，以期為該疾病的治療提供新方法。

1材料和方法

1.1材料

1.1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物健康雄性SD大鼠60只，清潔級(jí)，8周齡，體質(zhì)量160～230g，由上海斯萊克實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限責(zé)任公司提供，動(dòng)物合格證號(hào)：SCXK(滬)2017-0005。大鼠自由飲水和飲食，飼養(yǎng)溫度20℃～25℃，濕度50%～56%，光照12h。本研究經(jīng)本院動(dòng)物倫理委員會(huì)批準(zhǔn)同意。

1.1.2實(shí)驗(yàn)試劑和儀器DHA(批號(hào)：20171115)，美國(guó)Sigma公司；TUNEL試劑盒(批號(hào)：20171216)，瑞士羅氏(Roche)公司；TNF-α(批號(hào)：20171216)和IL-6(批號(hào)：20171329)試劑盒，南京建成生物工程研究所；BCA試劑盒(批號(hào)：20180125)，上海碧云天公司；NF-κBp65(批號(hào)：Bs-0467R)和p-NF-κBp65(批號(hào)：Bs-0458R)抗體，北京博奧森生物技術(shù)有限公司；PI3K(批號(hào)：Sc1236)和p-PI3K抗體(批號(hào)：Sc1152)，Santa Cruz公司；Akt(批號(hào)：9275)和p-Akt(批號(hào)：9246)抗體，美國(guó)Cell Signaling公司；Bax(批號(hào)：Sc1215)和Bcl-2(批號(hào)：Sc1237)抗體，美國(guó)Santa Cruz公司；cleved-caspase-3抗體(批號(hào)：20180214)，武漢博士德生物工程有限公司。珊頓石蠟切片機(jī)，英國(guó)；XSP-9CA光學(xué)顯微鏡，上海光學(xué)儀器一廠；H-600型透射電鏡，日本日立公司。

1.2方法

1.2.1實(shí)驗(yàn)分組和模型建立大鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)7d后，按照隨機(jī)數(shù)字表法分為空白對(duì)照組、模型組、低劑量DHA組(L-DHA組)、中劑量DHA組(M-DHA組)和高劑量DHA組(H-DHA組)，每組12只。參照文獻(xiàn)方法采用視網(wǎng)膜光損傷法建立干性ARMD大鼠模型[8]。L-DHA組、M-DHA組和H-DHA組分別按劑量2.5、5.0、10μg/kg玻璃體注射DHA[9]。空白對(duì)照組和模型組注射等量生理鹽水。造模起開(kāi)始治療，每10d注射一次，注射5次。

1.2.2標(biāo)本采集最后一次給藥結(jié)束后，大鼠腹腔注射2%戊巴比妥鈉麻醉，斷頸處死，冰浴下摘取眼球，沿赤道部剖開(kāi)，剝離視網(wǎng)膜組織。其中每組中6只大鼠右眼視網(wǎng)膜組織4%多聚甲醛固定，制作石蠟切片，HE染色后行病理學(xué)觀察和TUNEL檢測(cè)。6只大鼠的左眼視網(wǎng)膜組織2.5%戊二醛固定，行透射電鏡觀察。剩余6只大鼠視網(wǎng)膜組織-80℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.3 TUNEL原位凋亡檢測(cè)石蠟切片經(jīng)常規(guī)脫蠟處理、PBS沖洗后，將切片置于濕盒中，滴加50μL蛋白酶工作液，37℃水浴20min，PBS沖洗3次，滴加20μL TUNEL反應(yīng)液，37℃水浴1h。PBS沖洗3次后，滴加20μL Converter-POD溶液，37℃水浴30min。PBS沖洗3次后，滴加50μL DAB工作液進(jìn)行顯色反應(yīng)，PBS沖洗。蘇木素復(fù)染10s，自來(lái)水漂洗，鹽酸、酒精分化數(shù)秒，自來(lái)水漂洗，1%氨水泛藍(lán)，自來(lái)水漂洗。酒精梯度脫水，二甲苯透明，中性樹(shù)脂封片。400倍鏡下觀察TUNEL染色切片，分別計(jì)算外核層和神經(jīng)節(jié)細(xì)胞層細(xì)胞凋亡指數(shù)(AI)。AI =凋亡細(xì)胞數(shù)/總細(xì)胞數(shù)×100%。

1.2.4酶聯(lián)免疫吸附法測(cè)定視網(wǎng)膜組織TNF-α和IL-6水平取視網(wǎng)膜組織1g，添加9mL生理鹽水于勻漿器中制備組織勻漿液，3000r/min離心10min后，保留上清，參照酶聯(lián)免疫測(cè)定視網(wǎng)膜組織TNF-α和IL-6水平，在酶標(biāo)包被板添加50μL標(biāo)準(zhǔn)品，設(shè)空白孔(不添加樣品和酶標(biāo)試劑)、待測(cè)樣品孔，將40μL樣品、10μL親和素加入待測(cè)樣品孔，封板后37℃反應(yīng)30min，清洗、拍干后，添加50μL酶標(biāo)試劑(空白孔除外)，封板后37℃溫育30min，洗滌、拍干后，添加100μL顯色劑，37℃避光放置5min，添加50μL終止液結(jié)束反應(yīng)，于450nm波長(zhǎng)檢測(cè)各孔OD值，繪制標(biāo)準(zhǔn)品曲線計(jì)算樣品濃度。

1.2.5 Western Blot檢測(cè)蛋白表達(dá)取視網(wǎng)膜組織，充分裂解后，BCA法定量蛋白含量。取30μg蛋白質(zhì)，加入上樣緩沖液，95℃煮沸5min，進(jìn)行SDS-PAGE電泳。電泳結(jié)束后，將蛋白條帶轉(zhuǎn)移至PVDF膜，5%脫脂牛奶37℃封閉1h。TBST洗膜后，分別加入Bax、p-NF-κBp65和cleved-caspase-3、p-PI3K、p-Akt和Bcl-2一抗(1∶300)，4℃孵育12h。TBST洗膜，加入HRP標(biāo)記IgG二抗(1∶5000)，37℃孵育2h。TBST洗膜，加入ECL發(fā)光液，避光顯影，凝膠成像系統(tǒng)自動(dòng)顯影，掃描Bax、p-NF-κBp65和cleved-caspase-3、p-PI3K、p-Akt和Bcl-2蛋白條帶灰度值，以β-actin為內(nèi)參，各蛋白相對(duì)表達(dá)水平=目的蛋白灰度值/β-actin灰度值。

2結(jié)果

2.1各組大鼠HE染色結(jié)果各組大鼠視網(wǎng)膜總厚度、外核層和內(nèi)核層厚度比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=175.879、12.668、19.387)。與空白對(duì)照組比較，模型組大鼠視網(wǎng)膜總厚度、外核層和內(nèi)核層厚度均降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=23.004、5.934、7.182，P<0.05)。與模型組比較，M-DHA組和H-DHA組大鼠視網(wǎng)膜總厚度、外核層和內(nèi)核層厚度均升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(tM-DHA組=13.427、3.099、4.349，tH-DHA組=19.733、5.050、5.985，P<0.05)；L-DHA組大鼠視網(wǎng)膜總厚度升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=7.381，P<0.05)，外核層和內(nèi)核層厚度升高，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05，圖1，表1)。

圖1各組大鼠HE染色結(jié)果(×400)A：空白對(duì)照組；B：模型組；C：L-DHA組；D：M-DHA組；E：H-DHA組。

圖2各組大鼠TUNEL染色結(jié)果(×400)A：空白對(duì)照組；B：模型組(黑色箭頭所示為T(mén)UNEL陽(yáng)性細(xì)胞)；C：L-DHA組；D：M-DHA組；E：H-DHA組。

圖3各組大鼠視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)(×5000)A：空白對(duì)照組；B：模型組；C：L-DHA組；D：M-DHA組；E：H-DHA組。N：神經(jīng)節(jié)細(xì)胞的細(xì)胞核；M：神經(jīng)節(jié)細(xì)胞的線粒體；V：空泡。

組別視網(wǎng)膜總厚度外核層內(nèi)核層空白對(duì)照組167.25±5.2122.37±2.6143.16±3.15模型組110.23±3.14a15.37±1.24a31.24±2.57aL-DHA組124.35±3.57c16.43±1.2833.11±2.59M-DHA組139.43±4.35c18.62±2.25c37.82±2.67cH-DHA組158.34±5.11c21.05±2.46c40.61±2.87c

注：aP<0.05vs空白對(duì)照組；cP<0.05vs模型組。

2.2各組大鼠視網(wǎng)膜細(xì)胞凋亡情況如圖2所示，TUNEL陽(yáng)性細(xì)胞(黑色箭頭)主要分布在神經(jīng)節(jié)細(xì)胞層和視網(wǎng)膜外核層中。各組大鼠神經(jīng)節(jié)細(xì)胞層和外核層細(xì)胞凋亡指數(shù)比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=125.379、150.245，P<0.001)。與空白對(duì)照組比較，模型組大鼠神經(jīng)節(jié)細(xì)胞層和外核層細(xì)胞凋亡指數(shù)升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=20.579、19.833，P<0.05)。與模型組比較，M-DHA組和H-DHA組大鼠神經(jīng)節(jié)細(xì)胞層和外核層細(xì)胞凋亡指數(shù)降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(tM-DHA組=7.934、7.518，tH-DHA組=14.656、14.585，P<0.05)；L-DHA組降低，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05，圖2，表2)。

組別神經(jīng)節(jié)細(xì)胞層外核層空白對(duì)照組8.37±1.216.13±0.82模型組77.51±8.14a62.15±6.87aL-DHA組68.35±8.2356.43±6.12M-DHA組42.18±7.26c36.62±4.69cH-DHA組22.54±4.26c17.15±3.15c

注：aP<0.05vs空白對(duì)照組；cP<0.05vs模型組。

2.3各組大鼠透射電鏡觀察超微結(jié)構(gòu)視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)見(jiàn)圖3?？瞻讓?duì)照組視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞具有均勻正常出現(xiàn)的細(xì)胞核和線粒體。模型組出現(xiàn)空泡化，染色質(zhì)邊緣化，染色質(zhì)濃縮，線粒體腫脹和嵴缺失。DHA治療后，空泡化、染色質(zhì)邊緣化、染色質(zhì)濃縮以及線粒體腫脹的不同程度改善。H-DHA組線粒體和細(xì)胞核基本正常，與空白對(duì)照組較為相似。

2.4各組大鼠視網(wǎng)膜組織TNF-α和IL-6水平比較各組大鼠視網(wǎng)膜組織TNF-α和IL-6表達(dá)水平比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=18.729、80.136，P<0.001)。與空白對(duì)照組比較，模型組大鼠視網(wǎng)膜組織TNF-α和IL-6表達(dá)水平均升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=6.846、13.079，P<0.05)。與模型組比較，M-DHA組和H-DHA組大鼠視網(wǎng)膜組織TNF-α和IL-6表達(dá)水平均降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(tM-DHA組=4.132、6.828，tH-DHA組=5.824、11.965，P<0.05)；L-DHA組降低，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05，表3)。

圖4各組大鼠視網(wǎng)膜組織相關(guān)蛋白條帶A：空白對(duì)照組；B：模型組；C：L-DHA組；D：M-DHA組；E：H-DHA組。

組別TNF-αIL-6空白對(duì)照組1.21±0.343.42±0.28模型組2.97±0.53a7.15±0.64aL-DHA組2.58±0.476.73±0.53M-DHA組1.87±0.38c4.92±0.48cH-DHA組1.46±0.35c3.61±0.34c

注：aP<0.05vs空白對(duì)照組；cP<0.05vs模型組。

組別p-PI3K/PI3Kp-Akt/AktBaxBcl-2p-NF-κBp65/NF-κBp65cleved-caspase-3空白對(duì)照組0.59±0.030.55±0.030.07±0.010.49±0.030.13±0.010.11±0.01模型組0.13±0.01a0.07±0.01a0.59±0.03a0.22±0.02a0.38±0.02a0.19±0.01aL-DHA組0.22±0.020.11±0.010.56±0.020.23±0.010.34±0.020.18±0.02M-DHA組0.39±0.02c0.26±0.02c0.32±0.02c0.29±0.02c0.26±0.03c0.16±0.03cH-DHA組0.48±0.03c0.39±0.02c0.12±0.01c0.35±0.030.15±0.02c0.13±0.02c

注：aP<0.05vs空白對(duì)照組；cP<0.05vs模型組。

2.5各組大鼠視網(wǎng)膜組織相關(guān)蛋白表達(dá)各組大鼠視網(wǎng)膜組織Bax、p-NF-κBp65和cleved-caspase-3、p-PI3K、p-Akt和Bcl-2蛋白比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=916.895、168.682、17.842、390.788、624.947、76.125，P<0.01)。與空白對(duì)照組比較，模型組大鼠視網(wǎng)膜組織Bax、p-NF-κBp65和cleved-caspase-3蛋白表達(dá)升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=40.279、27.386、 13.856，P<0.05)；p-PI3K、p-Akt和Bcl-2蛋白表達(dá)降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=35.631、37.181、18.343，P<0.05)。與模型組比較，M-DHA組和H-DHA組大鼠視網(wǎng)膜組織Bax、p-NF-κBp65和cleved-caspase-3蛋白表達(dá)降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(tM-DHA組=18.343、8.152、2.324，tH-DHA組=36.406、19.919、6.573，P<0.05)；p-PI3K、p-Akt和Bcl-2蛋白表達(dá)升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(tM-DHA組=28.482、20.813、3.184，tH-DHA組=27.111、35.054、8.832，P<0.05，圖4，表4)。

3討論

ARMD是一種眼科常見(jiàn)的視網(wǎng)膜黃斑退行性病變，由年齡、飲食、環(huán)境等多種因素引起的綜合病癥，對(duì)患者視力造成嚴(yán)重?fù)p傷[10]。目前，ARMD的發(fā)病機(jī)制尚不十分明確，但其病理已經(jīng)證實(shí)與患者視網(wǎng)膜光感受器細(xì)胞的凋亡有密切關(guān)系。因此，開(kāi)發(fā)新的能夠抑制光感受器細(xì)胞凋亡的藥物，延緩病情，減輕患者痛苦具有十分重要的意義。

DHA是人體必須的高度不飽和脂肪酸，不能由自身合成，主要從食物中獲取。DHA作用廣泛，具有抗神經(jīng)炎癥、抗氧化等功能，對(duì)帕金森、老年癡呆、黃斑變性等疾病有一定的預(yù)防作用。有報(bào)道稱(chēng)，與不含DHA藻油的大豆調(diào)和油飼養(yǎng)的大鼠相比，含DHA藻油的大豆調(diào)和油飼喂的SD大鼠視網(wǎng)膜組織細(xì)胞層次更為清楚，細(xì)胞生長(zhǎng)正常并且排列緊密，桿狀細(xì)胞、錐狀細(xì)胞清晰可見(jiàn)，說(shuō)明DHA有益于視網(wǎng)膜組織細(xì)胞的生長(zhǎng)發(fā)育[11]。艾明等[12]研究表明，DHA可抑制N-甲基-N-亞硝脲(MNU)對(duì)視網(wǎng)膜光感受器細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)的損傷，具有較好的保護(hù)作用，是一種潛在延緩視網(wǎng)膜色素變性病程進(jìn)展的有效藥物。本研究結(jié)果顯示，模型組大鼠視網(wǎng)膜總厚度、外核層和內(nèi)核層厚度較空白對(duì)照組降低，視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞層和外核層細(xì)胞凋亡指數(shù)升高，神經(jīng)節(jié)細(xì)胞出現(xiàn)空泡化，染色質(zhì)邊緣化，染色質(zhì)濃縮，線粒體腫脹和嵴缺失現(xiàn)象，提示模型組大鼠視網(wǎng)膜光感受異常，細(xì)胞凋亡。經(jīng)DHA治療后，可明顯改善視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞染色質(zhì)邊緣化和濃縮、線粒體腫脹等現(xiàn)象，增加視網(wǎng)膜總厚度、外核層和內(nèi)核層厚度，以及降低視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞層和外核層細(xì)胞凋亡指數(shù)，隨著給藥劑量的增加，視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞逐漸得到恢復(fù)，具有劑量依賴(lài)性，與相關(guān)研究報(bào)道結(jié)果一致，提示DHA可保護(hù)ARMD大鼠光感受器細(xì)胞凋亡，可能是潛在治療ARMD疾病的藥物。

為了了解DHA保護(hù)ARMD大鼠光感受器細(xì)胞凋亡的作用機(jī)制，本研究基于PI3K/Akt信號(hào)通路進(jìn)行了簡(jiǎn)單探討。本研究結(jié)果顯示，與空白對(duì)照組比，模型組大鼠視網(wǎng)膜組織p-PI3K和p-Akt蛋白表達(dá)水平降低，PI3K是一種可使肌醇環(huán)第3位羥基磷酸化的磷脂酰肌醇激酶，Akt是PI3K的下游作用靶點(diǎn)。PI3K被激活后生成的磷脂產(chǎn)物進(jìn)一步激活A(yù)kt及其下游信號(hào)級(jí)聯(lián)反應(yīng)，參與細(xì)胞的生長(zhǎng)和發(fā)育、抗凋亡等過(guò)程。近年來(lái)研究發(fā)現(xiàn)，PI3K/Akt信號(hào)通路與眼部疾病關(guān)系密切[13]， 陳春麗等[14]發(fā)現(xiàn)上調(diào)ARMD視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞PI3K/Akt信號(hào)通路，可降低細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷，發(fā)揮細(xì)胞保護(hù)作用。結(jié)合文獻(xiàn)本研究結(jié)果提示PI3K/Akt信號(hào)通路可能參與ARMD的發(fā)生。本研究發(fā)現(xiàn)玻璃體注射DHA后，p-PI3K和p-Akt蛋白水平升高，隨著注射劑量的升高，p-PI3K和p-Akt蛋白水平逐漸升高。玻璃體內(nèi)注射DHA可減輕NaIO3誘導(dǎo)的ARMD大鼠模型的感光細(xì)胞損傷[7]。DHA抑制PI3K活性，進(jìn)而降低非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)細(xì)胞活力，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡[15]?；诖?，本研究推測(cè)DHA可能通過(guò)激活PI3K/Akt信號(hào)通路，促進(jìn)p-PI3K和p-Akt蛋白表達(dá)，DHA可能也通過(guò)PI3K/Akt信號(hào)通路緩解視網(wǎng)膜組織損傷，進(jìn)而發(fā)揮對(duì)ARMD的保護(hù)作用。本研究結(jié)果顯示，模型組大鼠視網(wǎng)膜組織Bax、p-NF-κBp65和cleved-caspase-3蛋白、炎性因子TNF-α和IL-6表達(dá)升高，p-PI3K、p-Akt和Bcl-2蛋白表達(dá)降低；研究表明PI3K/Akt信號(hào)通路可促進(jìn)Bcl-2蛋白表達(dá)，抑制Bax蛋白表達(dá)，抑制細(xì)胞凋亡[16]；Dilly等[17]研究發(fā)現(xiàn)，激活PI3K/Akt信號(hào)通路能夠活化NF-κB上調(diào)TNF-α、IL-6等炎性因子的表達(dá)；仇志富等[18]研究發(fā)現(xiàn)，PI3K/Akt信號(hào)通路可抑制caspase-9磷酸化，降低caspase-3表達(dá)，降低細(xì)胞凋亡。以往研究證實(shí)，激活PI3K/Akt信號(hào)通路，可增強(qiáng)Bcl-2表達(dá)，下調(diào)Bax表達(dá)，促進(jìn)慢性高眼壓SD大鼠初級(jí)視皮質(zhì)神經(jīng)元損傷的修復(fù)，改善神經(jīng)元細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)以及降低眼壓[19]?；谝陨涎芯客茰y(cè)ARMD大鼠視網(wǎng)膜組織損傷后下調(diào)PI3K/Akt信號(hào)通路，進(jìn)而激活caspase-3通路，造成ARMD大鼠光感受器細(xì)胞凋亡。本研究結(jié)果顯示，經(jīng)DHA干預(yù)后視網(wǎng)膜組織Bax、p-NF-κBp65和cleved-caspase-3蛋白表達(dá)及炎性因子TNF-α和IL-6表達(dá)均降低，具有劑量依賴(lài)性。研究發(fā)現(xiàn)DHA可能通過(guò)Nrf2途徑誘導(dǎo)視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞表達(dá)HO-1，降低視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞凋亡，從而發(fā)揮對(duì)視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞的保護(hù)作用[5]。推測(cè)DHA可能通過(guò)上調(diào)PI3K/Akt信號(hào)通路降低ARMD大鼠光感受器細(xì)胞凋亡，進(jìn)而發(fā)揮對(duì)ARMD的保護(hù)作用。

綜上所述，DHA可降低ARMD大鼠光感受器的細(xì)胞凋亡，其可能通過(guò)激活PI3K/Akt信號(hào)通路，上調(diào)p-PI3K和p-Akt蛋白表達(dá)，進(jìn)而抑制下游凋亡相關(guān)蛋白表達(dá)，從而發(fā)揮抗凋亡作用的，是治療ARMD的潛在藥物。本研究也存在一些不足，ARMD機(jī)制較復(fù)雜，DHA是否通過(guò)其它途徑發(fā)揮保護(hù)作用，還有待后續(xù)深入研究。